尹江丽
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定
- 2014年
- 目的制备ANXA2特异性单克隆抗体（McAb），为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB／c小鼠．利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞，用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3＋标记后，分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗，利用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化，获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞，间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX．4T．1均未发生交叉反应．抗体特异性良好．16株抗体腹水效价为1：8000，1：256000，培养上清效价为1：256～1：512，纯化的腹水单抗经配对试验，2D6和9H9-Eu3＋配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞．能用于后续研究。
- 尹江丽陈少琅万勇李明
- 关键词：单克隆抗体ELISA
- Annexin A2蛋白单克隆抗体制备及其时间分辨荧光免疫分析方法的初步建立
- 研究背景及目的
肝癌/(Liver cancer/)是一种严重危害人类健康的恶性肿瘤,是我国最常见的恶性肿瘤之一。全球每年新发肝癌约为56万例,我国占其中近1//2,为欧美国家的5-10倍。在我国肝癌的病死率占恶...
- 尹江丽
- 关键词：单克隆抗体
- 文献传递
- 稳定过表达、干扰RN181的MHCC97L细胞系建立及RN181功能的初步研究被引量：5
- 2013年
- 目的构建过表达和干扰RN181基因的肝癌MHCC97L重组细胞系,并研究RN181对该细胞体外增殖的影响。方法基于基因克隆技术,构建plncx2-GFP-IRES/RN181重组载体,常规鉴定后,与pVSV-G共转染GP2-293细胞包装逆转录病毒。该病毒与RN181干扰慢病毒分别感染MHCC97L细胞,流式分选表达绿色荧光的细胞,RT-PCR、Western blotting鉴定后,CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况。结果重组载体构建成功,重组细胞荧光良好,RT-PCR、Western blotting分别证实重组细胞中RN181的mRNA和蛋白表达水平在重组细胞系间均出现差异有统计学意义(P<0.05)。增殖实验显示RN181上调后细胞生长减慢,克隆数也显著少于对照组(P<0.05),而RN181干扰后上述现象可得到逆转。结论成功构建了过表达和干扰RN181的MHCC97L重组细胞系,初步证实了RN181在体外对MHCC97L细胞增殖的抑制作用。
- 王小波彭迎霞张贤尹江丽李明
- 关键词：基因克隆
