谢荣辉 作品数:33 被引量:61 H指数:5 供职机构: 浙江省动物疫病预防控制中心 更多>> 发文基金: 浙江省公益性技术应用研究计划项目 浙江省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
屠宰场消毒效果评价方法探索 被引量:2 2023年 液体消毒剂消毒效果的生物学检测及评价通常需加入已知量的生物指示剂如细菌、真菌和病毒抗原等,并通过测定消毒剂在使用浓度下作用一定时间后的杀灭率来判定其消毒效果。这种方法须在严格的实验室环境控制条件下进行才能获得较理想的结果。而在屠宰场这种开放的环境下,对其进行现场消毒效果测定和评价方法尚未见报导。本文试图通过对屠宰场日常消毒工作中,对特定位点消毒前与消毒后细菌总数的测定,直观分析其消毒效果,在屠宰场消毒效果评价方法学上是一次新的尝试。 倪柏锋 虞一聪 谢荣辉 王雅婷 赵灵燕 徐辉关键词:病毒抗原 日常消毒 杀灭率 生物指示剂 屠宰场 猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒双重荧光定量PCR方法的建立和应用 被引量:4 2023年 根据猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒保守基因序列设计引物和探针,通过优化反应体系,建立了猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒双重荧光定量PCR检测方法,评估了该方法的特异性、敏感性及重复性。结果显示,该方法能特异性扩增猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒核酸,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、日本脑炎病毒、猪圆环病毒1型、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪博卡病毒无交叉反应。猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒的最低检测限均为10 copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于3%。用建立的双重荧光定量PCR方法对87份猪组织样品进行检测,结果显示,猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒3型的阳性率分别为17.24%和24.14%。上述结果表明,本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有特异、敏感、稳定和快速的优点,可用于猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒鉴别诊断和流行病学调查。 赵灵燕 张璐 安慧婷 王雅婷 黄靖 张红丽 董建斐 刘霞 孙仁杰 徐辉 谢荣辉关键词:猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2,3,4型三重荧光定量PCR检测方法的建立和应用 被引量:5 2022年 为建立同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、3型(PCV3)和4型(PCV4)的方法,根据GenBank中的PCV2、PCV3和PCV4基因保守序列设计引物和探针,通过反应体系优化后,建立同时检测PCV2、PCV3和PCV4的三重荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性、稳定性、与普通PCR方法的一致性进行评价。结果显示,建立的方法可特异性检测PCV2、PCV3和PCV4,与猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒1型、猪伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应产生。批间与批内重复性试验变异系数系数均小于3%。对83份猪组织样品进行检测,其中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为68.67%,28.92%,20.48%。结果表明建立的三重荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和稳定性好的优点,可用于PCV2,PCV3,PCV4型的流行病学调查和鉴别诊断。 谢荣辉 王雅婷 安慧婷 黄靖 张红丽 刘霞 冯肖肖 陈伟良 董建斐 张璐 徐辉 赵灵燕关键词:猪圆环病毒2型 基于液相芯片技术的7种猪繁殖障碍疾病相关病毒检测用引物探针、试剂盒及其应用 本发明提供了基于液相芯片技术的7种猪繁殖障碍疾病相关病毒检测用引物探针组、试剂盒及其应用,属于病毒检测技术领域。本发明提供的引物探针组,包括猪瘟病毒检测引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒检测引物探针、猪圆环病毒2型检... 谢荣辉 赵灵燕 徐辉 王雅婷 黄靖 孙冰冰 张红丽 董建斐 刘霞 冯肖肖 张璐 安慧婷 薛银 柴娟 虞一聪文献传递 运猪车辆消毒效果的检测分析 2022年 随机抽取浙江省2家洗消中心,每家洗消中心随机抽检5辆运猪车辆,每个车辆采集检测车轮、挡泥板、车厢内壁、车厢外壁、驾驶室等7个部位,车辆表面消毒前后,用拭子样本测定其细菌总数,测算细菌杀灭率和消毒有效率。结果表明:洗消中心A消毒有效率为23.08%,洗消中心B消毒有效率为65.38%。 章杭建 倪柏锋 虞一聪 谢荣辉 赵灵燕 徐辉关键词:车辆 消毒 猪圆环病毒3型与宿主相互作用机制研究进展 被引量:2 2023年 猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)从2015年发现至今已在全世界多个国家和地区的养猪业被检出,是重要的新发猪病病原体。目前有关PCV3致病机制的研究有限,大部分集中于PCV3的流行病学调查、基因组演化分析和检测方法建立。猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)与宿主之间关系紧密且复杂,二者的相互作用决定宿主细胞的命运和病毒的传播与存活。部分学者通过瞬转表达系统、临床分离和反向遗传学技术从病毒组分或全病毒水平对PCV3与宿主相互作用展开研究。本文系统阐述宿主细胞对PCV3感染的应答机制、PCV3-宿主蛋白的相互作用,以及PCV3生命周期的研究结果,将有助于进一步了解PCV3及其致病机制。 孙仁杰 单颖 单颖 王雅婷 谢荣辉 谢荣辉 张传亮 赵灵燕 李肖梁浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析 被引量:5 2019年 为了解2014-2016年浙江地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF 5基因变异情况,试验通过RT-PCR方法对从浙江省各地区采集的PRRSV阳性病料进行ORF 5基因扩增,应用DNAStar和Mega 5.1软件对所测序列进行同源性和遗传变异分析。结果显示,54株2014-2016年浙江分离株ORF5序列之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.1%~100%和80.6%~100%,与经典株VR2332核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.8%~90.4%和81.6%~90.0%,与高致病PRRSV毒株JXA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.5%~99.5%和83.1%~99.0%。系统进化分析表明,54个毒株均为美洲型毒株,属于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ3个不同的基因亚型,其中基因亚型Ⅲ和Ⅳ毒株是浙江省近年来新出现的毒株。氨基酸序列分析结果显示,54个毒株在GP5蛋白的信号肽区域、非中和抗体表位的氨基酸序列变异较大,而在中和表位氨基酸序列变异较小。本研究结果表明,浙江地区PRRSV流行出现了新形势,多种基因亚型共同存在,其中以基因亚型Ⅰ毒株为主。 王雅婷 柴娟 张红丽 刘霞 虞一聪 倪柏锋 赵灵燕 徐辉 谢荣辉关键词:ORF 基于体外自连接的猪圆环病毒2型感染性克隆构建方法 2024年 本研究旨在建立一种快速构建猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染性克隆的方法。以临床分离的PCV2 LX株为模板,利用DNA无缝克隆技术成功构建了PCV2环状感染性克隆。同时,在基因组体外自连接的构建过程以及拯救病毒的生长特性上,将本方法与常规酶切连接方法进行了比较。本方法无须分析和引入限制性内切酶位点,避免了传统酶切连接的繁琐,能更高效地进行PCV2基因组的编辑。构建的感染性克隆经脂质体转染细胞,成功拯救获得可以稳定传代的重组病毒,并且重组病毒在PK-15细胞和3D4/31细胞(猪肺泡巨噬细胞系)上具有更强的增殖能力。综上所述,本研究构建了一种基于体外自连接的PCV2反向遗传操作系统,为PCV2基因工程疫苗的研发提供新策略,为其他新发圆环病毒(PCV3和PCV4)感染性克隆的构建提供借鉴。 孙仁杰 杨永乐 王雅婷 谢荣辉 张传亮 方维焕 李肖梁 赵灵燕关键词:猪圆环病毒2型 感染性克隆 病毒拯救 浙江省一规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定 2018年 2017年12月,浙江省杭州市萧山区某规模猪场保育舍猪群出现高热(41.5℃)、咳嗽、腹式呼吸、关节肿胀伴有跛行和被毛粗乱等临床症状。为确诊疾病,明确病因,剖检2头40日龄病死猪,用接种环刮取肺脏病料接种血平板,再用金黄色葡萄球菌作交叉划线,于37℃5%CO2条件下培养24 h。结果显示:病料培养血平板上生长出大量半透明、不溶血小菌落,菌落直径为0.5~1 mm;靠近金黄色葡萄球菌菌苔的菌落较大,随着与葡萄球菌生长线距离的增加而变小或不生长,呈"卫星现象"。挑取可疑菌落进行纯化培养,将纯培养物制成菌悬液,以DNA纯化试剂盒提取DNA并进行PCR检测。扩增产物电泳后,被检菌株电泳道出现一条1 090 bp条带,表明该菌株为副猪嗜血杆菌。 周蕾 虞一聪 董建斐 柴娟 王雅婷 刘爱军 谢荣辉 倪柏锋 张传亮 赵灵燕 桂平雄关键词:副猪嗜血杆菌 细菌鉴定 PCR 规模猪场 猪嵴病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立和应用 被引量:7 2018年 根据猪嵴病毒3D基因保守序列设计引物和TaqMan探计.通过优化反应体系.建立了猪嵴病毒荧光定量RT—PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性评价;同时以10倍梯度稀释的质粒标准品建立荧光定量RT—PCR的标准曲线,构建定量分析模型。结果显示.建立的方法能特异性检测猪嵴病毒,与其他引起猪腹泻的病毒无交叉反应,对标准品的检测灵敏度达10copies/pL;标准曲线CI值和模板终浓度在107~10copies/μL范围内有良好的线性关系;重复性试验变异系数均小于2.5%。对139份猪粪便样品进行检测,荧光定量RT-PCR阳性检出率为30.94%(43/139),常规RT—PCR为29.50%(41/139)。本研究建立的荧光定量RT-PCR可用于猪嵴病毒的快速检测和流行病学调查。 谢荣辉 刘霞 赵灵燕 倪柏锋 柴娟 王雅婷 吴赟竑 徐辉关键词:荧光定量RT-PCR