蒋靓
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部医学生物技术研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人VSIG4基因转染细胞的构建及其对T细胞的共刺激效应的初步研究被引量：3
- 2009年
- 目的:分别构建含有人VSIG4基因两种不同变异体(VSIG4L和VSIG4S)的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达VSIG4L和VSIG4S基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共刺激作用及可能机制。方法:从人肺cDNA文库中扩增出VSIG4L和VSIG4S的全长基因,并分别克隆入T载体中,再双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term中,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,以其培养上清感染L929细胞72小时后,经Zeocin筛选出稳定表达VSIG4L或VSIG4S分子的L929细胞株;采用RT-PCR和流式细胞仪分析VSIG4分子的表达,MTT和ELISA分别检测T细胞增殖及IL-2的分泌。结果:构建了含人VSIG4L基因和VSIG4S基因的重组逆转录病毒载体,并获得含有VSIG4L基因和VSIG4S基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人VSIG4L和VSIG4S分子的L929转基因细胞;该转基因细胞具有体外抑制T细胞增殖、活化和IL-2分泌的作用。结论:构建了稳定表达人VSIG4L和VSIG4S膜型分子的细胞株,该分子两种不同变异体在体外均可抑制T细胞增殖和IL-2分泌。
- 张世杰王蕾王月颖蒋靓蒋玉平高超张学光顾宗江
- 关键词：逆转录病毒基因转染共刺激分子
- 鼠抗人FL单克隆抗体的制备和可溶性FL酶联检测试剂盒的研制
- FL作为Ⅲ型酪氨酸激酶受体的配体家族成员,是一种可溶形式或跨膜形式的蛋白,在各种组织细胞中表达,包括造血细胞和骨髓基质细胞。联合其他生长因子,FL能够促进干细胞、骨髓和淋巴祖细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞等的增殖或分化,...
- 蒋靓
- 关键词：FL单克隆抗体酶联免疫反应
- 文献传递
- 可溶性FL酶联检测试剂盒的研制及其运用
- 2010年
- 目的建立灵敏、特异和稳定的人可溶性FL(sFL)酶联检测试剂盒,探讨其临床检测意义。方法采用鼠抗人FL单克隆抗体2D2为包被抗体,识别人FL不同位点的商品化多克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心的人sFL酶联免疫检测方法(sFL-ELISA)。在此基础上,分别对不同血清样本中sFL的含量进行定量分析。结果成功研制人sFL酶联检测试剂盒,灵敏度为7.8pg/ml。该试剂盒4℃放置3个月,离散度(CV%)<7.6%,加入rh-FL/Fc重组蛋白后的回收率在97%～110%。应用该试剂盒测得的健康供血员、再生障碍性贫血患者和白血病患者血清中sFL含量分别为(328.6±42.89)、(2607±286.8)、(1091±255.2)pg/ml。结论研制成灵敏、特异和稳定的人sFL酶联检测试剂盒,能对血清中sFL进行准确定量分析,具有良好的应用前景。
- 蒋靓蒋玉平张世杰王凤鸣孙静顾宗江
- 关键词：酶联免疫反应白血病再障
- 人VSIG4-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究被引量：2
- 2009年
- 为获取人VSIG4-Fc融合蛋白,并研究其对T细胞的调节效应。首先采用PCR获取人VSIG4基因的胞外段序列及人IgG1Fc恒定区序列,将两者顺次连接插入逆转录病毒载体,以293T为包装细胞,制备含病毒颗粒的培养上清,反复感染CHO细胞,Zeocin筛选能稳定分泌VSIG4-Fc蛋白的基因转染细胞并以RT-PCR、Dot-blot及Western blot等鉴定。以MTT和ELISA分别检测VSIG4-Fc融合蛋白对T细胞增殖及IL-2分泌的影响。结果成功获取了CHO基因转染细胞,该细胞能稳定分泌VSIG4-Fc蛋白,纯化后的VSIG4-Fc蛋白能与T细胞表面未知受体结合,并具有体外抑制T细胞增殖、活化和IL-2分泌的作用。
- 张世杰王蕾王月颖李道明朱守兵蒋玉平蒋靓张学光顾宗江
- 关键词：逆转录病毒融合蛋白共刺激分子
- 两株鼠抗人VSIG4单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究
- 2010年
- 目的:制备鼠抗人VSIG4分子单克隆抗体(mAb)及对其生物学特性进行鉴定。方法:以高表达膜型VSIG4分子的基因转染细胞L929/VSIG4L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经流式细胞术检测和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人VSIG4分子的杂交瘤细胞株;采用间接免疫荧光法、Westernblot、竞争抑制试验及MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人VSIG4mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为9A7和9D5。对mAb生物学特性的研究结果表明,2株mAb均能识别巨噬细胞以及Jurkat、THP-1、H446等肿瘤细胞株表面的VSIG4分子。对T细胞增殖抑制的阻断实验显示,这2株抗体对VSIG4分子抑制T细胞增殖均有阻断作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人VSIG4功能性mAb,为进一步研究VSIG4及其未知受体的生物学功能奠定了基础。
- 张世杰王蕾汪家敏陈曦蒋靓王月颖胡玉敏张学光顾宗江
- 关键词：杂交瘤单克隆抗体巨噬细胞
- 小鼠髓系树突状细胞表面疱疹病毒侵入介体表达的变化
- 2010年
- 目的探讨小鼠髓系树突状细胞(BMDC)共刺激分子疱疹病毒侵入介体(HVEM)表达的变化。方法将促DC成熟活化因子LPS、TNF-α、2A抗体、1c10抗体和免疫负性调节因子IL-10加入到各组BMDC中,观察BM-DC上HVEM表达的变化。结果加入促成熟活化因子的各组BMDC上HVEM表达与对照组明显下调(P<0.05)。而加入免疫负性调节因子的BMDC上HVEM表达较对照组明显上调(P<0.05)。结论促成熟活化因子有下调BMDC上HVEM表达的作用,而免疫负性调节因子有上调BMDC上HVEM表达的作用。
- 蒋玉平蒋靓陈曦张学光顾宗江
- 关键词：树突状细胞
