刘艺洁
- 作品数：7 被引量：13H指数：1
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建被引量：1
- 2017年
- 目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sg RNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况。结果测序结果显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA表达载体插入序列完全正确。将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高。结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。
- 鲁卓林熊显佳吴云丹周慧贾军王双林武莉莉刘艺洁乔阳杨冰赵秀娟王青松韩春勇张玲孙琰
- 关键词：甲基化EZH2基因
- 烷化甘油磷酸合酶在异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚中的作用
- 2019年
- 目的探讨烷化甘油磷酸合酶(AGPS)在异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌肥厚过程中的作用.方法采用ISO腹腔注射法构建大鼠病理性心肌肥厚模型.选取健康Sprague-Dawley大鼠(120~150 g)12只,采用抽签法将大鼠随机分为ISO处理组和正常对照组,每组6只.ISO处理组大鼠每天腹腔注射ISO(3 mg/kg),正常对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,连续注射2周.通过超声心动检测大鼠左室舒张期内径、左室后壁厚度、左室射血分数、左室短轴缩短率和左室质量的变化,苏木素-伊红染色检测大鼠心肌细胞横截面积的大小,蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测大鼠心肌组织中3种肥厚因子[心房利钠肽(ANP)、肌球蛋白轻链-2V(MLC-2V)、α-肌球蛋白重链(α-MHC)]和AGPS的mRNA和蛋白表达.结果超声心动检测结果表明大鼠心肌肥厚模型构建成功.苏木素-伊红染色结果显示,ISO处理组大鼠心肌横截面积明显大于正常对照组.蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR结果表明:与正常对照组相比,ISO处理组大鼠心肌组织中3种肥厚因子及AGPS的mRNA和蛋白相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论构建的大鼠病理性心肌肥厚模型中AGPS表达上调,为进一步研究AGPS在病理性心肌肥厚发病机制中的作用提供了理论依据.
- 刘艺洁费乔曼曹冰雁邱曼曼黄欢宋佳鑫杨冰张玲
- 关键词：异丙肾上腺素
- LSD1过表达及去甲基化作用缺失质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的 评估赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（LSD1）过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在人胚肾细胞HEK293T中的表达水平。方法 采用PCR扩增LSD1片段，重叠PCR扩增LSD1去甲基化作用缺失片段，构建大鼠特异性LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒，并经琼脂糖凝胶电泳和测序进行验证。将验证后的两种重组质粒与空白载体分别进行包病毒，感染HEK293T后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞，再用Western Blot和实时定量PCR检测稳定表达的HEK293T细胞内LSD1的表达情况。结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明，LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒构建成功。Western Blot和实时定量PCR检测结果显示，与空白对照组相比，LSD1过表达组和LSD1去甲基化片段缺失组HEK293T细胞中LSD1蛋白及mRNA的相对表达量均上调，差异均具有统计学意义（均P〈0.01）。结论 构建的LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在HEK293T细胞中实现了LSD1基因的过表达，为进一步研究LSD1基因与相关疾病的关系以及LSD1去甲基化作用奠定了基础。
- 武莉莉刘艺洁曹冰雁费乔曼赵秀娟李倩韩雅婷曹磊杨冰张玲
- 关键词：去甲基化重组质粒
- 大鼠EZH2基因过表达质粒以及催化亚基缺失质粒构建及鉴定
- 2016年
- 目的 构建特异性的大鼠EZH2过表达质粒以及EZH2催化亚基SET domain缺失质粒，并在293T细胞中评估其表达水平。 方法 提取大鼠心脏组织RNA，逆转录为cDNA，重叠PCR扩增催化亚基SET domain缺失的EZH2的cDNA，以其为模板进行PCR扩增，将PCR产物和载体双酶切，切胶回收目的片段，经T4连接酶连接，连接产物转入感受态细胞，涂板挑取单克隆摇菌测序，提取质粒，采用脂质体转染法转染293T细胞。 结果 Western Blot 法和RT-PCR法检测结果表明，质粒在293T细胞中实现EZH2基因的过表达。 结论 构建的2种质粒为进一步研究EZH2基因与心肌肥厚的关系及EZH2催化亚基的作用奠定了基础。
- 熊显佳杨冰赵秀娟孙琰赵建松武莉莉刘艺洁张玲
- 关键词：EZH2催化亚基重组质粒心肌肥厚
- 木兰花碱减轻慢性应激小鼠抑郁样行为及对脑部LSD1组蛋白修饰的影响被引量：11
- 2019年
- 目的探索木兰花碱对慢性不可预见性温和应激所致抑郁小鼠行为学的影响机制。方法将ICR小鼠随机分为正常对照组(control组)、抑郁模型组(PG组)、木兰花碱高剂量组(MH组)和木兰花碱低剂量组(ML组)。采用慢性不可预见性温和刺激方法建立抑郁小鼠模型,检测各组小鼠行为学的变化,并用实时定量PCR、Western blot检测小鼠脑部赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)mRNA及蛋白表达水平的变化。免疫组化染色法检测小鼠脑部LSD1阳性细胞数量。结果木兰花碱在行为学上改善了小鼠的抑郁状况,与PG组相比,MH组和ML组悬尾不动时间、强迫游泳不动时间明显缩短(P<0.05)。实时定量PCR及Western blot结果显示,与control组相比,PG组LSD1mRNA表达差异无统计学意义,蛋白表达明显降低(P<0.05),ML组LSD1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);与PG组相比,ML组LSD1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,与control组相比,PG组小鼠脑部LSD1阳性细胞数量减少,而ML组较PG组增加。结论在木兰花碱治疗抑郁小鼠的过程中,LSD1可能起到了重要的调节作用。
- 曹冰雁刘艺洁武莉莉费乔曼杨冰张玲乔卫
- 关键词：抑郁木兰花碱
- 癌相关成纤维细胞来源的CCL7对三阴性乳腺癌细胞增殖与侵袭作用的研究
- 2017年
- 目的 研究癌间质微环境中癌相关成纤维细胞(CAFs)来源的CCL7对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖与侵袭的作用.方法 采用实时定量PCR和Western Blot分别测定TNBC的CAFs与癌旁成纤维细胞中趋化因子配体7(CCL7)的mRNA及蛋白相对表达水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)定量检测CAFs与癌旁成纤维细胞条件培养基中的CCL7水平,确定两种细胞的CCL7旁分泌水平;采用MTS和Transwell侵袭实验分别检测CCL7对TNBC细胞株MDA-MB-231增殖和侵袭的影响.结果 与癌旁成纤维细胞相比,CAFs中CCL7的mRNA及蛋白相对表达水平均明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.01),且CAFs的CCL7旁分泌水平也明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01).MTS和Transwell侵袭实验结果显示,CCL7治疗组MDA-MB-231细胞的增殖率和侵袭能力均明显高于未治疗组,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 TNBC间质微环境中的CAFs可分泌更多的趋化因子CCL7,且CCL7可促进TNBC细胞的增殖和侵袭.
- 韩春勇孙敬岩刘静何珊珊杨冰殷竹鸣黄清丰武莉莉刘艺洁张玲尹健
- 关键词：三阴性乳腺癌癌相关成纤维细胞细胞增殖细胞侵袭
- 采用CRISPR knockin技术实现VEGF165定点敲入HEK293T细胞系的构建
- 2019年
- 目的构建定点敲入血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的人肾上皮细胞系HEK293T,避免由慢病毒感染等方法实现过表达时所带来的脱靶效应。方法根据EZH2基因的DNA序列设计、构建两端带有同源臂的VEGF165表达载体(pUCm-T-VEGF165质粒)和能定点切割基因组DNA的小向导RNA(sgRNA)表达载体[pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒],再将这两个质粒共转染HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR检测VEGF165和EZH2的mRNA表达情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测VEGF165和EZH2的蛋白表达情况。结果实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,与对照组、单独转染pUCm-T-VEGF165质粒和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒组比较,共转染pUCm-T-VEGF165和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒组VEGF165的mRNA和蛋白相对表达量均升高(VEGF165 mRNA:3.42±0.30比1.02±0.21、1.13±0.16、0.98±0.18,均P<0.01;VEGF165蛋白:3.12±0.10比1.02±0.06、0.88±0.03、0.80±0.05,均P<0.01),EZH2的mRNA和蛋白相对表达量均降低(EZH2 mRNA:0.14±0.06比1.08±0.11、1.02±0.12、1.13±0.16,均P<0.01;EZH2蛋白:0.23±0.03比1.05±0.13、0.91±0.04、0.81±0.06,均P<0.01)。该结果表明VEGF165基因被定点插入EZH2基因的基因组DNA序列中,并干扰了EZH2的表达。结论采用CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入VEGF165基因的HEK293T细胞系。
- 郭再玉张合亮陈谦侯延伟水涛武莉莉刘艺洁费乔曼黄欢雷蕾孙琰孔雨赵秀娟韩雅婷杨冰张玲
- 关键词：血管内皮生长因子165
