李峰
- 作品数：76 被引量：304H指数：8
- 供职机构：湖南文理学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- GOLPH2的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用被引量：1
- 2011年
- 目前发现GOLPH2蛋白与肝癌密切相关,将golph2基因进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到golph2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-TRX内、转化大肠杆菌DH5a,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白GOLPH2,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中GOLPH2蛋白水平.成功地构建了表达TRX-GOLPH2融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-TRX-GOLPH2.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以可溶性的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组GOLPH2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白、73 kD细胞裂解液和血清蛋白质.成功制备了GOLPH2蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
- 李峰刘艳红谢平丽李跃辉李官成
- 关键词：肝细胞癌蛋白质表达多克隆抗体
- 湘西黄牛LPL基因第2外显子的遗传多态性及其与生长性状的关联分析被引量：7
- 2012年
- 为了探讨湘西黄牛分子遗传特征及寻找与生长性状相关的分子标记,采用创造酶切位点PCR-RFLP(CRS-PCR-RFLP)和测序技术检测了湘西黄牛LPL基因第2外显子的多态性,并进行了LPL基因的基因型与湘西黄牛生长性状的关联分析。多态性分析结果表明,湘西黄牛群体LPL基因第2外显子存在g.355420C>T和g.355427T>A 2个突变位点,且都处于中度多态,其中g.355420C>T位点为本试验新发现的突变位点,g.355427T>A位点所编码的氨基酸由苏氨酸转变为丝氨酸。基因型与生长性状的关联分析结果表明,g.355420C>T位点CC基因型个体的体高、体长和体重均显著大于CT和TT基因型个体(P<0.05),C等位基因对湘西黄牛的生长性状为正效应。g.355427T>A位点的TT和AT基因型个体的体高、体长、胸围和体重均极显著大于AA基因型个体(P<0.01),T等位基因为正效应。表明LPL基因第2外显子的g.355420C>T和g.355427T>A位点对湘西黄牛生长性状有显著影响,可能为湘西黄牛生长性状的分子遗传标记位点。
- 王兴平罗仍卓么李峰王京仁李娜
- 关键词：湘西黄牛LPL基因生长性状
- 化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关基因的鉴定被引量：3
- 2005年
- 为了探讨DNP致癌的分子机理,鉴定出化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因及其活化方式.采用DNA共转染、裸鼠致瘤性试验、Southern杂交、PCR测序和序列同源性比较分析等,对DNP转化的人胚鼻咽上皮细胞株HENE-DNP进行研究.经过两轮DNA共转染和裸鼠致瘤性实验,Southern杂交表明,裸鼠肿瘤DNA中均含有人特异性高度重复序列Alu.用人Ha-ras、Ki-ras及N-ras癌基因特异性引物对裸鼠肿瘤DNA进行PCR扩增,仅能扩增出人Ha-ras基因相应的片段.Southern杂交进一步证实,裸鼠肿瘤DNA中存在与人Ha-ras基因片段大小一致的杂交带.RT-PCR产物测序,并将测序结果与GenBank进行序列同源性比较分析,发现裸鼠肿瘤中人Ha-ras基因cDNA第26位密码子第2位碱基发生了T→C的转换,编码的氨基酸由亮氨酸相应地变换成丝氨酸.化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因是Ha-ras,原癌基因c-Ha-ras激活可能是DNP转化人胚鼻咽上皮细胞的分子机制之一.
- 段朝军关勇军何春梅李峰肖志强陈主初
- 关键词：二亚硝基哌嗪共转染
- 高校生物科学专业生物化学与其他相关课程整合教学的探索被引量：2
- 2019年
- 该文首先分析了课程整合的重要性,提出了高校生物化学与其他学科的整合,以及整合后的管理方法,以期到全面提高人才培养质量的目标。
- 李荣李峰张建平唐琳
- 关键词：现代生物学课程整合教学改革
- 2例原发性急性肾梗塞的临床诊治被引量：5
- 2012年
- 目的探讨急性肾梗塞的临床特点、诊断、治疗及预后。方法回顾性分析2例急性肾梗塞患者的临床资料,并结合文献分析其诊断及治疗方法。结果 2例患者均表现为腰背部疼痛伴恶心、呕吐,无其他不适;1例B超检查提示左肾占位,考虑错构瘤,另1例B超未见明显异常;2例CT检查均提示肾梗塞;1例肾血管造影(DSA)检查提示右肾动脉分支堵塞,另1例DSA未见明显异常;2例患者经抗炎、止痛等保守治疗后症状缓解,CT复诊提示病灶大部分消失。结论急性肾梗塞起病急,在临床诊治过程中易漏诊误诊,其明确诊断需借助增强CT及DSA检查,可根据患者的病情及辅助检查结果选择是否保守治疗,保守治疗对部分急性肾梗塞患者可以达到较好的治疗效果。
- 周其赵邓剑平钟伟枫李峰刘存东毛向明
- 关键词：肾梗死
- 鹿角形结石经皮肾镜分期治疗中联合ESWL与多通道取石的疗效对比被引量：5
- 2011年
- 目的在首次经皮肾镜(PNL)手术治疗鹿角形结石后,Ⅱ期分别采用体外冲击波碎石(ES-WL)后再次PNL以及多通道PNL,比较2组治疗方法的疗效及并发症等指标,提出鹿角形结石手术治疗的最佳方案。方法回顾分析我院175例鹿角形肾结石,残余结石表面积>100mm2并至少残留1个肾盏,经过首次PNL治疗需要分期取石的患者,分别采用:ESWL联合PNL86例(联合治疗组),双或多通道PNL89例(多通道组),比较相关指标。结果治疗后联合治疗组无石率84%(72/86),多通道组93%(83/89),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。联合治疗组住院时间为(15±4)d,多通道组为(12±3)d,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。2组手术时间和出血量差异无统计学意义(P>0.05)。结论在分期巨大鹿角形结石的治疗方案中,多通道较联合ESWL手术效率更高、住院时间短等优点,值得临床推广应用。
- 李峰谭万龙刘存东薛康颐钟钦杨建昆
- 关键词：鹿角形结石体外冲击波碎石治疗
- 滤泡树突状细胞与生发中心反应研究的新进展被引量：6
- 2006年
- 生发中心是在T细胞依赖性抗体应答过程中于外周淋巴组织内形成的一个特殊的结构。在GC内,受抗原刺激而活化的B细胞进行克隆扩增、IgV区基因的体细胞高度突变、亲和力成熟以及同类型转换,最终形成记忆性B细胞或是产生Ig的浆细胞。在GC内B细胞增殖的同时,也启动了凋亡机制,以确保最终形成的记忆B细胞或浆细胞对抗原的高度特异性。FDCs是参与再次免疫应答的重要细胞,它主要是通过表面的FcR和CR将免疫复合物结合在细胞膜上,并选择性的将抗原递呈给表达高亲和力BCR的B细胞,使之激活并产生抗体或形成记忆B细胞。因此,FDCs在生发中心反应、免疫记忆的维持、B细胞的分化、成熟以及记忆B细胞的形成具有极其重要的作用。但最近的研究对FDCs及其结合的免疫复合物的重要性提出了质疑,认为FDCs在生发中心反应、B细胞的分化、成熟以及记忆B细胞的形成中的作用很可能是非特异性的,并对驻留在FDCs表面的免疫复合物的其它潜在功能进行了讨论。
- 李峰姚开泰
- 关键词：生发中心滤泡树突状细胞
- pCMV-tag2A/NAP1融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 从含有目的基因的cDNA克隆中,利用PCR方法钓取目的基因.将目的基因与酶切线性化的载体进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞.采用菌落PCR方法和核酸序列测定进行阳性克隆鉴定.对构建好的pCMV-tag2A/NAP1融合蛋白表达载体进行超纯去内毒素抽提.
- 李峰周琳琳尹文婧
- 成人视网膜假定蛋白基因ARHP的克隆及生物信息学分析被引量：5
- 2003年
- 从UniGene库中选取编号为BG2 2 2 62 4来自人鼻咽组织的表达序列标签 (EST )序列 ,联网到NCBI调用Blast服务器分析 ,发现该EST序列是一个代表新基因的未知序列 .利用Blast检索GenBank的nr数据库和EST数据库 ,构建EST重叠群 ,联网到NCBI的ORFfinder服务器 ,分析发现该EST重叠群具有完整的阅读框架 .分别在cDNA序列阅读框架的起始密码子和终止密码子的两侧设计引物 ,以人胎脑cDNA文库为模板 ,进行PCR扩增 ,测序确定该基因的cDNA全长序列 .该基因cDNA序列全长为 1672bp ,阅读框架位于第 3 0 4～ 1557位之间 ,编码由 417个氨基酸组成 ,分子质量为 46 58ku的蛋白质 ,其理论 pI为 4 2 1.将蛋白质序列通过NCBI的Blast服务器进行序列相似性分析 ,发现该基因编码的蛋白质和成年小鼠视网膜未知蛋白 (BAB3 2 2 14 )同源 .经与国际人类基因组命名委员会协商定名为成人视网膜假定蛋白 (adultretinahypotheticalprotein ,ARHP) ,GenBank登录号为AY174896.生物信息学分析表明 ,该蛋白质可能为一参与转录调控的核蛋白 .ARHP基因定位在染色体 5q3 5,跨越 3 5163bp ,含 4个外显子和 3个内含子 .在基因的 5′非翻译区有
- 李峰蒋卫红尹志华杨旭宇冯湘玲刘卫东姚开泰
- 关键词：基因克隆生物信息学分析表达序列标签
- 人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析被引量：16
- 2001年
- 目的 :研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法 :抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白 ,双向凝胶电泳 (2 DE)分离、银染显色 ,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的 2 DE图像 ;根据获得的 2 DE凝胶图像 ,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点 ,用胰蛋白酶原位水解 ,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹 (PMF) ,通过PepIdent软件搜索SWISS PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果 :建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法 ,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的 10个点相应的蛋白质。结论 :本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的 2 DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料 ,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。
- 李峰关勇军谢锦云何春梅陈平陈主初梁宋平
- 关键词：鼻咽癌细胞系双向凝胶电泳蛋白质
