余海波
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SIRT2对裸鼠原位肝癌生长和肺转移的影响及其机制研究被引量：1
- 2018年
- 该文旨在探讨沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,SIRT2)基因敲低对裸鼠原位肝癌生长和肺部转移的影响。应用杀稻瘟菌素筛选构建稳定敲低SIRT2基因的SK-Hep-1细胞,应用定量逆转录PCR(q RT-PCR)和Western blot检测其敲低效率。将稳定敲SIRT2基因的细胞(SIRT2-sh RNA-SK-Hep-1)和对照组细胞(sh Cont-SK-Hep-1)原位注入裸鼠肝脏,8周后处死裸鼠并取出肝脏和肺组织,比较两组裸鼠肝癌肿瘤的大小及肺转移结节的数量。应用Western blot和免疫组织化学检测两组裸鼠肝癌组织中SIRT2、p-AKT、AKT、p-GSK3β、GSK3β、activeβ-catenin和β-catenin的蛋白质水平。结果显示,稳定敲低SIRT2基因的SK-Hep-1细胞系构建成功。裸鼠原位肝癌肺转移模型中,相比sh Cont-SK-Hep-1组,SIRT2-sh RNA-SK-Hep-1组裸鼠原位肝癌体积减小(P<0.05),肺转移结节数量明显减少(P<0.05)。Western blot结果表明,敲低SIRT2基因的裸鼠组p-AKT、p-GSK3β、activeβ-catenin、β-catenin蛋白质水平降低,GSK3β水平升高,AKT水平无差异;免疫组织化学结果表明,敲低SIRT2基因的裸鼠组p-AKT、p-GSK3β、β-catenin蛋白质水平降低。本研究结果提示,在裸鼠原位肝癌肺转移模型中,敲低SIRT2基因可以通过激活AKT的表达影响GSK3β/β-catenin信号通路,从而抑制人肝癌细胞的生长和肺转移。
- 杨秋霞周洪钟任吉华李宛蔚陶娜娜程胜桃何琳余海波龚蕊陈娟
- 关键词：肝细胞癌肝癌肺转移
- 非瑟素对HBV复制诱导的细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究
- 2017年
- 该文旨在研究sirtuin家族激活剂非瑟素(fisetin)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制导致的氧化损伤过程中的保护作用,并初步分析其分子机制。在Huh-7细胞中转染HBV表达质粒p CH9/3091并同时用N-乙酰半胱氨酸(n-acetyl-cysteine,NAC)处理细胞,Mito SOX?Red试剂检测细胞线粒体活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平,DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,Western blot检测细胞超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)和SOD2的蛋白质水平。Huh-7细胞转染p CH9/3091的同时用非瑟素处理细胞,并检测细胞ROS、MDA、SOD1和SOD2蛋白质水平;Huh-7细胞转染p CH9/3091并用非瑟素处理细胞或同时沉默SOD2,用细胞免疫荧光及Western blot检测γ-H2AX(Phosphorylated Histone H2AX)的形成;MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt]实验分析氧化应激条件下非瑟素对HBV复制细胞活率的影响;进一步应用Western blot检测丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族磷酸化水平及总蛋白水平的变化。结果显示,HBV复制明显增加细胞线粒体和细胞内ROS水平和细胞MDA水平,并且也明显降低SOD1和SOD2水平。NAC处理HBV复制细胞后,线粒体内和细胞内的ROS和细胞MDA水平明显减少。非瑟素处理HBV复制细胞后,HBV复制对细胞内ROS和MDA水平促进作用明显减弱;此外,HBV复制对细胞内SOD1和SOD2水平的抑制作用也明显减弱。非瑟素处理HBV复制细胞后,HBV复制对γ-H2AX形成的促进作用明显减弱,而SOD2沉默则减弱了非瑟素对HBV复制细胞中γ-H2AX形成的抑制作用。在氧化应激条件下,非瑟素明显减弱HBV复制对细胞活力的影响,SOD2沉默则减弱了非瑟素对HBV复制细胞活率的影响。非瑟素拮抗HBV表达对JNK(c-Jun N-terminal kinase)和p38(p38 kinase)磷酸化的促进作用,而SOD2沉默减弱了非瑟素
- 刘波程胜桃余海波任放陶娜娜任吉华
- 关键词：乙型肝炎病毒
