刘方杰
- 作品数：6 被引量：7H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用。该单克隆抗体由重链和轻链组成；所述重链的可变区的氨基酸序列如序列表的序列2所示；所述轻链的可变区的氨基酸序列如序列表的序列4所示。本发明以α‑溶血素为靶抗原，从噬...
- 杨光刘方杰刘玉刘成华高亚萍冯健男沈倍奋
- 文献传递
- 抗α-溶血素单克隆抗体的筛选以及该抗体抗感染功能研究
- 研究背景：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，简称金葡菌，是一种自然界中广泛存在的革兰阳性致病菌，能够引起心内膜炎、败血症、肺炎和脑膜炎等多种疾病。金葡菌通过表达一系列的毒力因子如：α-溶血素等...
- 刘方杰
- 关键词：噬菌体抗体库
- 抗HU蛋白抗体抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成实验
- 2017年
- 目的探讨靶向金黄色葡萄球菌DNA结合蛋白HU的多克隆抗体是否能够抑制生物膜的形成。方法以金黄色葡萄球菌NCTC-8325基因组为模板,PCR扩增HU基因,构建重组表达载体p ET-28a-HU,亚克隆至大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过镍亲和树脂纯化获得HU蛋白。利用多克隆抗体制备技术获得兔源抗HU血清,利用Protein A树脂纯化多克隆抗体,利用ELISA和Western blot实验检测抗体亲和力,并通过金黄色葡萄球菌生物膜形成实验验证抗体活性。结果重组蛋白HU以可溶形式表达,成功制备了高滴度(>1∶100 000)的兔源抗HU多克隆抗体。生物膜形成后结晶紫染色数据显示抗HU多克隆抗体浓度在75μg/ml和0.6μg/ml时OD595读值分别为0.052和1.220,Confocal实验表明抗HU多克隆抗体能够明显抑制金黄色葡萄球菌生物的形成,且呈浓度依赖性。结论靶向金黄色葡萄球菌HU蛋白的多克隆抗体能够抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成,这可能成为一种新的治疗金黄色葡萄球菌感染策略。
- 李静静刘方杰高亚萍刘成华刘玉张军杨光
- 关键词：金黄色葡萄球菌多克隆抗体生物膜
- 治疗感染性疾病抗体药物的概况及趋势被引量：1
- 2016年
- 感染性疾病是指由致病微生物（细菌、病毒等）侵袭人体,从而引起机体发生一系列感染性临床症状的疾病。感染性疾病涉及范围广,影响全身各个器官和系统,严重威胁着人类的健康和生命。目前对于细菌感染,一般采用抗生素治疗,但是越来越多的耐药性菌株,尤其是超级细菌的出现,抗生素治疗受到了很大的挑战。同时对于病毒引发的感染,目前并无很好的预防和治疗措施。
- 刘方杰杨光沈倍奋
- 关键词：感染性疾病抗体药物致病微生物耐药性菌株超级细菌
- 一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用。该单克隆抗体由重链和轻链组成；所述重链的可变区的氨基酸序列如序列表的序列2所示；所述轻链的可变区的氨基酸序列如序列表的序列4所示。本发明以α‑溶血素为靶抗原，从噬...
- 杨光刘方杰刘玉刘成华高亚萍冯健男沈倍奋
- 文献传递
- 抗铜绿假单胞菌PcrV蛋白单克隆抗体的筛选和功能验证被引量：6
- 2018年
- 目的:获得能应用于治疗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染的抗Pcr V蛋白全人源单克隆抗体。方法:以铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板,PCR扩增Pcr V基因并构建重组表达载体p ET-28a-Pcr V,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,并通过镍离子螯合树脂亲和纯化Pcr V蛋白。利用噬菌体抗体库筛选Pcr V结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,PCR扩增该抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,收取培养细胞上清,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体。利用ELISA实验检测抗体亲和力,并通过小鼠铜绿假单胞菌感染肺炎模型验证抗体活性。结果:获得重组蛋白Pcr V,通过噬菌体展示技术筛选并制备了一株全人源抗Pcr V单克隆抗体YG5。ELISA实验结果表明YG5抗体具有较高的亲和力(EC50=61 ng/ml),进一步的实验结果表明,YG5能有效抵抗铜绿假单胞菌感染,降低小鼠的死亡率。结论:靶向铜绿假单胞菌Pcr V蛋白的全人源单克隆抗体YG5能够有效地抑制铜绿假单胞菌致病性,降低其对机体感染,有可能成为抗铜绿假单胞菌感染的治疗性抗体。
- 管章春刘方杰刘成华高亚萍沈倍奋杨光
- 关键词：铜绿假单胞菌单克隆抗体
