周利苹
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 产HSA-CP融合蛋白毕赤酵母的发酵条件优化被引量：4
- 2009年
- 为提高重组毕赤酵母生产人血清白蛋白-C肽融合蛋白(HSA-CP)的产量和生产强度,在摇瓶条件下考察了甲醇诱导时间和浓度对目的蛋白产量的影响。结果表明,质量浓度10 g/L的甲醇诱导72 h最适于产物表达。通过对7L发酵罐中各因素的优化,得到最佳条件为:初始甘油质量浓度10 g/L,30℃培养,菌体生长期和诱导期的pH及溶氧分别控制在pH5.0、30%溶解O2或pH6.0、15%的溶解O2。10 g/L的甲醇诱导72 h,最终使干细胞质量浓度达到56.43 g/L,目的蛋白产量达368.45 mg/L。生产强度为3.920 mg/(L.h),目标蛋白的比生产速率为5.12 mg/(L.h)。
- 孔静静王长城杨海麟张玲周利苹金坚王武
- 关键词：巴斯德毕赤酵母发酵优化
- 人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株。方法根据表达系统的密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达载体pPIC9K中,重组质粒pPIC9K-HSA-CP经SalⅠ线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,表型筛选Mut+转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达。结果融合基因约为1 900bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析表明表达融合蛋白的相对分子量约为70kD,摇瓶培养表达量为140mg/L,Western blot鉴定显示表达的融合蛋白为HSA和CP的杂合分子。结论实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用。
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- 关键词：C肽人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母
