龚霞
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中南大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- U6/H1双启动子siRNA表达框架构建及其对肿瘤细胞端粒酶活性的干扰作用被引量：2
- 2014年
- 目的:构建针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子siRNA表达框架(SEC),并观察其转录产物对HeLa细胞端粒酶活性的干扰作用。方法:利用融合PCR技术,针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区构建3条U6/H1双启动子SEC以及针对其3'端非翻译区构建1条U6/H1双启动子SEC,对各SEC鉴定后,分别转染人宫颈癌HeLa细胞,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测HeLa细胞的端粒酶活性。结果:4种针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC均成功构建,转染HeLa细胞后,对端粒酶活性的抑制率分别为36.8%、57.39%、80.47%、70.31%。结论:针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC的成功构建,为开展肿瘤端粒酶基因干扰的实验研究提供了新的有效手段。
- 龚霞张慧慧彭剑雄罗建新
- 关键词：端粒末端转移酶RNA干扰
- pMaxGFP导入人肝癌HepG_2细胞中磷酸钙转染法的应用条件优选
- 2014年
- 目的优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件。方法取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用磷酸钙转染法将pMaxGFP导入HepG2细胞,转染前1 h换不同血清浓度的新鲜培养液培养HepG2细胞,血清浓度分别为无血清、1%、2%、5%、10%、15%。转染48 h后以倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,评估转染效率,同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率,优选出最适血清浓度。在最适血清浓度条件下,磷酸钙转染法将pMaxGFP转染贴壁状态和悬浮状态的HepG2细胞,共分为A、B、C、D、E 5组,分别代表转染贴壁状态、悬浮状态3×104细胞/孔、4×104细胞/孔、5×104细胞/孔、6×104细胞/孔。转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,评估转染效率,同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率,优选出最适的细胞状态和细胞密度。结果 48 h后,无血清组HepG2细胞大量死亡,而其他组有较少部分细胞死亡。1%、2%、5%、10%、15%血清浓度的转染效率分别为30.92%±1.29%、30.10%±1.05%、21.27%±0.63%、19.10%±0.51%、10.44%±1.42%,血清浓度为1%、2%时的转染效率明显高于其他血清浓度,P<0.05;1%、2%、5%、10%、15%血清浓度的细胞存活率分别为76.01%±0.94%、89.68%±0.68%、92.38%±1.02%、93.36%±1.35%、93.49%±0.91%,血清浓度为2%时的细胞存活率明显高于1%血清浓度。在转染培养基血清浓度为2%条件下,A、B、C、D、E组转染效率分别为30.74%±0.50%、6.38%±0.28%、31.41%±0.42%、30.94%±0.47%、1.41%±0.27%,A、C、D组转染效率明显高于B、E组,P﹤0.05;A、B、C、D、E组细胞存活率分别为91.76%±0.99%、88.40%±1.29%、88.38%±1.08%、87.48%±0.78%、64.45%±0.55%,A、B、C、D组细胞存活率明显高于E组。结论优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中的磷酸钙转染法应用条件为转染培养基中血清浓度2%、悬浮状态下细胞密度为4×104细胞/孔或5×104细胞/
- 徐慧龚霞彭剑雄
- 关键词：细胞转染细胞存活率
- 体外构建双启动子SECs及其对HepG2细胞端粒酶活性的干扰作用
- 目的：构建针对端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的H1/U6双启动子表达框架(siRNA expression cassettes,SECs)...
- 龚霞
- 关键词：人肝癌细胞
- 文献传递
- 靶向hTERT人工miRNA表达框架的构建及其对HepG2细胞端粒酶活性的抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的:构建针对h TERT基因的人工mi RNA表达框架,并验证其对Hep G2细胞端粒酶活性的抑制作用。方法:应用融合PCR技术针对不同位点设计并构建3个靶向h TERT的人工mi RNA表达框架,对各表达框架鉴定后,将其单独或两种共转染Hep G2细胞,采用TRAP-银染法和TRAP-二聚体蝎形探针荧光定量PCR法检测细胞端粒酶活性。结果:3个针对h TERT基因的人工mi RNA表达框架均成功构建,单独或共转染Hep G2细胞后,Hep G2细胞的端粒酶活性均被不同程度的抑制,且两种表达框架共转染的抑制作用明显大于单独转染,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:靶向h TERT基因的人工mi RNA表达框架能有效而特异抑制Hep G2细胞端粒酶活性,多位点联合抑制是一种有效的实验方案。
- 徐慧龚霞赵丹丹范张玲彭剑雄
- 关键词：RNA干扰
- 体外构建双高动子SECs及其对HepG2细胞端粒酶活性的干扰作用
- 目的:构建针对端粒酶逆转录酶(human telomerase reversetranscriptase，hTERT)基因的H1/U6双启动子表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)并研...
- 龚霞
- 关键词：RNA干扰端粒酶逆转录酶HEPG2细胞
- 文献传递
