孟相秋
- 作品数：8 被引量：38H指数：4
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- 抗大肠杆菌肠毒素卵黄抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2014年
- 为了研究用不耐热肠毒素B亚基(LTB)和耐热肠毒素(STa)的融合蛋白制备鸡卵黄抗体的方法及其中和作用,试验将LTB和STa的编码基因串联并在大肠杆菌中表达获得了重组蛋白,以重组蛋白为免疫原免疫8月龄海兰蛋鸡制备了卵黄抗体,分别用兔肠段结扎试验和乳鼠灌胃试验进行了卵黄抗体对不耐热肠毒素(LT)和STa的体内中和试验。结果表明:用LTB和STa融合蛋白免疫产蛋鸡可诱导产生抗LTB和STa的卵黄抗体,其中抗LTB效价最高可达1∶8 647,抗STa效价最高可达1∶768;卵黄抗体对LT和STa均有中和作用。说明用融合蛋白作为免疫原制备的卵黄抗体具有抗LT和STa的生物学活性,对仔猪大肠杆菌性腹泻的临床治疗有潜在的应用价值。
- 赵姝静李丹丹朱颖韩林林李金萍杜元策孟相秋师东方
- 关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素卵黄抗体
- 黑龙江省犊牛腹泻粪便中大肠杆菌的毒力基因和耐药性调查
- 犊牛大肠杆菌性腹泻是由产肠毒素性大肠杆菌引起的一种消化道传染病,表现为剧烈腹泻、脱水甚至死亡,给养牛业带来严重的经济损失。临床上抗生素的不规则使用,加剧了细菌的耐药性,耐药菌株不断增多,耐药谱越来越广。目前该病主要采用不...
- 孟相秋
- 关键词：犊牛腹泻大肠杆菌多重PCR毒力基因耐药性
- 文献传递
- 大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立被引量：9
- 2015年
- 目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47×103 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。
- 孟相秋袁超文刘文鑫关玮琨杜元策李丹丹赵姝静唐杰师东方
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素多重PCR
- 重组大肠杆菌LTB-Stx2B蛋白的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究被引量：3
- 2013年
- 为了筛选大肠杆菌疫苗的有效抗原,本研究表达了重组蛋白Stx2B和重组蛋白LTB-Stx2B,并分别用重组蛋白Stx2B、表达了重组蛋白LTB-Stx2B的灭活菌液和灭活菌裂解液免疫昆明鼠,比较了不同抗原诱导小鼠的体液免疫应答能力;体内体外实验对免疫血清的毒素中和作用进行了检测。结果显示,重组蛋白LTB-Stx2B能诱导小鼠更高水平的体液免疫应答,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠;小鼠二免后的血清不仅能中和LT和Stx2对小鼠的毒性作用,而且能中和Stx2对Vero细胞的毒性,其中和效价为1:52,高于其他免疫原组血清。该研究为大肠杆菌疫苗的研究奠定了基础。
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- 关键词：大肠杆菌体液免疫
- 牛源产Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及重组毒素制备被引量：5
- 2014年
- 产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌进行了测序及分析。进一步将LT-Ⅱcl毒素基因双顺反子的ORF克隆入pET30a表达载体、转化Rossatta感受态并诱导表达重组LT-Ⅱcl毒素,经Y-1小鼠肾上腺皮质细胞对重组毒素进行了初步的毒性验证。结果显示,所分离的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中,有8株表达LT-Ⅱcl毒素,1株表达LT-Ⅱc4毒素,1株表达LT-Ⅱc6毒素。SDS-PAGE和Western Blot结果表明成功地制备出LT-Ⅱcl重组毒素,该重组毒素可以使Y-1小鼠肾上腺皮质细胞发生明显的病变,其细胞最小致死量为17.8 pg。本研究为中国国内首次分离到牛源产LT-Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌,为深入研究LT-Ⅱ毒素奠定了基础。
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- 关键词：重组毒素细胞毒性
- 东北地区仔猪腹泻大肠杆菌EAST1基因调查被引量：5
- 2016年
- 大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规模化猪场共采集断奶仔猪腹泻粪便样品290份,经染色镜检和生化试验鉴定出362株大肠杆菌,应用PCR检测方法对STa、STb、LTa、LTb、paa、AIDA-I、afa E、irp2和EAST1等毒力基因进行检测。结果表明:有286株大肠杆菌携带毒力基因,其中89株(占31.12%)携带EAST1毒力基因,只含有EAST1毒力基因的有49株(占17.13%),同时携带其他毒力基因的有40株(占13.99%)。EAST1毒力基因可以协同F1菌毛、paa基因频繁交叉出现在同一致病菌中,但这些毒力基因编码的毒素之间是否存在协同致病关系尚需进一步研究。
- 唐杰袁超文刘文鑫孟相秋关玮琨李星月赵志腾王时葛建松郭德民江松泽师东方
- 关键词：腹泻
- 重组大肠杆菌肠毒素蛋白LTA_(192)-STa_(13)的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究被引量：1
- 2015年
- 为研究重组大肠杆菌肠毒素融合蛋白LTA192-STa13的免疫原性,本研究将产肠毒素大肠杆菌(ETEC)elt A和est A基因定点突变后构建融合基因,进行重组蛋白LTAR192G-STaG13Q的表达。利用纯化的重组蛋白和灭活菌液分别免疫小鼠,比较不同抗原诱导小鼠体液免疫应答能力,以及体外免疫血清对毒素的中和作用。结果显示,各组免疫小鼠均可以产生高滴度抗LTA和STa抗体,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠,其中蛋白免疫组血清抗体效价更高。体内外中和试验证明,实验组小鼠三免后的血清能够中和LT和STa毒素对实验鼠的毒性作用,并且能够中和LT对Y-1细胞的毒性作用,蛋白免疫组血清抗体中和效价可达到1∶89.13,明显高于灭活菌免疫组。研究表明,重组蛋白LTA192-STa13对小鼠具有良好的免疫原性,能够诱导免疫鼠产生良好的体液免疫应答,可以作为ETEC亚单位疫苗的候选抗原。
- 杜元策沙木哈吾.别开刘文鑫关玮琨孟相秋韩林林李金萍袁超文唐杰李星月赵志腾师东方
- 关键词：大肠杆菌肠毒素重组蛋白体液免疫
- 水貂犬瘟热的流行、症状及预防被引量：3
- 2016年
- 犬瘟热是由副粘病毒科、麻疹病毒属的犬瘟热病毒（CDV）引起的一种急性、高度传染性、高死亡率的疾病,属三类动物疫病。主要感染犬科及猫科动物,侵染动物的呼吸、消化和神经系统。本病已广泛分布于世界各国,随着病毒变异株的出现,更加剧了该病的流行和危害。1流行特点水貂犬瘟热于1928年被Rudolf首次发现,我国1973年在黑龙江省首次报道了犬瘟热的流行,后蔓延至全国。水貂犬瘟热一年四季均可发病,以夏秋为多发季节,
- 王宇菲和彦良孟相秋赵建增
- 关键词：瘟热犬瘟热病毒病毒变异株
