马永生
- 作品数：12 被引量：107H指数：6
- 供职机构：北京中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>
- 柴胡属药用植物的分子鉴定及市售柴胡药材的质量调查被引量：27
- 2017年
- 柴胡是最常用的大宗中药材之一,在我国有着两千多年的药用历史。但是目前柴胡药材品种混乱,有25种、8变种、3变型的柴胡属药用植物在不同地区和中药材市场作为柴胡使用,通过传统方法鉴别极为困难。为快速准确地对柴胡属为数众多的药用植物进行鉴定,本文从全国9省份14居群采集了168株柴胡属药用植物,扩增获得了长度为600~606 bp的ITS序列;通过DNAMAN比对分析找到86个变异位点,并确定了19种ITS单倍型(TH1~TH19);利用MEGA 5.0进行K2P(Kimura 2-parameter)遗传距离分析,发现种间遗传距离显著大于种内遗传距离;利用邻接(neighbor joining,NJ)法构建系统发育树,显示各物种聚类关系清晰,因此建立了基于ITS序列的柴胡属药用植物分子鉴定方法。利用该方法对来自全国5个主要中药材市场的52份柴胡药材进行了分子鉴定,并进一步利用HPLC法测定各药材中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量,应用ANOVA和LSD T检验进行统计学分析,从而对市售柴胡药材的质量进行评价。本文不仅对柴胡属药用植物的快速准确鉴定具有重要意义,而且对于掌握市场上柴胡药材的流通现状及质量评价具有指导意义。
- 袁伯川李文东马永生周姗朱林峰林瑞超刘颖
- 关键词：柴胡分子鉴定柴胡皂苷
- 12产地甘草中18α-甘草酸及18β-甘草酸的含量分析被引量：1
- 2016年
- 目的：分析不同产地甘草中18α-甘草酸及18β-甘草酸的含量差异,为不同产地甘草的质量评价提供参考。方法：采集7个省区12个不同产地的甘草种子,栽培于北京中医药大学药草园,一年后以其中180株甘草作为实验材料,利用内转录间隔区（ITS）序列鉴定其基原,采用高效液相色谱（HPLC）法测定其18α-甘草酸及18β-甘草酸含量,并分析其差异性及相关性。结果：ITS鉴定结果显示180株甘草样品均为乌拉尔甘草。HPLC分析结果显示,18α-甘草酸的标准曲线为y=6×10-7x-0.0029（R2=0.9982）,在0.0111~0.2214μg范围内线性良好;18β-甘草酸的标准曲线为y=1×10-6x＋0.0164（R2=0.9999）,在0.2256~4.5120μg范围内线性良好。12个产地中山西应县甘草样品的18α-甘草酸及18β-甘草酸含量均最高,新疆尼勒克县甘草样品的18α-甘草酸及18β-甘草酸含量均最低,且所有样品中18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量均存在显著相关关系。结论：不同产地甘草质量差异显著,本实验结果可为不同产地甘草的质量评价提供参考。
- 马永生杨瑞袁伯川周姗李文东刘颖
- 关键词：乌拉尔甘草18Α-甘草酸18Β-甘草酸高效液相色谱法
- 甘草根特异性过表达HMGR基因毛状根的诱导被引量：1
- 2016年
- 目的:构建甘草根特异性过表达3-羟基-3-甲基戊二酰Co A还原酶(HMGR)基因毛状根培养体系。方法:利用根特异性过表达甘草HMGR基因的植物双元表达载体,通过发根农杆菌ACCC10060介导,转化甘草外植体并诱导毛状根的形成,利用PCR法及测序法对转基因毛状根进行验证。结果:诱导得到大量生长良好的甘草根特异性过表达HMGR基因毛状根。结论:为进一步研究功能基因HMGR与甘草酸次生代谢的相关性,以及提高甘草毛状根中的甘草酸含量奠定了良好的实验基础。
- 王礼强袁伯川马永生杨瑞周姗刘颖
- 关键词：甘草毛状根
- 北柴胡与银州柴胡的ITS条形码鉴定研究被引量：9
- 2016年
- 目的：建立基于内转录间隔区（ITS）序列的北柴胡与银州柴胡分子鉴定新方法。方法：以来自北京、宁夏、山西、甘肃、河北的10个居群共125份北柴胡及银州柴胡样品为实验材料,提取其总DNA,并PCR扩增其ITS序列,对序列进行双向测序,应用Clustal X及BLAST查错,用MAGA 5.0进行序列分析,计算种内、种间遗传距离,构建邻接树,并统计不同单倍型的分布情况。结果：北柴胡与银州柴胡的ITS序列全长为604 bp,有7个变异位点,共计6种单倍型,其中单倍型1为银州柴胡所特有,单倍型2~6为北柴胡所特有;ITS序列种内最大遗传距离0.005,种间最小遗传距离0.007。结论：利用ITS序列可快速准确地鉴定北柴胡与银州柴胡。
- 袁伯川马永生杨瑞周姗林瑞超刘颖
- 关键词：北柴胡银州柴胡内转录间隔区分子鉴定
- 基于β-香树脂醇合成酶基因多态性的甘草酸生物合成的分子机制研究
- 甘草是我国最常用的大宗药材之一,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛和调和诸药等作用。由于国务院明令禁止采挖野生甘草,因此中药材市场上的商品甘草为栽培甘草。然而,本课题组前期调查研究表明栽培甘草中甘草酸含量普遍偏低...
- 马永生
- 关键词：甘草甘草酸基因多态性毕赤酵母
- 文献传递
- 不同基原甘草的分子鉴定及市售甘草药材的质量评价被引量：43
- 2017年
- 甘草是我国最常用的大宗中药材之一,在《神农本草经》中被列为上品。2015版《中华人民共和国药典》规定,乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、光果甘草Glycyrrhiza glabra L.及胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.的干燥根及根茎可作为甘草入药。然而不同基原甘草药效差异显著,而通过传统方法对其进行鉴别十分困难。为了快速、准确地对不同基原甘草进行鉴定,本文从全国7省份21居群采集了240株甘草。利用PCR扩增获得了长度为616 bp的ITS序列以及389 bp的psb A-trn H序列;通过DNAMAN比对分析,在ITS序列中找到4个变异位点,并确定了2种ITS单倍型,在psb A-trn H序列中找到3个变异位点,并确定了4种psb A-trn H单倍型;结合ITS及psb A-trn H序列分析,确定了3种基原甘草的分子鉴定方案。利用该方案对来自全国4个主要中药材市场的40份甘草药材进行了准确鉴定,并进一步利用HPLC法测定各药材中2种三萜类有效成分(甘草酸及异甘草酸)及4种黄酮类有效成分(甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷)的含量,应用SPSS 21.0对HPLC结果进行统计学分析,从而对市售甘草药材的质量进行评价。本文为不同基原甘草的准确鉴定提供了分子鉴定方案,并且对甘草药材的流通现状及质量评价具有指导意义。
- 杨瑞李文东马永生周姗薛宇涛林瑞超刘颖
- 关键词：乌拉尔甘草光果甘草胀果甘草PSBA-TRNH分子鉴定
- 3种不同基原甘草中4个主要黄酮类化合物的含量分析被引量：21
- 2016年
- 目的:对中国药典规定的3种不同基原甘草样品中甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的含量进行分析比较。方法:以栽培于同一产地的3种不同基原两年生甘草作为实验材料,HPLC法对材料中的甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素含量进行测定。采用CAPCELL PAK C_(18) MGII(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(-1),检测波长为276 nm(0~13 min,检测甘草苷)、360 nm(13~23 min,检测异甘草苷)、276 nm(23~28 min,检测甘草素)、376 nm(28~55 min,检测异甘草素),柱温为30℃。结果:甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素分离良好,线性范围分别为1.15×10^(-2)~0.230μg(r=1.000)、4.45×10^(-3^)8.90×10^(-2)μg(r=1.000)、1.15×10^(-3^)2.30×10^(-2)μg(r=0.998)、2.27×10^(-3^)4.54×10^(-2)μg(r=1.000),检测限和定量限依次为1.13 ng和3.42 ng、0.896 ng和2.70 ng、0.463 ng和1.39 ng、0.454 ng和1.38 ng。本方法灵敏度、精密度、准确性、重复性、回收率、耐用性均良好。在3种基原的甘草样品中,4个黄酮类成分的含量存在极显著差异(P<0.01),甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素在乌拉尔甘草中的含量均最高,分别为(^(-2)0.75±0.524)mg·g1、(4.453±0.057)mg·g^(-1)、(0.610±0.019)mg·g^(-1)和(0.272±0.008)mg·g^(-1),光果甘草次之,含量分别为(6.623±0.405)mg·g^(-1)、(1.562±0.053)mg·g^(-1)、(0.325±0.036)mg·g^(-1)和(0.180±0.012)mg·g^(-1),胀果甘草最低,含量分别为(2.700±0.232)mg·g^(-1)、(0.821±0.042)mg·g^(-1)、(0.153±0.006)mg·g^(-1)和(0.115±0.005)mg·g^(-1);甘草苷与异甘草苷、甘草素与异甘草素的含量在3种不同基原甘草样品中均存在极显著相关关系(P<0.01)。结论:本文建立的HPLC方法经方法学验证,可用于甘草中甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的含量分析,并为甘草的质量控制及以黄酮类化合物为目标的优质甘草筛选与定向育种提供�
- 杨瑞袁伯川马永生周姗张皓桢刘靓怡李文东刘颖
- 关键词：乌拉尔甘草光果甘草胀果甘草甘草苷异甘草苷甘草素异甘草素
- HPLC法分析12产地甘草中4种主要黄酮类化合物的含量被引量：7
- 2017年
- 目的:分析不同产地甘草中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素的含量,为不同产地甘草的质量评价提供参考。方法:从全国7省区12产地采集甘草种子,栽培于北京中医药大学药草园,1年后每产地随机挑取15株甘草作为实验材料,利用ITS序列鉴定其基原,采用HPLC法测定其甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的含量,分析各成分含量的差异性及相关性。结果:ITS鉴定结果表明甘草样品均为乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)。HPLC分析结果显示:甘草苷的标准曲线为Y=0.000 5X+1×10^(-5)(R^2=0.999 9),在0.113 7μg^0.854 1μg范围内线性良好;异甘草苷的标准曲线为Y=0.000 3X-3×10^(-5)(R^2=0.999 9),在0.025 3μg^0.204 8μg范围内线性良好;甘草素的标准曲线为Y=0.000 3X+1×10^(-4)(R^2=0.999 8),在0.009 3μg^0.092 7μg范围内线性良好;异甘草素的标准曲线为Y=0.000 2X-7×10^(-5)(R^2=0.999 9),在0.004 6μg^0.030 7μg范围内线性良好。不同产地甘草中4种黄酮类成分含量差异显著,其中山西应县甘草样品的甘草苷、异甘草苷、甘草素及异甘草素的含量均为最高,而黑龙江肇州县、新疆尼勒克县、额敏县、阿拉尔县甘草样品的甘草苷、异甘草苷、甘草素及异甘草素的含量普遍较低。且所有样品中4种黄酮类化合物的含量之间均存在显著相关关系。结论:不同产地甘草质量差异性显著,本实验结果可以为不同产地甘草的质量评价提供参考。
- 周姗袁伯川杨瑞马永生李文东刘颖
- 关键词：乌拉尔甘草甘草苷异甘草苷异甘草素甘草素
- 3种不同基原甘草中18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量分析被引量：17
- 2016年
- 目的:建立同时测定甘草中2种三萜类活性成分——18α-甘草酸与18β-甘草酸含量的HPLC分析方法,并对中国药典规定的3种不同基原甘草样品中18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量进行分析比较。方法:以同一产地的3种不同基原2年生甘草作为实验样品;HPLC法对样品中的18α-甘草酸与18β-甘草酸进行测定。色谱柱:Agela Durashell C_(18)-AM(250 mm×4.6 mm,5μm);流速:0.8 mL·min^(-1);流动相:10 mmol·L^(-1)高氯酸铵水溶液(用氨水调节pH为8.2)-甲醇(48∶52);检测波长:250 nm;柱温:50℃。结果:在选择的色谱条件下,18α-甘草酸和18β-甘草酸达到了较好的分离;线性范围分别为0.010 70~0.214 0μg和0.216 4~4.328μg;检测限分别为3.210 ng和4.330 ng;定量限分别为11.26 ng和12.65 ng;平均回收率(n=3)分别为99.2%~100.1%(RSD≤0.93%)和99.8%~99.9%(RSD≤0.72%)。在3种基原的甘草样品中,光果甘草的18α-甘草酸与18β-甘草酸含量最高,分别为(2.650±0.064 21)mg·g^(-1)和(37.182±0.844 3)mg·g^(-1)(n=25);乌拉尔甘草的含量次之,分别为(1.975±0.057 12)mg·g^(-1)和(29.413±0.741 2)mg·g^(-1)(n=25);胀果甘草的含量最低,分别为(1.604±0.043 72)mg·g^(-1)和(17.810±0.502 1)mg·g^(-1)(n=25)。18α-甘草酸和18β-甘草酸的含量存在显著相关关系。结论:经方法学验证,本文方法可用于不同基原甘草中18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量分析,并为以18α-甘草酸为目标的优质甘草筛选及定向育种奠定基础。
- 杨瑞李文东袁伯川马永生周姗刘春生刘颖
- 关键词：甘草胀果甘草甘草酸差向异构体
- 胀果甘草查尔酮异构酶基因的克隆及序列分析
- 2017年
- 目的:对胀果甘草甘草苷生物合成途径的关键酶查尔酮异构酶(CHI)进行基因克隆及序列分析。方法:根据乌拉尔甘草CHI基因c DNA序列设计引物,以胀果甘草主根总RNA为模板RT-PCR扩增CHI基因c DNA序列,并对其进行分析。结果:克隆得到20条胀果甘草CHI基因c DNA序列,开放读框全长690 bp,编码229个氨基酸残基。20条胀果甘草CHI基因的c DNA序列存在22个变异位点,一致性为99.54%,可分为6种单倍型;其编码的氨基酸序列存在14个变异位点,一致性为98.98%。胀果甘草CHI基因编码蛋白为稳定性亲水蛋白,相对分子质量为24.5×103,等电点为5.3~6.2,不含信号肽,无跨膜区,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,保守结构域包含一个查耳酮超家族结构域。同源性分析显示,不同物种间的CHI基因同源性较低。结论:克隆了胀果甘草CHI基因c DNA序列,为进一步研究不同基原甘草中甘草苷生物合成的分子调控机制奠定了基础,并为优质甘草的分子选育提供了理论依据。
- 尹彦超张晓冬马永生周姗高智强胡婷刘颖
- 关键词：胀果甘草查尔酮异构酶生物信息学分析
