赵亚飞
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 供职机构：河南科技大学医学院更多>>
- 发文基金：河南省卫生厅医学科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向人CHOP基因shRNA真核表达载体的构建
- 2017年
- [目的]构建靶向干扰内质网应激标志性因子CHOP的shRNA真核表达载体,并检测其对CHOP的干扰效率。[方法]查询Gen Bank数据库,获取人源CHOP基因mRNA的序列,按照小干扰RNA(siRNA)靶序列的设计原则,设计并构建靶向CHOP基因mRNA的4个特异性shRNA真核表达载体(shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4)和1个无同源性的阴性对照载体(shRNA-NC),经PCR和测序鉴定确认shRNA载体构建成功后,脂质体转染人正常肝细胞系(L-02),Western Blot法检测CHOP蛋白的表达,筛选出干扰效果最好的表达载体。[结果]PCR和测序结果显示,5个shRNA表达载体均构建成功。Western Blot结果显示,0.06 g/L衣霉素损伤24h后,与内质网应激模型组相比,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4组的CHOP蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),其中shRNA-1和shRNA-4组CHOP干扰效果最明显。[结论]构建了并成功筛选出靶向干扰CHOP基因的真核表达载体,为深入研究CHOP介导内质网应激所致细胞凋亡的信号通路奠定了实验基础。
- 高杨段冷昕赵亚飞吴欣芳王建刚
- 关键词：CHOPRNA干扰SHRNA真核表达载体内质网应激
- 二至丸对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的防护作用及机制被引量：10
- 2018年
- 目的研究二至丸对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的预防作用及潜在机制。方法雄性昆明种小鼠每天1次ig给予二至丸1.4,2.8和5.6 g·kg-1,连续14 d,末次给药8 h后,模型组和二至丸组小鼠ip给予10%CCl4溶液10 mL·kg-1,24 h后处死小鼠,计算肝和脾指数。采用生化法测定血清谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性及丙二醛(MDA)的含量;HE染色观察肝组织病理改变;TUNEL法观察肝细胞凋亡;免疫组化法和Western蛋白质印迹法检测内质网应激(ERS)标志性蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡糖调节蛋白78(GRP78)表达。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清中GPT和GOT活性及MDA含量显著升高(P<0.01),SOD和GPX活性显著下降(P<0.01);肝组织出现明显的炎症细胞浸润和坏死,肝指数明显增加(P<0.01),脾指数显著减小(P<0.01);CHOP和GRP78表达水平显著上调(P<0.01)。与模型组相比,二至丸各剂量组血清GPT和GOT的活性及MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),SOD和GPX活性显著升高(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示,二至丸各剂量组均不同程度地减轻肝组织脂肪空泡和炎症细胞浸润;二至丸2.8和5.6 g·kg-1组小鼠肝指数显著减小,脾指数显著增加(P<0.05);TUNEL检测结果显示,二至丸各剂量组肝细胞凋亡率明显下降(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性(r=0.99,P<0.01);免疫组化及Western蛋白质印迹结果显示,二至丸1.4,2.8和5.6 g·kg-1组CHOP表达显著下降(P<0.01),并呈剂量依赖性(r=0.89,P<0.05),2.8和5.6 g·kg-1组GRP78表达显著下降(P<0.01)。结论二至丸对CCl4致小鼠急性肝损伤具有预防保护作用,其机制可能与抗氧化应激,抑制ERS,从而抑制肝细胞凋亡有关。
- 段冷昕高杨胡举赵亚飞吴欣芳王建刚
- 关键词：二至丸四氯化碳内质网应激
- 衣霉素诱导L02细胞内质网应激模型的构建被引量：4
- 2016年
- 内质网是细胞内蛋白质翻译、合成、折叠、修饰及成熟的主要场所。各种病理情况破坏内质网稳态，非折叠和错误折叠蛋白大量蓄积，触发内质网应激（endoplasmic reticulu mstress，ERS）。
- 王琪段冷昕徐正顺赵亚飞席守民
- 关键词：细胞内质网应激模型L02衣霉素内质网应激
- 蚯蚓活性组分对四氯化碳诱导小鼠内质网应激所致急性肝损伤的保护作用被引量：4
- 2017年
- 该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠内质网应激(ERS)所致急性肝损伤的保护作用。腹腔注射10%CCl_4制备内质网应激所致急性肝损伤模型;血清生化指标检测ALT,AST,SOD,GSH-PX酶活性及MDA含量变化;计算肝、脾指数;HE染色观察肝脏病理学变化;TUNEL法检测肝组织细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测ERS标志性蛋白GRP78和CHOP表达情况;Western blot法检测ERS相关蛋白的表达水平。结果显示,与模型组小鼠相比,EWAs的高、中、低剂量组血清学各项指标均有显著改善(P<0.05或P<0.01),肝脏病变范围减小,且损伤程度明显减轻,小鼠肝脏指数和脾脏指数均有明显变化(P<0.05或P<0.01);各剂量给药组的肝组织细胞凋亡指数明显下降(P<0.05或P<0.01);肝组织中ERS相关蛋白GRP78和CHOP表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),各剂量给药组均能显著下调GRP78和CHOP以及CHOP上游信号通路PERK-eIF2α-ATF4的蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。综上,EWAs对ERS所致的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用,其机制可能通过抑制氧化应激和ERS,从而减轻肝脏损伤,并可下调ERS标志性凋亡蛋白CHOP表达,抑制细胞凋亡实现的。
- 赵亚飞高杨吴欣芳王建刚段冷昕
- 关键词：内质网应激GRP78CHOP
