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李婷: 作品数：22 被引量：73H指数：6; 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>; 发文基金：贵州省科学技术基金贵州省科技计划项目贵州省农业攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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羊口疮病毒大足株的分离鉴定被引量：2: 2019年; 本研究旨在了解重庆地区羊口疮病毒(orf virus,ORFV)流行情况。从重庆大足等地区羊场采集18份临床疑似羊口疮病料,提取病料DNA,经PCR鉴定为ORFV阳性;将阳性病料做常规处理,接种羔羊睾丸细胞(LT),并盲传至5代,观察接毒LT细胞病变,将F5代细胞培养物进行间接免疫荧光试验(IFA)、PCR扩增、测序、同源性比对、遗传进化分析和TCID 50测定。结果显示,经PCR检测,18份疑似羊口疮病料ORFV核酸阳性率为61.1%(11/18);大足株病料接种LT细胞36 h后,长梭型细胞变圆、融合、呈拉网状、皱缩,72 h后大部分细胞脱落;间接免疫荧光试验在显微镜下观察到细胞浆中出现特异性绿色荧光,且荧光绕核分布;F1至F5代细胞培养物经PCR扩增出特异性目的条带,大小为1137 bp;将测序结果与GenBank中19株ORFV B2L基因进行同源性比对,其核苷酸同源性在97.9%~100%之间,与美国SA00分离株同源性达100%,且遗传进化分析显示处于同一进化分支,亲缘关系较近;测定F5代细胞培养物TCID 50值为10-5.68/0.1 mL,在细胞中能稳定增殖。综上所述,本研究成功分离并获得1株ORFV,为后续ORFV研究提供了生物材料,同时为防控重庆地区的羊口疮奠定基础。; 李鹏飞张友鲜思美李婷李婷张益张益吴伯梅; 关键词：遗传进化分析

山羊IL-2基因SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2016年; 为建立山羊IL-2基因SYBR GREEN I实时荧光定量RT-PCR检测方法，根据GenBank中山羊见-2基因（登录号：KT934548），设计1对特异性引物，用于扩增目的基因，并将目的基因克隆于pMD-19-T载体，转化至大肠杆菌DH50L，经质粒PCR及序列测定鉴定后获得阳性重组质粒，作为标准品模板建立SYBR GREEN I RTFQ-PCR标准曲线和溶解曲线，进行特异性、重复性和敏感性试验。并应用所建立的方法，检测ConA刺激健康山羊PBMC后0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h和48h不同时间点IL-2基因转录的动态变化。结果表明，当质粒标准品稀释度在7．2×10^9-7．2×10^5copies／μL扩增曲线的Ct值与浓度间具有良好的线性关系，相关系数为一0．996；熔解曲线为特异性单峰，组内变异系数为0．306％～1．458％，组间变异系数为0．514％～1．191％，最低检测限为7．2×10^2copies／μL。山羊IL-2基因的mRNA转录量在0～2h呈现上升趋势，在2h达到峰值，2-6h呈现下降趋势。6～12h未能检测到IL-2基因的mRNA转录；12～48h检测到IL-2基因的mRNA转录量呈逐渐上升趋势。研究结果将为山羊IL-2基因的定量分析提供技术平台。; 李婷丁尊俄鲜思美黄佑洪刘嫒冯将李鹏飞; 关键词：山羊实时荧光定量RT-PCR SYBR

羊IL-2基因和羊口疮病毒B2L基因真核表达重组质粒联合免疫小鼠的效果评价被引量：8: 2017年; 为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小鼠的体液和细胞免疫反应。结果表明,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IL-2水平均显著高于pVAX1-B2L免疫组,与pVAX1和PBS对照组相比差异极显著(p<0.01)。而且pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L免疫组、空载体pVAX1组和PBS对照组(p<0.01)。因此,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫KM小鼠可以诱导特异性体液免疫和细胞免疫,并且IL-2具有免疫佐剂的作用,为进一步将其用于Orf的防制奠定了基础。; 鲜思美李鹏飞冯将刘嫒李婷包细明张益张素辉; 关键词：B2L基因基因疫苗联合免疫

贵州黑山羊、黔北麻羊IL-2基因的克隆与生物信息学分析: 2018年; 为获得贵州特色品种黑山羊与黔北麻羊IL-2基因,本试验以Con A刺激的贵州黑山羊与黔北麻羊外周血淋巴细胞为材料,采用RT-PCR方法分别扩增贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因,进行克隆与生物信息学分析。结果显示,（1）贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因核苷酸与氨基酸一致性为100%,完整编码阅读框大小为468 bp,编码155个氨基酸;（2）黔北麻羊、贵州黑山羊IL-2基因与Gen Bank中羊源IL-2基因核苷酸一致性为95.9%~100%,氨基酸一致性为91.1%~100%;（3）遗传进化树结果表明,贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因处于同一进化分支,与羊源IL-2基因亲缘关系较近;（4）生物信息学分析结果显示,IL-2蛋白二级结构中以α螺旋与无规则卷曲较多,该蛋白为亲水性蛋白,含信号肽序列,无跨膜结构,无特征功能结构域;（5）不同动物IL-2蛋白的抗原性分析存在差异,贵州黑山羊/黔北麻羊IL-2蛋白与羊源IL-2蛋白的比较差异较小,与人和其它动物的比较差异较大。由此得出结论,获得贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因完整编码区序列,二者核苷酸与氨基酸序列一致。贵州黑山羊/黔北麻羊IL-2基因与羊源IL-2基因亲缘关系近,预测其编码的蛋白为亲水性的分泌型蛋白,不同动物IL-2基因抗原性存在差异。; 鲜思美李鹏飞刘嫒李婷包细明张益冯将; 关键词：贵州黑山羊黔北麻羊 IL-2基因

羊口疮病毒感染MDBK细胞的电子显微镜观察: 引言羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(OrfV)引起的绵羊、山羊发生以口唇、舌等部位皮肤、黏膜形成丘疹、脓疱、溃疡以及结成疣状厚痂为主要特征的接触性、嗜上皮性、人兽共患传染病[1].MDBK细胞是较常用的羊口疮病毒分离与培...; 李婷张益鲜思美包细明李鹏飞

山羊IFN-γ和TNF-α基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：6: 2017年; 根据GenBank中山羊γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的基因序列,设计特异引物扩增目的基因。将IFN-γ、TNF-α基因克隆至p MD-19-T载体,得到各自阳性克隆质粒,以2种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。应用所建立的方法检测刀豆蛋白A(Con A)刺激健康山羊外周血单核细胞(PBMC)后不同时间点IFN-γ、TNF-α基因转录量。结果表明,当质粒标准品稀释度为1×10~9copies/L^1×10~5copies/L时,扩增曲线的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数分别为0.999和1.000;熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。IFN-γ在第2小时和第48小时这两个时间点出现mRNA转录高峰,在第2小时检测到IFN-γ转录量为1.26×10~5copies/L,第48小时检测到转录量为8.56×10~4copies/L;TNF-α在0~24 h呈现下调的表达趋势,第48小时出现mRNA转录高峰,转录量为2.73×10~5copies/L;研究结果将为IFN-γ、TNF-α的定量分析提供技术平台。; 李婷张益张益鲜思美冯将冯将; 关键词：山羊实时荧光定量RT-PCR SYBR

一起南江黄羊地方性鼻内肿瘤的病理学观察被引量：3: 2017年; 为了对羊地方性鼻内肿瘤的诊断和防治提供理论依据,对贵州省一起南江黄羊地方性鼻内肿瘤病例进行了临床症状与病理学观察。结果表明:患病南江黄羊临床上以面部肿胀、张嘴呼吸、鼻腔流出浆液性分泌物、呼吸困难与有鼻塞音等呼吸道症状和进行性消瘦为特征;肿瘤起源于筛骨黏膜,呈单侧生长、菜花状、粉红色,质脆,无包膜,表面覆盖大量黏液,完全占据单侧鼻腔;组织学上,鼻内肿瘤主要表现为腺管状生长,腺管管腔内充盈大量红染均质渗出物,有腺管共壁现象,瘤细胞偶见病理性核分裂象等;未发现肿瘤向其他组织与器官转移。; 鲜思美李鹏飞李鹏飞冯将冯将包细明张益张益; 关键词：南江黄羊流行病学临床症状病理学

花边鸭新城疫病毒与H9亚型禽流感病毒混合感染的诊断被引量：2: 2019年; 为确定贵州省三穗县某养鸭场花边鸭突发疫病的病因,通过流行病学调查、临床症状、病理变化、实验室检测,确诊为鸭源新城疫病毒与H9亚型禽流感病毒混合感染。; 刘良林张益鲜思美杨纯培王丽娟吴伯梅饶体宇包细明李婷王现科张友; 关键词：鸭源新城疫病毒 H9亚型禽流感病毒

贵州一起南江黄羊地方性鼻内肿瘤的病理学观察: 引言羊地方性鼻内肿瘤(Enzootic nasal tumor,ENT)又称传染性鼻内肿瘤、传染性鼻内腺癌或者传染性乳头状瘤,是由绵羊肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus of sheep,EN...; 包细明李鹏飞冯将张益李婷鲜思美

羊IL-2和OrfV-F1L基因疫苗联合免疫小鼠的免疫应答研究: 为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答。本研究将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠...; 李婷李鹏飞鲜思美包细明张益饶体宇吴伯梅张友; 关键词：IL-2 核酸疫苗免疫应答; 文献传递

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