张鑫
- 作品数：8 被引量：23H指数：4
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体被引量：3
- 2015年
- 研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分子量约为71 ku的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-Intein融合蛋白,应用Chitin-Sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western Blot分析抗体特异性。结果表明:应用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
- 邓晨于佩峰张鑫王梦云吕岩艾永兴
- 关键词：内肽酶多克隆抗体
- RNAi沉默HMGA1基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:筛选HMGA1基因沉默稳定转染肝癌细胞株,检测沉默后肿瘤细胞凋亡、周期和增殖的变化。方法:靶向HMGA1的RNAi载体转染肝癌细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株并鉴定;MTT法和FACS检测细胞增殖、凋亡及细胞周期。结果:成功建立基因沉默HMGA1稳定细胞株;HMGA1基因沉默后,细胞凋亡百分率(29.46±3.04%)明显高于质粒对照组和空白对照组(1.96±0.76%和2.04±0.70%,P<0.01);G0-G1期细胞百分率(75.21±2.35%)明显高于质粒对照组和空白对照组(37.98±3.02%和39.23±3.63%,P<0.01),G2-S期(24.79±2.35%)显著低于质粒对照组和空白对照组(62.03±3.01%和60.77±3.63%,P<0.01);MTT检测显示,HMGA1沉默细胞增殖与质粒对照组和空白对照组相比显著降低(P<0.01或0.05)。结论:基因沉默HMGA1可促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖。
- 朱明光张鑫袁红艳杨巍常雅萍
- 关键词：RNAIHMGA1细胞凋亡细胞周期
- 林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响被引量：5
- 2014年
- 将本室自制的林蛙皮多肽进行SDS-PAGE和紫外扫描检测,并将其以不同质量浓度作用于人永生化表皮细胞(HaCaT细胞),利用MTS法、Annexin V-FITC/PI法分别检测林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及其凋亡的影响。结果显示,林蛙皮多肽在20%SDS-PAGE条件下呈现弥散状态,灰度分析表明相对分子质量在10 000以下的多肽占总多肽的67.1%。林蛙皮多肽在(50~800)mg/L条件下,随着多肽质量浓度的升高,对HaCaT细胞促进增殖的作用逐渐增强,当林蛙皮多肽质量浓度为800mg/L时,MTS检测HaCaT细胞活力D值是正常对照细胞D值的2.5倍(P<0.01);此时,细胞凋亡率比正常对照细胞降低了(2.7±0.03)%,(P<0.01)。以上结果表明,林蛙皮活性多肽对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用,并对其凋亡有显著的抑制作用。
- 张鑫李思明邓晨张昕陆超程云云郝林琳卢可
- 关键词：HACAT细胞增殖细胞凋亡
- 鸡SUMO1的HIS/GST双融合纯化标签载体的构建及表达分析被引量：2
- 2015年
- SUMO(small ubiquitin-related modifier,小泛素样相关修饰物)是一种重要的蛋白翻译后修饰物,对调节蛋白质的活性、功能和细胞定位都起着至关重要的作用。虽然SUMO和泛素的空间结构很相似,但是发挥的功能却有很大的不同,SUMO不像泛素那样介导蛋白质的降解,反而可以增强蛋白质的稳定性。近年来,研究发现人的SUMO作为一种融合标签和分子伴侣来可以显著增加一些难溶解蛋白的可溶性表达。本研究以原核表达载体pET-28a为基础构建了鸡SUMO1重组质粒HIS-SUMO1-GST-pET28a,并在SUMO1和GST之间插入IL2得到重组质粒HIS-SUMO1-IL2-GST-pET28a,经IPTG诱导表达,并分别使用Ni-NTA及Glutathione-sepharose 2次亲和层析纯化,获得了纯度较高的融合蛋白。活性分析发现去SUMO化酶人的SENP1可完全切开纯化融合的蛋白经。结果表明,此SUMO融合的HIS/GST双标签表达载体不但可以用于提高难溶蛋白的溶解度,而且表达产物也作为去SUMO化酶研究的底物。
- 于佩峰郑海南邓晨张鑫吴山力王梦云吕岩艾永兴
- 关键词：原核表达蛋白纯化融合蛋白
- Intein融合表达鸡IL-2蛋白的多克隆抗体制备被引量：4
- 2015年
- 鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362bp的Intein基因融合在同一开放阅读框内,编码相对分子质量约为71 000的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-intein融合蛋白,应用chitin-sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western blot分析抗体特异性。结果,应用纯化的chIL-2-intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
- 邓晨郑海南于佩峰张鑫吴山力王梦云吕岩艾永兴
- 关键词：INTEINCHICKENIL-2多克隆抗体
- 靶向高迁移率族蛋白A1基因RNA干扰真核表达载体的构建被引量：4
- 2007年
- 目的构建针对人高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究HMGA1基因在肿瘤细胞中的作用奠定实验基础。方法设计合成特异性针对人HMGA1基因的寡核苷酸序列,梯度退火后,与pU6mRFP载体连接,构建重组载体,转染人肝癌细胞SMMC-7721。通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光,估测转染效率,RT-PCR法检测转染细胞HMGA1mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果DNA测序证实,成功构建了特异性HMGA1siRNA真核表达载体,转染后72h,转染效率为40%左右。所构建的载体能够特异性沉默转染细胞HMGA1基因的表达。转染细胞HMGA1基因沉默后,细胞凋亡率(27·86%±2·44%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为2·82%±2·39%和2·04%±0·70%),G0-G1期细胞百分数(77·73%±1·78%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为42·19%±3·28%和39·23%±3·63%),G2-S期细胞百分数(22·27%±1·78%)明显低于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为57·81%±3·28%和60·77%±3·63%)。结论成功构建了HMGA1的RNA干扰真核表达载体。
- 朱明光张鑫袁红艳杨巍常雅萍
- 关键词：RNA干扰高迁移率族蛋白A1真核表达
- GHRP-6温敏型凝胶的制备及其对小鼠生长的影响
- 2013年
- 采用开环聚合法合成PLGA—PEG-PLGA共聚物，制备GHRP-6温度敏感型缓释凝胶并对其体外释药和对小鼠生长的影响进行研究。以PLGA—PEpPLGA为载体材料制备GHRP一6缓释凝胶制剂，采用BCA法测定体外释放度，并对体外释放数据用Korsmeyer-Peppas方程进行拟合；分别对分组小鼠皮下注射GHRP-6凝胶（2．0g／L）、GH—RP-6（2．0g／L）、空胶和生理盐水，隔周称重。结果表明合成产物符合PLGA—PEG-PLGA共聚物的特征，质量分数为15％、20％、30％的共聚物水溶液的胶凝化温度在32～37℃；GHRP-6在浓度为15％、20％、25％共聚物中释放出95％以上的药物分别需要16、18、20d，其释放曲线均符合Korsmeyer-Peppas方程模型，且具有良好的相关性；各组小鼠在注射35d后，GHRP-6凝胶组的累积增重分别比生理盐水组、空胶组、GHRP-6组高45．18％（P〈0．01），39．090．4（P〈0．01），21．80％（P〈0．01）。由此表明GHRP一6在凝胶中的释放达到预期要求，且对小鼠的生长有显著的促进作用，因此GHRP-6的PLGA—PEGPLGA凝胶有望开发成为一种长效促生长的注射制剂。
- 官员张昕张鑫张大伟郝林琳于浩张英刘松财
- 关键词：温敏凝胶缓释促生长
- HMGA1基因转染诱导NIH3T3细胞恶性转化实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:通过建立稳定转染外源HMGA1基因的NIH3T3细胞,探讨HMGA1基因表达与肿瘤发生、发展的相关性。方法:脂质体转染法将真核表达载体pcDNA3·0-HMGA1稳定转染NIH3T3细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆;RT-PCR法及基因测序技术,确定外源HMGA1基因在阳性细胞克隆转录水平的表达;MTT法绘制细胞生长曲线以及流式细胞术测定细胞周期观察细胞增殖能力的变化;软琼脂集落形成实验判断转染细胞的非锚定依赖性生长能力;RT-PCR法检测转染细胞免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA表达。结果:筛选获得稳定转染HMGA1基因的NIH3T3细胞克隆,与对照细胞相比稳定转染HMGA1基因,细胞生长增殖速度加快,在软琼脂中形成细胞集落,并表达免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA。结论:HMGA1基因转染可诱导正常NIH3T3细胞恶性转化,并参与调控免疫抑制因子mRNA表达,揭示HMGA1是肿瘤发生发展、转移以及免疫逃逸的关键分子。
- 张鑫朱明光袁红艳杨巍常雅萍
- 关键词：HMGA1NIH3T3基因转染细胞转化
