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家蚕过敏原细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的克隆表达及生物学分析: 2016年; 目的研究家蚕细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的原核克隆表达及生物学意义。方法家蚕总RNA提取;根据ref|NM-001043899|设计引物;RT-PCR扩增;PET-28a质粒目的基因表达载体的构建,转化大肠杆菌BL21(DE3);Western bolt检测重组CRABP;采用MEGA5工具包和clustalw2进行同源性分析;采用ProtParam Tools预测CRABP的理化性质;采用PSIPRED和SWISS-MODEL预测其蛋白质结构。利用Preprod、IEDB和DNAStar对CRABP蛋白T、B细胞抗原表位进行预测。结果克隆出家蚕CRABP基因开放阅读框399bp,编码132个氨基酸。CRABP工程菌(DE3)经IPTG诱导高效表达CRABP重组的可溶性蛋白,分子量约18kDa。重组CRABP能够与家蚕过敏患者血清IgE结合。测序证明克隆的家蚕CRABP蛋白与黑脉金斑蝶细胞视黄酸结合蛋白(gb|EHJ79039.1|)同源性为94%。系统进化树结果显示家蚕与小菜蛾亲缘关系比较近。理化性质预测显示CRABP蛋白质较稳定。二级结构及三级结构预测结果显示CRABP的结构主要以β折叠组成。T细胞抗原表位预测得到4个肽序列(4-12、20-29、51-59、80-88)。B细胞抗原表位预测得到4个肽序列(1-16、40-55、67-82、105-120)。结论克隆并表达的家蚕CRABP蛋白具有良好的变应原性,为进一步研究家蚕过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。; 梁志林王辉胡维刘志刚刘晓宇; 关键词：家蚕原核表达生物信息学分析

粉尘螨组分在过敏性哮喘发生过程中的作用被引量：5: 2018年; 哮喘是一种临床上常见的慢性呼吸道疾病,其特点是病人气道反复阻塞和喘息,过敏性哮喘是其最常见的形式[1].据统计,全世界哮喘的发病率高达5%~16%,在美国全年用于哮喘的治疗费用超过了AIDS和肺结核治疗费用的总和[2].我国约有哮喘患者3000万人,哮喘已经成为危害我国人民健康的重大疾病^（[3,4]）.在众多吸入性过敏原中,尘螨是诱发呼吸道过敏最重要的因素,约有80%左右的哮喘患者对尘螨敏感^（[5,6]）.; 王辉刘晓宇李国平刘志刚; 关键词：过敏性哮喘粉尘螨慢性呼吸道疾病人民健康发病率

家蚕过敏原CSP5克隆表达、纯化鉴定及分析被引量：2: 2016年; 克隆家蚕过敏原CSP5（chemosensory protein 5 precursor）基因，表达、纯化该蛋白，鉴定其免疫活性，并进行生物信息学分析。人工合成家蚕化学感受蛋白5前体CSP5基因，将其连接至pMD18-T克隆载体，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后进行纯化，用western blotting和ELISA鉴定其免疫学特性，并采用生物信息学方法预测CSP5蛋白的理化性质、三级结构、潜在B细胞抗原表位。本研究成功克隆了纯度较高的重组CSP5蛋白，测序鉴定蛋白分子质量约为14．25kD。重组过敏原CSP5能与家蚕过敏患者血清IgE发生特异性结合。生物信息学方法推导其潜在B细胞抗原表位为17～22、35～36、51～55、70～74、106～110、112～115。获得的重组蛋白CSP5具有与天然蛋白相似的免疫学活性，为以标准化抗原作为临床特异性诊断和治疗以及由家蚕引起的过敏性疾病的进一步研究奠定了基础。; 马一禾胡维梁志林王辉刘志刚; 关键词：家蚕表达纯化 WESTERN BLOTTING

家蚕过敏原通过调控单核细胞的死亡诱导过敏反应的发生: 目的：表达、纯化和鉴定新的家蚕过敏原，并明确其诱发过敏反应的免疫学机制。方法：利用2-D电泳和质谱偶联分离鉴定潜在的家蚕过敏原，通过临床血清学检测及小鼠哮喘模型的建立，明确其是否为过敏原。利用过敏原体外刺激上皮细胞、巨噬...; 王辉胡维刘志刚; 关键词：家蚕单核细胞凋亡

粉尘螨Pplase蛋白能够增强OVA诱发的过敏反应: 目的：研究粉尘螨Pplase蛋白在过敏反应中的作用.方法：克隆、表达和纯化粉尘螨Pplase蛋白，利用临床血清学检测Pplase是否为过敏原.利用BALB/c小鼠建立哮喘动物模型，研究Pplase在过敏反应中的作用.利用...; 王辉莫利华刘志刚; 关键词：粉尘螨过敏反应

粉尘螨Pplase蛋白能够增强OVA诱发的过敏反应: 目的 :研究粉尘螨Pplase蛋白在过敏反应中的作用。方法 :克隆、表达和纯化粉尘螨Pplase蛋白,利用临床血清学检测Pplase是否为过敏原。利用BALB/c小鼠建立哮喘动物模型,研究Pplase在过敏反应中的作用。...; 王辉莫利华刘志刚; 关键词：粉尘螨过敏反应; 文献传递

家蚕过敏原通过调控单核细胞的死亡诱导过敏反应的发生: <正>目的 :表达、纯化和鉴定新的家蚕过敏原,并明确其诱发过敏反应的免疫学机制。方法 :利用2-D电泳和质谱偶联分离鉴定潜在的家蚕过敏原,通过临床血清学检测及小鼠哮喘模型的建立,明确其是否为过敏原。利用过敏原体外刺激上皮...; 王辉胡维刘志刚; 关键词：家蚕单核细胞凋亡; 文献传递

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王辉

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