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弧菌三联融合毒素基因表达及ELISA检测方法建立被引量：2: 2009年; 采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因,即副溶血性弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联,得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为FT)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6%。FT的开放阅读框架全长3225bp,编码1074个氨基酸残基,预测分子量为120.4kDa。将FT亚克隆至表达载体pET-22b(+)中,再转化至E.coliBL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAEG分析,融合蛋白分子量与预测的相符。终浓度为1mmol/L的IPTG,37℃诱导4h,融合毒素蛋白表达量最高,经薄层扫描分析,此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49%。融合毒素蛋白包涵体经纯化,免疫豚鼠制备血清抗体,确定间接ELISA的最佳工作条件,并进行敏感性、特异性、重复性及模拟样品检测试验,建立了食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法。; 李月婷卢士英周玉饶星霍方珍任洪林柳增善; 关键词：食物中毒弧菌 ELISA

食物中毒性弧菌三联融合毒素基因克隆与表达: 本研究采用柔性Linker（GGGGS）和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因,即副溶血弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联,得...; 李月婷卢士英周玉饶星霍方珍任洪林柳增善; 关键词：食物中毒弧菌串联基因蛋白表达; 文献传递

三株沙门氏菌的鞭毛基因重组及蛋白的免疫特性被引量：1: 2008年; 三株强致病性的甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌I相鞭毛抗原分别为H-1a、H-1i、H-1c。设计三对引物,利用PCR扩增出具有决定抗原表位特异性的基因片段,长度分别为1088bp、633bp、1056bp。利用引物上的Linker和重叠延伸PCR扩增技术将此三段抗原决定区基因序列串联,获得重组鞭毛基因,共长2747bp。构建鞭毛重组基因(F-a-i-c)的原核表达载体pET-28a-F,将重组质粒转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析后得到目的蛋白大小约为95kDa,并优化表达条件。在37℃下终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h后,经薄层扫描分析得到目的蛋白表达量约为11.2%。超声破碎细胞后,纯化含有目的蛋白的包涵体,对八周龄雌性豚鼠做足垫免疫组,间接ELISA检测抗体效价为1:512000,敏感性为8μg/ml,这为后期抗体检测研究奠定了基础。; 饶星卢士英王颖李月婷沈庆丰柳增善柳增善; 关键词：沙门氏菌基因重组蛋白表达免疫原性

氯霉素单克隆抗体ELISA检测方法的建立被引量：2: 2007年; 目的建立CAP间接和直接ELISA检测方法。方法用重氮化法分别偶联氯霉素(Chloramphenicol,CAP)与BSA和OVA作为免疫原和检测原,腹腔注射8周健康雌BALB/c小鼠大量制备抗CAP的单克隆抗体并优化条件,建立了CAP的快速、灵敏、简便的直接和间接竞争ELISA方法。结果两种检测方法的回归方程和相关系数分别为:y=-25.411x+97.041,R2=0.9889和y=-27.768x+103.91,R2=0.9889,线性范围分别为1.87-75 ng/mL和0.93-25ng/mL,对CAP的最低检出浓度为0.97 ng/mL和0.35 ng/mL。并利用所建立的两种ELISA方法对鸡肉模拟样品进行了检测,其检测样品的回收率分别为98.607%,85.152%。结论为下步CAP的试纸条或试剂盒建立提供基础。; 王颖张磊饶星李月婷柳增善; 关键词：氯霉素 CIELISA

沙门菌三种血清型鞭毛基因重组及免疫学检测方法研究: 强致病性的甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌Ⅰ相鞭毛抗原的血清型分别为a、i、c。针对这三种沙门菌Ⅰ相鞭毛抗原H1-a、H1-i、H1-c的编码基因设计三对扩增引物。首先,利用常规PCR技术扩增出三段Ⅰ相鞭毛抗...; 饶星; 关键词：基因重组蛋白表达免疫学检测; 文献传递

3种食物中毒性弧菌毒素基因的融合与表达: 本研究采用柔性Linker序列(GGGGS)和重叠延伸PCR方法，对副溶血弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的结构基因片段进行串联，得到多联融合毒素...; 李月婷任洪林饶星柳增善卢士英; 关键词：食物中毒基因表达; 文献传递

沙门菌鞭毛抗原及其多样性研究进展被引量：6: 2008年; 沙门菌鞭毛蛋白具有抗原性。鞭毛分型抗原有多种,抗原特异性取决于氨基酸序列和种类的不同,抗原表位在鞭毛蛋白二级结构的可变区部位,在分子水平上抗原决定区位于鞭毛基因中间可变区中。利用分型抗原特异性建立起来的免疫学检测被广泛应用。沙门菌属特异性共同抗原具有属特异性,广泛分布于沙门菌全属。共同抗原具有序列保守性和构像稳定性,在沙门菌属内同源性高,ELISA试验表明此抗原免疫原性较好,利用此抗原属特异性建立起免疫学检测沙门菌属已得到应用。; 饶星李月婷柳增善; 关键词：鞭毛

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饶星