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NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达被引量：3: 2012年; 目的:构建核受体家族分子NR6A1重组腺病毒载体,观察NR6A1蛋白在血管平滑肌细胞中的表达。方法:从cDNA文库中,利用PCR方法钓取目的基因NR6A1,采用In-Fusion克隆技术将目的基因插入腺病毒穿梭质粒pDC315-3FLAG,将重组质粒与辅助包装质粒pBHG loxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒。运用蛋白免疫印迹技术检测NR6A1蛋白表达水平;运用免疫荧光化学技术检测NR6A1蛋白在平滑肌细胞中的亚细胞定位。结果:通过In-Fusion技术获得pDC-NR6A1-3FLAG阳性质粒,该质粒在HEK293细胞中重组成腺病毒Ad-NR6A1;蛋白免疫印迹技术发现pDC-NR6A1-3FLAG重组质粒及Ad-NR6A1均能够正确表达NR6A1蛋白;而且该蛋白定位于培养的血管平滑肌细胞核中。结论:In-Fusion技术能够高效克隆NR6A1基因,所构建的NR6A1过表达腺病毒能够正确表达NR6A1核蛋白,NR6A1定位于血管平滑肌细胞核中。; 张亚辉钱航张志峰杨汉东闵新文郎明健张鹏; 关键词：平滑肌细胞

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张志峰