郑菲
- 作品数：13 被引量：24H指数：3
- 供职机构：武汉大学中南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金武汉市青年科技晨光计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 细胞焦亡相关指标与大麻素2型受体表达量的相关性分析
- 2020年
- 目的:探讨在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞焦亡模型中,焦亡相关指标与大麻素2型受体(CB2R)表达量的相关性。方法:体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞株,用不同浓度LPS刺激巨噬细胞建立细胞焦亡模型。用Western Blot和实时荧光定量(RT-PCR)法检测CB2R和焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、Caspase-11和GSDMD的表达,并采用Pearson法分别分析NLRP3、Caspase-1、Caspase-11和GSDMD与CB2R之间的相关性。结果:巨噬细胞在接受LPS刺激后,CB2R和焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD的表达升高,且随着LPS刺激浓度的上升,以上指标的表达均明显上调(P<0.05)。相关性分析显示,NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD表达均与CB2R呈显著正相关(r>0.9,P<0.01)。结论:在不同浓度LPS作用下,巨噬细胞焦亡与CB2R的表达呈高度正相关,CB2R可能参与了巨噬细胞焦亡的调节过程。
- 刘安鹏张彬刘强胜郑菲袁清红詹佳陈凯
- 关键词：巨噬细胞脂多糖
- 盐酸戊乙奎醚对内毒素刺激的肺微血管内皮细胞的作用及对β-抑制蛋白-2的影响
- 2017年
- 目的:探讨在内毒素(LPS)作用下盐酸戊乙奎醚(PHCD)对肺微血管内皮细胞的作用及β-抑制蛋白-2(β-arrestin-2)表达的影响。方法:培养人肺微血管内皮细胞,用随机数字表法将其分为4组:正常对照组(C组)、LPS诱导组(L组)、PHCD+LPS组(PL组)及PHCD对照组(P组)。P组和PL组加入终浓度为2μg/ml的PHCD,L组及PL组加入终浓度为0.1μg/ml的LPS,PL组于加入PHCD后60min再加入LPS,C组加入同等体积的培养基。加入LPS 60min后,测细胞LDH水平、VCAM-1、VE-cadherin表达及β-arrestin-2的表达。结果:与C组比较,L组细胞LDH水平、VCAM-1表达升高,VE-cadherin和β-arrestin-2表达降低;与L组比较,PL组细胞LDH水平、VCAM-1表达降低,而VE-cadherin和β-arrestin-2表达增加。结论:盐酸戊乙奎醚预处理,可以通过上调β-arrestin-2的表达,减轻LPS引起的肺微血管内皮细胞损伤。
- 姚曙东郑菲詹佳
- 关键词：盐酸戊乙奎醚人肺微血管内皮细胞血管内皮钙黏蛋白
- 激活大麻素2型受体在LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制被引量：2
- 2019年
- 目的探讨激活大麻素2型受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制。方法将巨噬细胞以1×105/mL的密度接种于6孔培养板(2 mL/孔),采用随机数字表法将其分为4组(n=6):对照组(C组)、LPS组(LPS组)、LPS+CB2R激动剂HU308组(LPS+HU308组)、LPS+CB2R激动剂HU308+3-甲基腺苷组(LPS+HU308+3-MA组)。LPS组、LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为1 μg/mL的LPS,孵育15 min时,LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 mmol/L的3-MA,继续孵育15 min,LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 μmol/L的HU308孵育24 h。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18的浓度;采用RT-PCR法检测ICAM-1和NLRP3 mRNA的表达水平,采用western blot法检测LC3和Beclin1的表达水平,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果与C组比较,LPS组TNF-α[(228.86±10.20) pg/mL vs (140.05±5.54) pg/mL、IL-1β[(363.62±8.14) pg/mL vs (244.82±9.11) pg/mL]和IL-18[(293.28±13.57) pg/mL vs.(202.84±9.54) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(5.88±0.32) vs.(1.00±0.03)]和NLRP3[(8.07±0.93) vs.(1.01±0.05)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.50±0.03) vs.(0.40±0.06)]和Beclin1[(0.51±0.04) vs.(0.16±0.03)]表达上调(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+HU308组TNF-α[(165.44±7.07) pg/mL]、IL-1β[(272.09±3.35) pg/mL]和IL-18[(220.41±6.01) pg/mL]的浓度降低(均P<0.05),ICAM-1[(3.21±0.35)]和NLRP3[(1.54±0.30)] mRNA表达降低(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.71±0.03)]和Beclin1[(0.71±0.02)]表达上调(均P<0.05);与LPS+HU308组比较,LPS+HU308+3-MA组TNF-α[(197.06±5.59) pg/mL]、IL-1β[(318.98±11.54) pg/mL]和IL-18[(243.33±8.71) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(4.04±0.21)]和NLRP3 [(5.87±0.77)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.44±0.08)]和Beclin1[(0.32±0.03)]表达下调(均P<0.05)。结论激活大麻素2型受体可抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌,�
- 袁清红刘安鹏刘强胜郑菲张宗泽王焱林詹佳
- 关键词：炎症因子分泌RAW264.7巨噬细胞
- 大麻素2型受体在脂多糖诱导小鼠巨噬细胞焦亡中的作用被引量：2
- 2020年
- 目的评价大麻素2型受体(CB2R)在脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞焦亡中的作用。方法常规培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、LPS组(LPS组)和CB2R激动剂HU308组(HU308组)。C组细胞不给予药物处理,余2组加入LPS,终浓度为1μg/ml,孵育15 min时HU308组加入HU308,终浓度为10μmol/L继续孵育6 h。采用RT-PCR法检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1、caspase-11和消皮素D(GSDMD)的mRNA表达,采用Western blot法检测NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD及其C末端(GSDMD-C)表达,计算GSDMD-C/GSDMD比值,采用ELISA法检测培养液IL-18和IL-1β的浓度。结果与C组比较,LPS组NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD和GSDMD-C表达上调,GSDMD-C/GSDMD比值升高,培养液IL-18和IL-1β浓度升高(P<0.05);与LPS组比较,HU308组NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD和GSDMD-C表达下调,GSDMD-C/GSDMD比值降低,培养液IL-18和IL-1β浓度降低(P<0.05)。结论CB2R参与了LPS诱导巨噬细胞焦亡的过程。
- 刘安鹏李祯张彬刘强胜郑菲袁清红陈凯张宗泽王焱林詹佳
- 关键词：脂多糖类巨噬细胞
- 提高麻醉实习教学质量的探讨被引量：1
- 2016年
- 通过麻醉实习带教实践,从三个方面对提高麻醉实习教学质量进行探讨:完善带教教师队伍、对学生理论及操作能力严格训练、采用不同的教学方式调动实习学生的主观能动性。这些方法提高了麻醉实习教学质量,增强了学生对麻醉实习的兴趣,使学生的临床实践能力得到较大提升。
- 詹佳郑菲张宗泽
- 关键词：麻醉实习教学教学质量
- M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用被引量：1
- 2018年
- 目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用.方法 正常人肺微血管内皮细胞和M3 shRNA转染人肺微血管内皮细胞,以1×105个∕ml的密度接种于6孔板(2 ml∕孔)或培养瓶(4 ml∕瓶)中,采用随机数字表法分为5组(n=5):对照组(C组)、LPS组、PHC+LPS组(P+LPS组)、LPS+M3 shRNA转染组(LPS+shRNA组)和PHC+LPS+M3 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组).C组不给予药物处理;余各组均加入终浓度为0.1μg∕ml LPS;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入LPS前1 h加入PHC 2μg∕ml;LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol∕L M3受体shRNA的质粒转染细胞.加入LPS后1 h时,采用流式细胞仪测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的含量;免疫荧光法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达;Western blot法检测NF-κB p65和IκB的表达;ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量;实时定量PCR法分别检测加入LPS后10、30和60 min时M3受体mRNA表达水平.结果 与C组比较,LPS组和P+LPS组F-actin含量降低,VE-cadherin和IκB表达下调,TNF-α和IL-6含量升高,MLCK和NF-κB p65表达上调(P<0.05);与C组比较,LPS组M3受体mRNA表达上调(P<0.05),P+LPS组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组和LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05).结论 PHC可通过干扰M3受体,抑制NF-κB介导炎性反应,减轻LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤.
- 刘强胜颜学滔刘安鹏袁清红沈石文郑菲张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：胆碱能拮抗剂内毒素类内皮细胞
- M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用：与MAPK信号通路的关系
- 2017年
- 目的评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4 ml/瓶）中，采用随机数字表法分为6组（n＝5）：空白对照组（C组）、M3受体shRNA转染组（shRNA组）、脂多糖组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋脂多糖组（P＋LPS组）、脂多糖＋M3受体shRNA转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋脂多糖＋M3受体shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）。shRNA组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shRNA的质粒转染细胞。LPS组和LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2 μg/ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1 h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1 h。采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性，采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）的表达水平，采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27（HSP27）的表达水平，采用实时定量PCR法测定M3受体mRNA的表达。结果与C组比较，shRNA组M3受体mRNA表达下调，LPS组细胞通透性增高，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M3受体mRNA表达上调（P〈0.05）；与LPS组比较，P＋LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）；与LPS＋shRNA组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）。结论盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M3受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关。
- 沈石文刘强胜郑菲袁清红王轶芃张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：内皮细胞P38丝裂原活化蛋白激酶类细胞外信号调节MAP激酶类
- β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞通透性升高中的作用
- 2017年
- 目的 评价β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞通透性升高中的作用.方法 人肺微血管内皮细胞以1×10^5个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4ml/瓶）中,采用随机数字表法分为5组（n=15）：空质粒转染组（C组）、LPS＋空质粒转染组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋LPS＋空质粒转染组（P＋LPS组）、LPS＋β-抑制蛋白-1 shRNA转染组（LPS＋ shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋LPS＋β-抑制蛋白-1 shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）.LPS组和LPS＋shRNA组分别以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L β-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h;P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组分别以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L β-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1h.采用Transwell法测定细胞通透性,采用免疫荧光化学法检测热休克蛋白27（HSP27）的表达水平,采用Western blot法检测β-抑制蛋白-1、丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK）的表达水平,并计算p-p38MAPK/p38MAPK比值.结果 与C组比较,LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性升高,HSP27表达上调,p-p38MAPK/p38MAPK比值升高,β-抑制蛋白-1表达下调（P〈0.05）,P＋LPS组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与LPS组比较,P＋LPS组细胞通透性降低,HSP27表达下调,p-p38MAPK/p38MAPK比值降低,β-抑制蛋白-1表达上调,P＋LPS＋shRNA组p-p38MAPK/p38MAPK比值升高（P〈0.05）,其余指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与P＋LPS组比较,P＋LPS＋shRNA组细胞通透性升高,HSP27表达上调,p-p38MAPK/p38MAPK比值升高,β-抑制蛋白-1表达下调（P〈0.05）.结论 盐酸戊乙奎醚抑制LPS导致的人肺微血管内皮细胞通透性升高的机制完全与β-抑制蛋白-1有关.
- 袁清红颜学滔郑菲王轶芃张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：抑制蛋白类胆碱能拮抗剂内毒素类毛细血管通透性
- 大麻素2型受体调控自噬在脓毒症治疗中的研究进展被引量：2
- 2019年
- 脓毒症是因感染引起的宿主反应失调而导致危及生命的器官功能障碍;由脓毒症引起的循环和细胞/代谢异常的高死亡率状态称脓毒症休克。全球每年有数百万人罹患脓毒症,其中1/4或更多的患者死亡。大麻素2型受体(CB2R)属于G蛋白偶联受体,主要表达在免疫组织中。研究表明,CB2R参与了多种疾病的炎症反应过程。细胞自噬是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。越来越多的研究表明自噬参与了细胞的免疫过程,通过清除病原体和负向调节Nod样受体蛋白-3(NLRP3)炎症小体调控免疫过程。大麻素通过调控自噬发挥抗炎和免疫调节作用,使它成为治疗脓毒症的新靶点,为脓毒症的治疗带来了新希望。
- 袁清红郑菲刘强胜詹佳
- 关键词：脓毒症自噬炎症介质免疫调节
- 激活大麻素2型受体对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响:自噬在其中的作用被引量：7
- 2018年
- 目的评价激活大麻素2型受体(CB2R)对脓毒症小鼠急性肺损的影响及自噬在其中的作用。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠24只,8~10周龄,体重20~25g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、脓毒症+CB2R激动剂HU308组(Sep+HU308组)、脓毒症+HU308+自噬抑制剂3-甲基腺苷组(Sep+HU308+3-MA组)。采用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症模型。Sep+HU308组和Sep+HU308+3-MA组于术后15min时腹腔注射HU3082.5mg/kg,15min后Sep+HU308+3-MA组腹腔注射3-甲基腺苷10mg/kg。术后12h时取肺组织,HE染色观察病理学结果,并进行肺损伤评分;采用RT-PCR法检测TNF-α、IL-18和IL-1β的mRNA表达水平;采用免疫组织化学法测定自噬相关蛋白Atg5的表达;采用Westernblot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62的表达水平,计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与Sham组比较,其余3组肺组织TNF-α、IL-18和IL-1β的mRNA、Atg5表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,肺损伤评分升高,Sep组和Sep+HU308组Beclin-1表达上调,p62表达下调,Sep+HU308+3-MA组p62表达上调(P<0.05);与Sep组比较,Sep+HU308组和Sep+HU308+3-MA组肺组织TNF-α、IL-18和IL-1β的mRNA表达下调,Atg5表达上调,肺损伤评分降低,Sep+HU308组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,Beclin-1表达上调,p62表达下调,Sep+HU308+3-MA组Beclin-1表达下调,p62表达上调(P<0.05);与Sep+HU308组比较,Sep+HU308+3-MA组肺组织TNF-α、IL-18和IL-1β的mRNA表达上调,Atg5和Beclin-1表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,p62表达上调,肺损伤评分升高(P<0.05)。结论激活CB2R可减轻脓毒症小鼠急性肺损伤,部分机制可能与增强自噬,减轻炎症反应有关。
- 袁清红刘强胜刘安鹏郑菲王焱林张宗泽詹佳
- 关键词：自噬脓毒症
