王守艳
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 红景天苷对硝普钠损伤HT22细胞LC3和Beclin-1表达的影响
- 2016年
- 目的:观察红景天苷对硝普钠损伤小鼠海马细胞系神经细胞株HT22细胞LC3和Beclin-1表达的影响。方法:HT22细胞与1 mmol/L硝普钠共同孵育不同时间,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测细胞活力;Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达水平。HT22细胞与不同浓度红景天苷(60、120和240μmol/L)预孵育24 h后,加入1 mmol/L硝普钠损伤24 h。MTT法检测细胞活力;显微镜下观察各组细胞形态;免疫荧光染色检测LC3荧光强度;Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达水平。结果:1 mmol/L硝普钠可降低细胞活力,增加自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达,呈时间依赖性。红景天苷预处理可显著改善硝普钠损伤后的细胞生长状态和活力;抑制硝普钠损伤导致的LC3荧光强度的增加;拮抗硝普钠损伤后自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达的增加。结论:红景天苷可显著拮抗硝普钠诱导的HT22细胞损伤,其机制可能与抑制自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达有关。
- 邓爱清马黎敏汪鑫王守艳
- 关键词：红景天苷硝普钠自噬
- FoxO3腺病毒载体的构建及对脑缺血损伤中自噬相关蛋白的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:构建转录因子FoxO3的过表达腺病毒载体AV-FoxO3,包装产生高滴度腺病毒;观察其感染氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤小鼠海马细胞系HT22细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法:在Gen Bank中查询FoxO3基因及其上下游的序列,设计合成引物并在引物中引入HA序列,逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)体外扩增目的基因,用限制性内切酶NheⅠ-HF和Af1Ⅱ双酶切表达载体p AdenoEF1-BGH-MCMV-EGFP-3FLAG,使用无缝克隆试剂盒将目的基因构建进表达载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取转化子进行菌落PCR鉴定获得阳性克隆(FoxO3重组质粒)并测序;利用Ad Max系统在HEK293A细胞中分别包装FoxO3重组质粒与对照质粒,得到AV-FoxO3和CMV-GFP-A.D.并测定病毒滴度;用AV-FoxO3和CMV-GFP-A.D.感染HT22细胞,荧光显微镜观察感染是否成功,Western Blot检测HT22细胞中HA蛋白(重组FoxO3序列中所含的标签蛋白)的表达;Western Blot检测OGD损伤HT22细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。结果:菌落PCR和测序结果均表明FoxO3重组质粒构建成功;与辅助质粒共包装感染细胞获得腺病毒颗粒,测定滴度分别为6.32×1010 Ifu/m L和4×1011Ifu/m L;荧光观察及Western Blot检测均说明AV-FoxO3成功地感染了HT22细胞;FoxO3过表达促进自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。结论:AV-FoxO3构建成功并可用于HT22细胞的感染,增加细胞内FoxO3表达;FoxO3参与调控自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。
- 汪鑫马黎敏王守艳嵇再雄邵永佳陈霞
- 关键词：腺病毒氧糖剥夺自噬
