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乙型脑炎病毒分型基因芯片的制备被引量：7: 2011年; 目的制备乙型脑炎病毒分型基因芯片。方法根据乙型脑炎病毒的基因组学序列,应用生物学软件设计乙型脑炎病毒分型引物及探针,制备JEV分型基因芯片。PCR扩增荧光标记的片段与固定于玻片上的探针杂交后,进行芯片清洗、扫描及结果分析。通过特异性、灵敏性、重复性试验验证,建立分型基因芯片检测方法。结果杂交显示,设计的6条探针中有3条特异地与相应的标记样品杂交并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号,其中1号探针能特异性检出乙型脑炎病毒,4、5号探针可对JEV-Ⅰ和JEV-Ⅲ型进行分型。制备的基因芯片具有可靠的重复性。结论建立的基因芯片具有高特异性、灵敏性及良好的重复性,可以快速、准确、高通量地对乙型脑炎病毒进行分型检测。; 郭欢欢凡敏鲁会军刘振江齐延新秦艳青岳云强袁森崔鹤馨田宇飞刘昊田明尧金宁一; 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片

柔嫩艾美耳球虫子孢子抗原的制备被引量：1: 2011年; [目的]为进一步研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的单克隆抗体奠定基础。[方法]给肉鸡雏接种E.tenella纯种孢子化卵囊,第5～10天收集鸡的粪便并标记、粗提,经卵囊孢子化、纯化孢子化的卵囊、计数卵囊后,最终制备出子孢子抗原。[结果]该方法制备E.tenella子孢子抗原较其他方法简单易行,不需太多专门仪器和培养液,一般实验室均可进行,效果良好。但所用时间较长。[结论]该试验成功分离提纯出了鸡的E.tenella卵囊,并获得了蛋白浓度较高的抗原,为单克隆抗体的制备提供了有力保障。; 李巍王丹王哲凡敏张颖赵权; 关键词：柔嫩艾美耳球虫

猪源新城疫病毒F和HN基因的表达及其对BHK-21细胞膜的融合作用: 2012年; 为了分析猪源新城疫病毒F和HN基因对BHK-21细胞膜的融合作用,采用RT-PCR方法从猪源新城疫病毒JL01株中扩增获得了F蛋白基因,并根据GenBank上登录的猪源新城疫病毒HN基因序列,合成了HN基因,分别将F和HN基因克隆到pKS载体上。又从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增得到T7RNA聚合酶基因,将报告基因EGFP与T7RNA聚合酶基因一起定向克隆到痘苗病毒转移载体pSTK上。再将pKS-F、pKS-HN与pSTK-T7-EGFP共转染BHK-21细胞,转染后16h,用Giemsa染液进行染色,可见明显的细胞融合现象。该研究证明猪源新城疫病毒JL01株的F和HN蛋白共同作用于BHK-21细胞使细胞膜融合。; 刘振江鲁会军李国江刘昊靖杰刘燕瑜岳云强郭欢欢凡敏秦艳青金宁一; 关键词：猪源新城疫病毒 T7

重组H8N4亚型禽流感病毒的拯救: 2012年; 将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。; 崔鹤馨李沂田宇飞袁森凡敏靖杰齐延新郭欢欢田明尧金宁一; 关键词：病毒拯救禽流感病毒重组病毒

基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒检测基因芯片的建立被引量：3: 2012年; 根据GenBank中收录的基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒基因的保守序列,合成2种病毒E基因序列及引物,设计针对2种病毒的寡核苷酸探针,制备基孔肯亚病毒与辛德毕斯病毒特异性检测基因芯片,并对该芯片的灵敏性、特异性和重复性进行了验证。结果显示,所建立基因芯片检测方法的灵敏度是普通PCR方法的100倍。利用所制备的基因芯片,能检测到基孔肯亚病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号,阴性对照病毒(基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒,基因Ⅲ型流行性乙型脑炎病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒及流感病毒)均无杂交信号。本试验初步建立了基孔肯亚病毒与辛德毕斯病毒特异性基因芯片检测方法,该方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯亚病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定。; 凡敏田明尧赵权郭欢欢任静强刘昊刘振江岳云强袁森崔鹤馨鲁会军田宇飞金宁一; 关键词：基孔肯亚病毒辛德毕斯病毒基因芯片

猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点对BHK-21细胞特异性膜融合的影响被引量：1: 2011年; 目的研究猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点区氨基酸序列对其特异性膜融合作用的影响。方法采用基因定点突变及基因重组的方法,测定突变猪源新城疫病毒JL01株F蛋白裂解位点区基因序列,并将阳性突变质粒与猪源新城疫病毒HN基因共转染BHK-21细胞,通过面积判断法和细胞计数法分析细胞融合效率。结果突变株RF4细胞融合效率为0.58±0.10,与野毒株的0.55±0.02接近。RF5融合效率较高,为0.69±0.05;RF3融合效率较低,为0.25±0.02。结论猪源新城疫病毒F蛋白裂解位点的改变对其特异性膜融合作用有一定影响。; 刘振江鲁会军李国江刘昊郭欢欢刘燕瑜岳云强凡敏陆飞秦艳青金宁一; 关键词：猪源新城疫病毒融合蛋白裂解位点

共表达PRRSV ORF5和ORF6基因重组核酸疫苗对断奶仔猪的免疫效果研究被引量：4: 2011年; 目的评价猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6对断奶仔猪的免疫效果。方法分别以pVAX-ORF5-2A-ORF6+Quil A、pVAX-ORF5-2A-ORF6、pVAX空质粒和PRRSV弱毒疫苗对断奶仔猪进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平、T淋巴细胞增殖程度和CTL杀伤活性,评价其免疫效果。结果重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6能够刺激猪体产生PRRSV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性;免疫仔猪血清IL-2和IFN-γ水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),加入免疫佐剂Quil A的实验组IFN-γ水平显著高于未加佐剂的实验组(P<0.05)。结论重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6可诱导免疫仔猪产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答,有望成为抗PRRSV感染的新型候选疫苗。; 岳云强鲁会军刘燕瑜任静强刘振江王金辉郭欢欢凡敏金扩世金宁一; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗

基孔肯亚与辛德毕斯病毒检测基因芯片的建立及初步应用: 基孔肯亚（Chikungunya, CHIK）热和辛德毕斯（Sindbis, SIND）热是两种自然疫源性人兽共患传染病,主要通过吸血节肢动物叮咬敏感的脊椎动物,使脊椎动物发病从而传播疾病。基孔肯亚热和辛德毕斯热在世界范...; 凡敏; 关键词：基因芯片基孔肯亚病毒

重组辛德毕斯病毒E基因痘苗病毒的构建被引量：4: 2011年; 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别连接至痘苗病毒转移载体pSTK,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP。采用脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒。利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性。结果证明辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性。表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒的成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础。; 刘振江刘昊刘燕瑜郭欢欢凡敏岳云强陆飞秦艳青李国江鲁会军金宁一; 关键词：辛德毕斯病毒绿色荧光蛋白重组痘苗病毒

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凡敏

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