陈晓佳
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：福建农林大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 尼罗罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质分析被引量：2
- 2019年
- N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)是生物体内主要的溶酶体水解酶之一,广泛存在于动植物和微生物体内.以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏作为材料,采用硫酸铵(饱和度30%~70%)分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephadex G-200分子筛凝胶过滤柱层析的方法分离纯化NAGase,得到比活力为2 988 U/mg的酶制剂.经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测呈现单一条带,说明所得酶为PAGE单一纯.通过Sephadex G-200柱层析法测得NAGase的总分子质量为61.8 ku,结合SDS-PAGE结果,说明该酶仅有一个亚基.进一步测定了NAGase的酶学性质:NAGase水解底物对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)的最适温度为55℃,温度稳定范围为0~55℃,超过75℃时则完全丧失活性;NAGase水解底物的最适pH为5.8,pH稳定范围为4.0~9.0,pH大于9.0时几乎完全失活;该酶水解底物的动力学参数K m和v m分别为0.229 mmol/L和9.346μmol/(L·min);运用化学修饰法分析发现二硫键、氨基、组氨酸咪唑基和色氨酸吲哚基均是NAGase的活性必需基团,而精氨酸胍基则不是其活性必需基团.
- 陈晓佳孙林浩袁阳黄小红张伟妮
- 关键词：尼罗罗非鱼N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶纯化酶学性质
- 强氯精对尼罗罗非鱼精巢N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的失活动力学(英文)被引量：1
- 2017年
- 强氯精是水产养殖过程中普遍使用的消毒剂,为了解强氯精能够杀菌却不会对养殖水产动物尤其是其繁殖功能产生危害的有效浓度,以分离自尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)精巢的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)为材料,利用底物反应的动力学方法探讨强氯精对该酶的失活动力学.结果显示该酶在强氯精溶液中是一个可逆的反竞争型的失活过程,其对酶抑制的IC50为(0.25±0.02)mg/m L;而且强氯精能降低该酶的热稳定性和p H稳定性;通过建立失活模型,计算得知正向和逆向微观失活速度常数k′+0和k′-0值分别为3.84×10^(-3)/s和8.37×10^(-4)/s.本研究结果可为评价强氯精对罗非鱼繁殖功能的影响提供理论依据.
- 张伟妮陈晓佳沈林松黄一帆黄小红
- 关键词：N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶强氯精
- 全氟己酸对罗非鱼肝脏NAGase的抑制动力学
- 2019年
- 对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在全氟己酸中水解pNP-NAG活力的影响进行了研究.结果表明,全氟己酸对NAGase具有可逆抑制,IC_(50)为0.29 mg·mL^(-1).应用Lineweaver-Burk双倒数法可知,全氟己酸对NAGase的抑制类型为竞争型抑制,与自由酶结合的抑制平衡常数(K_I)为0.18 mg·mL^(-1).采用底物反应的动力学方法建立全氟己酸对NAGase的抑制动力学模型,其微观速度常数可以在全氟己酸对NAGase的底物反应中求出.
- 陈晓佳张伟妮胡可慧孙林浩黄小红
- 关键词：罗非鱼肝脏抑制动力学
- PUGNAc对罗非鱼肝脏NAGase的抑制动力学
- 2020年
- 探究PUGNAc对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的抑制作用.通过建立PUGNAc对NAGase的抑制动力学模型,表明PUGNAc对NAGase的抑制是一种缓慢的、可逆的反应,IC50为0.18μmol·L^-1,抑制类型为混合性;与自由酶结合的抑制平衡常数KI为0.110μmol·L^-1,KIS为0.827μmol·L^-1;微观速率常数k+0大于k′+0,表明游离酶分子比抑制剂存在下的酶-底物复合物更脆弱,从而推测底物的存在对PUGNAc抑制下的NAGase起着保护作用.
- 申奔龙陈晓佳黄小红张伟妮
- 关键词：抑制动力学N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶罗非鱼
- 罗非鱼肝脏NAGase的性质及抑制动力学研究
- N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGase）,是一种几丁质水解酶,广泛存在于自然界中,且在许多生物学过程中起着重要作用。本实验用尼罗罗非鱼肝脏作为材料,采用硫...
- 陈晓佳
- 关键词：尼罗罗非鱼N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶抑制动力学化学修饰
- 文献传递
- 番鸭唾液乳杆菌外膜蛋白提取方法的优化
- 2017年
- 为获得较大浓度的唾液乳杆菌外膜蛋白,试验对唾液乳杆菌外膜蛋白的提取方法进行了筛选和优化,比较了Sarkosy l法、PMSF法和溶菌酶法,筛选出最佳提取方法,并通过单因素试验和正交试验优化提取条件。结果表明:溶菌酶法所提取的蛋白量大,目的条带清晰,表明溶菌酶法优于PMSF法和Sarkosyl法;各提取因素影响的大小顺序为氯化锂水浴温度>溶菌酶浓度>氯化锂浓度>氯化锂水浴时间>溶菌酶反应时间>溶菌酶反应温度;溶菌酶法的最佳提取条件为2.5 mg/mL溶菌酶,23℃水浴90 min,0.5 mol/mL氯化锂处理,30℃水浴25 h。
- 张杰陈晓佳张叶飞谢璐娜李林白丁平黄小红
- 关键词：外膜蛋白氯化锂
