李树宝
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGF_(︱2︱)cDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化被引量：7
- 2009年
- 背景:发展一种安全有效的方法来促进骨缺损是修复重建外科面临的重要问题,自体骨移植仍是目前优先考虑的选择,但供区有限且不可避免地对供区造成新的损害;同种异体骨移植存在免疫排斥反应;非骨性材料移植物在临床实践中的并发症仍居高不下。目的:探讨壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞基因工程学体外实验,于2007-09/2008-04在安徽医科大学与中国医科大学完成。材料:清洁级新西兰大白兔8只,由安徽医科大学实验动物中心提供。壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4为课题组自行构建。方法:无菌条件下抽取兔骨髓,Percoll法体外分离培养骨髓间充质干细胞,通过换液和贴壁吹打法进行纯化扩增。第3代骨髓间充质干细胞80%融合后,按1×108L-1密度接种,实验组采用壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4进行转染,对照组不转染质粒,继续以含10%FBS的L-DMEM普通培养基进行培养21d。主要观察指标:碱性磷酸酶及茜素红染色检测细胞分化情况,扫描电镜观察细胞结构变化。结果:转染14d后实验组碱性磷酸酶染色呈强阳性表达,茜素红染色出现大量棕红色的钙结节,电镜观察细胞内含有大量碱性磷酸酶的小泡,细胞周围大量基质分泌;对照组碱性磷酸酶与茜素红染色均呈阴性,电镜下细胞内几乎没有含碱性磷酸酶的小泡。结论:兔骨髓间充质干细胞在体外经壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染后,可定向分化为成骨细胞。
- 李树宝潘锋白欣王帮河丁浩汪春兰何金生张梅赵宇
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨骨形成蛋白
- 巯基烷基化壳聚糖载绿色荧光蛋白质粒基因纳米粒子的制备与研究被引量：2
- 2010年
- 合成了新型的基因载体巯基烷基化壳聚糖(TACS),采用复凝聚法制备了巯基烷基化壳聚糖基因纳米粒子,并表征其形态和粒径。利用体外转染实验定性评估了纳米粒子的转染效率。结果表明,粒子形态不很均一,粒径在390nm左右;凝胶电泳实验证明了载体能有效地包裹和保护基因不受DNaseⅠ酶的消化;溶解实验证实了巯基化增强了TACS的水溶性;体外基因转染实验证实了TACS能够在人胚胎肾细胞(HEK293)转染基因,并且其转染效率远高于壳聚糖纳米粒子。这些结果表明,巯基烷基化壳聚糖有望成为有价值的基因载体。
- 慕卿赵伟亮白欣李树宝卢迪方月娥赵宇
- 关键词：壳聚糖烷基化基因转染水溶性
- 壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化
- 目的:进一步研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分离和培养方法及其生物学特性,为利用MSCs作为种子细胞治疗骨缺损等多种疾病提供实验基础,鉴定真核双表达质粒pIRES-hVEG...
- 李树宝
- 关键词：骨形成蛋白血管内皮生长因子骨髓间充质干细胞成骨细胞
- 文献传递
- 新型基因载体巯基烷基化壳聚糖的制备及体外性质的初步研究被引量：7
- 2009年
- 目的制备巯基烷基化壳聚糖(TACS)载基因纳米粒,并对其体外相关性质进行初步研究。方法复凝聚法制备TACS/pDNA复合纳米粒子,并用透射电镜对其的形态和粒径进行观察和表征;凝胶阻滞分析观察其对基因的保护情况;以Lipofectamine 2000转染试剂作为阳性对照,检测其对人胚胎肾细胞(HEK293)的转染活性;四噻氮唑盐(MTT)比色法测定其对细胞活性的影响。结果TACS/pDNA复合纳米粒子形态不很均一,粒径在390nm左右;凝胶阻滞分析证明了载体能有效地包裹和保护基因不受DNaseⅠ酶的消化;体外基因转染实验证实了TACS纳米粒子能够有效地转染HEK293,其转染效率远高于壳聚糖纳米粒子,略低于脂质体;MTT测定其对细胞活力影响甚微,对细胞的毒性明显低于脂质体。结论TACS有望成为一种有价值的新型基因载体。
- 白欣慕卿李树宝张梅何金生方月娥汪春兰赵宇
- 关键词：壳聚糖转染
