刘国庆
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：北京大学医学部更多>>
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- 通过真核细胞表达系统获得重组人釉原蛋白
- 2008年
- 目的构建重组人釉原蛋白基因的真核表达系统,并建立稳定表达该蛋白的细胞系。方法取26周龄引产胎儿的牙胚组织,提取总RNA,用RT-PCR技术扩增釉原蛋白基因片段,插入中间表达载体pGEM!-T。经双酶切后,再与真核表达载体pcDNA3.1TM/myc-His(-)B相连接,构成最终的表达质粒,将该重组表达质粒转染至HEK293A细胞,用G418筛选出阳性细胞克隆,并建立稳定表达釉原蛋白的细胞系。结果通过测序表明,人釉原蛋白基因被成功地连接到了真核表达载体上。将该表达系统转染HEK293A细胞后,进行Western Blot检测,证明有相对分子质量约32000的釉原蛋白表达。结论本实验成功构建了重组人釉原蛋白真核表达系统,建立了稳定细胞系,为获得高纯度的釉蛋白,进一步研究蛋白质功能奠定了基础。
- 孙樱林黄薇刘国庆冯海兰
- 关键词：人釉原蛋白真核表达稳定细胞系
