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靶向马铃薯StProDH1基因的CRISPR/Cas9 sgRNA表达载体构建: 2019年; CRISPR/Cas9基因编辑系统已成为许多作物基因功能研究和品种改良的重要工具。脯氨酸(Pro)在植物响应干旱胁迫方面起着重要作用,脯氨酸脱氢酶ProDH是脯氨酸分解途径中的限速酶。为了研究StProDH1在马铃薯脯氨酸代谢中的作用,本研究以StProDH1为靶基因,构建了表达马铃薯脯氨酸脱氢酶g RNA的CRISPR/Cas9基因敲除系统,在StProDH1基因5'端第一个外显子上为靶标区域选择设计sgRNA,以p P1C.4为模板,克隆得到sgRNA克隆框,将得到的sgRNA克隆框通过同源重组技术连接到pP1C.4载体中,获得pP1C.4-Cas9-ProDH1-g RNA载体。通过设计引物特异性扩增以及测序进一步确定sgRNA准确地连入载体,这对马铃薯中脯氨酸累积及其培育抗旱马铃薯新品种具有重要意义。; 李世贵杨江伟朱熙王树林张宁司怀军; 关键词：马铃薯

MicroRNA介导的基因降解参与马铃薯品种抗旱能力差异的研究: 马铃薯是世界范围内最重要的粮食作物之一,干旱胁迫严重影响其生长和产量.植物对干旱胁迫的响应主要是通过调控相关基因的表达,从而产生一系列生化生理反应来适应干旱胁迫.然而,作物对响应干旱胁迫的敏感性随基因型不同而不同,这是由...; 杨江伟张宁朱熙马瑞姚磊武亮亮司怀军王蒂

马铃薯StNCED1基因过表达载体的构建及其遗传转化被引量：4: 2017年; 马铃薯块茎的休眠和发芽对于块茎生产和加工极为重要,延长块茎休眠期有助于降低块茎水分和养分的消耗,从而提高其应用价值。本研究用PCR方法从马铃薯中克隆了9-顺式-环氧类胡萝卜素双氧合酶(NCED)编码基因St NCED1,并构建了马铃薯块茎特异表达启动子CIPP驱动的St NCED1基因的植物过表达载体p BIC-St NCED1,然后通过根癌农杆菌介导法转化马铃薯栽培品种"陇薯3号"获得转化植株,经卡那霉素抗性筛选得到5株抗性苗,PCR检测证明St NCED1基因已整合到马铃薯的基因组中。qRT-PCR检测表明St NCED1基因在转基因植株试管薯中的表达量分别比未转基因的对照增加2.10~8.09倍。该研究有助于培育块茎休眠期延长的马铃薯新种质。; 马瑞张宁杨江伟朱熙姚磊武亮亮司怀军; 关键词：植物表达载体马铃薯块茎休眠期

马铃薯StmiR166b靶基因的鉴定及其表达分析被引量：4: 2019年; 为阐明马铃薯(Solanum tuberosum L.)StmiR166b的生物学功能,以栽培品种‘甘农薯2号’试管苗为试验材料,采用定量PCR技术检测StmiR166b及其靶基因StHB14、StHB15在不同组织中的差异表达;利用pRS300质粒为模板,通过over-lapping PCR技术克隆了包含StmiR166b-StmiR166b^*成熟体序列的前体结构,构建了其人工表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化马铃薯获得了转基因植株。结果表明,StmiR166b及其靶基因StHB14和StHB15在马铃薯根、茎和叶中均有表达,在转基因株系L1、L3中靶基因不同程度地下调表达;与非转基因对照相比,转基因株系的株高和根长变短,生长受到抑制。; 武亮亮张宁张宁朱熙马瑞杨江伟杨江伟; 关键词：马铃薯

马铃薯StCCaMK90基因的生物信息学分析及过表达载体的构建被引量：1: 2019年; Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶(calcium and calmodulin-dependent protein kinases,CCaMKs)是一种能参与植物逆境信号传导过程的激酶。本研究通过生物信息学分析该蛋白分子量为6.6 kD,理论等电点为8.25,推测为亲水性蛋白,含有跨膜结构域。同源性分析显示,该基因编码蛋白与番茄CCaMK5具有较高的同源性。以马铃薯栽培品种‘Favorita’的cDNA为模板,扩增出StCCaMK90基因,利用双酶切及质粒重组法构建过表达重组载体p CPB-CCaMK90,为后期通过遗传转化方法研究CCaMK的功能提供科学依据。; 陈馨朱熙朱熙洪旭升杨江伟杨江伟司怀军; 关键词：生物信息学

马铃薯HD-Zip Ⅰ家族ATHB12基因的克隆及功能鉴定被引量：6: 2016年; HD-Zip I是一类植物特异转录因子,在植物应对外界逆境胁迫过程中有重要的调控作用。本研究从马铃薯栽培品种甘农薯2号中克隆了HD-Zip I转录因子ATHB12基因,其开放阅读框为759 bp,编码252个氨基酸残基。该基因位于马铃薯第1染色体,其启动子区含有ABRE、LTRECOREATCOR15和WBOXATNPR1等多种响应非生物胁迫(ABA、低温、脱水和高盐)的顺式作用元件。ATHB12基因在马铃薯根、茎和叶中均有表达,其根中表达量最高。q RT-PCR分析证实该基因的表达受聚乙二醇(PEG)、Na Cl和ABA诱导,受低温抑制。构建了由组成型表达启动子Ca MV 35S驱动的ATHB12基因的过表达载体,通过农杆菌介导法转化马铃薯获得了转基因植株。干旱处理后,转基因植株叶片中丙二醛含量显著低于非转基因植株(P<0.05),而脯氨酸含量显著高于非转基因植株(P<0.05);转基因植株根鲜重和干重均高于非转基因植株;说明马铃薯ATHB12基因可能参与了逆境胁迫的响应。; 武亮亮姚磊马瑞朱熙杨江伟张宁司怀军; 关键词：马铃薯 HD-ZIP 丙二醛脯氨酸

马铃薯StSOD1基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定被引量：1: 2020年; 为了筛选与马铃薯超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因StSOD1作用的上游蛋白,构建其酵母双杂交诱饵重组载体。本研究利用PCR方法扩增得到马铃薯StSOD1的基因片段,通过与pMD-T18连接构建克隆载体,经验证构建成功后,与诱饵载体pGBKT7连接构建诱饵重组载体,经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功后,通过PEG/Li Ac法将诱饵载体pGBKT7-StSOD1与空载体pGBKT7分别转化到酵母AH109感受态细胞中,检测其是否有自激活作用和对酵母菌株的毒性作用。结果表明:经PCR扩增后得到了StSOD1基因,成功构建了诱饵重组载体pGBKT7-St SOD1,并且此诱饵载体无自激活活性和对酵母菌株的毒性作用。此研究结果可进一步为筛选与StSOD1互作的蛋白质及功能研究提供科学依据。; 车育章张宁朱熙王树林陈馨罗红玉洪旭升司怀军; 关键词：酵母双杂交诱饵载体

马铃薯海藻糖酶基因人工miRNA载体的构建: 2019年; Microcosmic (miRNAs)是一类具有调控功能的内源性单链非编码小分子RNA,通过在转录后水平与靶基因互补结合来调控靶基因的表达。海藻糖是一种广泛存在于植物体内的渗透调节性物质,其在植物响应干旱胁迫中发挥着非常重要的作用。本研究利用人工miRNA技术(artificial microRNA, amiRNA)设计特异性沉默马铃薯海藻糖基因(StTRE)的人工miRNA (amiR-StTRE),并利用巢式PCR技术克隆得到包含amiRTRE前体序列的701 bp目的片段。然后将获得的DNA片段(701 bp)与表达载体pCPB121通过双酶切和质粒重组法构建StTRE基因amiRNA表达载体(pCPB121-amiR-StTRE),并经过双酶切图谱分析和测序检测,成功构建了表达载体pCPB121-amiR-StTRE。以期有目的地利用amiRNA进行马铃薯的抗旱性遗传改良提供分子理论依据。; 王周霞罗红玉张欢欢朱熙朱熙刘雪王树林杨江伟杨江伟司怀军; 关键词：TUBEROSUM 干旱胁迫

马铃薯StMAPK4响应低温胁迫的功能解析被引量：2: 2022年; 马铃薯易受低温危害,造成减产。MAPK基因广泛参与多种环境胁迫,研究发现其参与低温调控。为探究马铃薯StMAPK4在响应低温胁迫过程中的功能,本研究以马铃薯栽培品种‘Atlantic’为试验材料,分析其在低温(4℃)胁迫下不同时间点在马铃薯根茎叶中的表达特性,并对StMAPK4基因进行生物信息学分析及对其编码的蛋白进行亚细胞定位分析,构建StMAPK4的过表达和RNAi干扰表达载体,转化马铃薯获得转基因植株,并分析了在4℃处理下非转基因(NT)、过表达和RNAi干扰表达转基因植株的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性、脯氨酸(Pro)和丙二醛(MDA)含量的变化。结果显示,StMAPK4蛋白的等电点为4.97,属于酸性蛋白,该蛋白定位于细胞核和细胞膜;低温胁迫下,StMAPK4在根茎叶中的表达量显著升高;StMAPK4过表达植株的SOD、POD活性和脯氨酸含量较NT植株明显升高,而MDA含量明显降低;StMAPK4干扰表达植株的SOD、POD活性和脯氨酸含量较NT植株明显降低,而MDA含量明显升高;通过表型观察发现,非转基因和RNAi干扰表达植株的叶片萎蔫严重,而过表达植株的叶片受影响较小。因此,过表达StMAPK4基因可以增强马铃薯植株对低温胁迫的耐受性。; 冯亚朱熙罗红玉李世贵张宁张宁; 关键词：马铃薯亚细胞定位

马铃薯StMAPK3基因的克隆及其遗传转化: 2016年; 本研究以拟南芥AtMAPK3的核苷酸序列(Gen Bank accession No.NM_114433.2)作为查询序列进行BLAST搜索获得了马铃薯中的同源序列,将其命名为StMAPK3,其开放阅读框为1 122 bp,编码373个氨基酸。StMAPK3具有典型的促分裂原活化蛋白激酶的磷酸化位点TEY基序。从马铃薯栽培品种"大西洋"中克隆得到编码StMAPK3的基因序列,并构建了其植物表达载体p CPB-StMAPK3。用冻融法将重组质粒转入根癌农杆菌LBA4404中,然后再转化马铃薯栽培品种"大西洋"获得了转基因植株,为进一步明确MAPK在马铃薯信号转导过程中的作用提供帮助。; 朱熙刘雪马瑞姚磊武亮亮唐勋张宁司怀军; 关键词：促分裂原活化蛋白激酶马铃薯

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朱熙

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