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重组2型腺相关病毒介导锰超氧化物歧化酶高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的保护作用被引量：3: 2011年; 目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制。方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组及正常组。实验组按感染复数(MOI)为104v.g/cell感染rAAV2-MnSOD-EGFP,同时感染rAAV2-EGFP作对照组及不作处理缘细胞为正常组。荧光显微镜下观察MCs绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况及免疫印迹法(western blot)分析转染后MnSOD的表达水平。实验组及对照组同时暴露于400μmol/L H2O22 h,24 h后比色法测定各组丙二醛(MDA)含量;流式细胞PI荧光标记检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡因子Caspase-3活化片段Cleavedcaspase-3的表达。结果:①各组MCs感染病毒后,生长正常,实验组感染rAAV2-MnSOD-EGFP后4d出现EG-FP的表达,10 d至高峰;且持续细胞体外生长的整个周期。实验组MnSOD的表达及活性明显高与对照组及正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。②经H2O2作用后实验组MDA、Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达及凋亡率明显低与对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs使其高表达MnSOD,并对MCs氧化损伤有保护作用,这种保护作用与抑制凋亡因子Caspase-3的活化有关。; 李隽孔维佳赵学艳杨阳胡钰娟; 关键词：血管纹缘细胞锰超氧化物歧化酶氧化应激

耳聋-掌跖皮肤角化征家系GJB2基因突变分析: 2012年; 目的观察耳聋-掌跖皮肤角化(PPK)综合征家系GJB2、GJB3和GJB6基因突变情况,探讨其基因型、表型和遗传学特征。方法收集1例耳聋-掌跖皮肤角化征家系中先证者和部分亲属的临床资料,采集其外周血样本,并提取DNA。应用聚合酶链反应(PCR)扩增GJB2、GJB3和GJB6基因编码区,并以直接测序法进行突变分析;同时选取126人作为正常对照组。结果先证者和父亲均携带GJB2基因R75W杂合突变,而GJB3和GJB6基因未见致病突变。正常对照组中未检测出R75W突变。结论再次在中国人耳聋-掌跖皮肤角化征家系中发现GJB2基因R75W杂合突变,进一步验证了该突变可能是导致疾病发生的原因。R75W可能以显性方式由亲代遗传至子代,基因检查结果可为进一步生育指导提供帮助。; 戴翔李隽胡晞江童静; 关键词：耳聋连接蛋白 GJB2

GJB2基因突变引起的显性遗传非综合征型耳聋家系研究被引量：1: 2016年; 目的:检测一显性遗传非综合征型耳聋家系GJB2、GJB3、GJB6、SLC26A4、线粒体12SrRNA和线粒体tRNASer(UCN)等基因突变情况,探讨其基因型、表型和遗传学特征。方法:收集家系中先证者和部分亲属的临床资料,采集其外周血样本,并提取DNA。扩增GJB2、GJB3、GJB6、SLC26A4基因编码区和线粒体基因耳聋致病相关区域,并以直接测序法进行突变分析。结果:先证者和母亲均携带GJB2基因R75Q杂合突变,而其他检测基因未见致病突变。结论:GJB2基因R75Q突变引起先证者和母亲常染色体显性遗传非综合征型耳聋。R75Q能由亲代遗传至子代,基因检查的结果可为进一步生育指导提供帮助。; 戴翔李隽胡晞江童静蔡文倩; 关键词：连接蛋白 GJB2

病毒与非病毒载体转染新生大鼠血管纹边缘细胞的比较研究: 2008年; 目的通过病毒与非病毒载体对原代培养的新生大鼠内耳血管纹边缘细胞转染情况的比较,选择出适合边缘细胞的基因治疗载体。方法用质粒(pEGFP-N1)、血清5型重组腺病毒(rAd5)以及血清2型重组腺相关病毒(rAAV2)三种载体转染新生大鼠(≤72小时)耳边缘细胞,通过对转染效率、细胞凋亡以及细胞活性的检测将三种载体加以比较。结果对边缘细胞的转导效率依次为rAd5>rAAV2>pEGFP-N1,AnnexinⅤ-APC/7-AAD双染法检测转染阳性细胞的损伤情况依次为rAAV2rAd5>pEGFP-N1。结论病毒载体相对于非病毒载体以其高转导效率、低细胞毒性在对原代培养的新生大鼠耳边缘细胞的转染中表现出明显优势。与血清2型重组腺相关病毒比较,相对高效、低毒性的血清5型重组腺病毒更适用于原代培养的新生大鼠血管纹边缘细胞的基因转染研究。; 杨阳孔维佳李隽胡钰娟钟毅郝亚楠赵学艳彭炜; 关键词：转染边缘细胞

重组2型腺相关病毒介导锰超氧化物歧化酶转染大鼠耳蜗血管纹缘细胞的研究: 2008年; 目的探讨以重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus of the serotypes2,rAAV2)为载体对体外培养的大鼠耳蜗血管纹缘细胞(Marginal cells,MCs)转染锰超氧化物歧化酶(Manganese SuperoxideDismutase,MnSOD),获得高表达MnSOD转基因缘细胞的可行性。方法实验组按感染复数(MOI)为104v.g./cell对体外培养的血管纹缘细胞转染rAAV2-MnSOD-EGFP,同时设转染rAAV2-EGFP缘细胞作为空载对照组,未转染细胞为空白对照组。荧光显微镜下每2d观察1次MCs的绿色荧光蛋白(Enhenced green fluorescentprotein,EGFP)表达情况。比色法测定各组MCs的MnSOD活性。激光共聚焦显微镜下观察转染rAAV2-MnSOD-EGFP后MnSOD的表达,免疫印迹法(Western blot)定量分析MnSOD的表达。结果(1)各组MCs转染后,生长正常,空载对照组MCs转染rAAV2-EGFP后2天开始出现微弱EGFP的表达,1周后至高峰;实验组转染rAAV2-MnSOD-EGFP后4d出现EGFP的表达,10d至高峰,且持续表达于细胞培养的整个期间。EGFP的表达在荧光显微镜490nm波长激发光下呈黄绿色,弥漫于整个胞质。(2)对激光共聚焦显微镜及Westernblot的检测结果进行分析,实验组较空载对照组和空白对照组的MCs中MnSOD的表达明显升高,差异有统计学意义。结论rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs并持续高表达MnSOD。; 李隽杨阳孔维佳胡钰娟; 关键词：血管纹缘细胞锰超氧化物歧化酶转染

湖北地区新生儿听力与基因筛查模式的转变与发展被引量：8: 2015年; 本文回顾了2007~2015年湖北地区新生儿听力与基因筛查模式的转变与发展.总体可分为3个阶段：新生儿听力筛查模式的探索与建立;新生儿听力与基因联合筛查模式的形成与完善;听力筛查诊断技术领域的开拓与研究.随着新生儿听力筛查的普遍开展和深入,其筛查技术和内容也在不断的丰富和完善.在新生儿听力筛查中注入聋病易感基因筛查的筛查模式,可发现部分听力筛查不能发现的高危聋对象和迟发性聋新生儿,对实现听力障碍的早发现、早诊断和早干预有重要的临床意义.; 王智楠李隽胡艳玲陈平; 关键词：新生儿筛查听力基因听力障碍

儿童扣式电池消化道异物临床分析被引量：2: 2013年; 目的：提高对儿童扣式电池消化道异物的诊疗水平。方法：14例扣式电池消化道异物中，食管6例，胃、下消化道7例，食管、胃多发异物1例，平均年龄2岁1个月。胃、下消化道异物7例未予特殊处理，密切观察；食管异物6例在全身麻醉下行食管镜检＋异物取出术；食管、胃多发异物1例行食管镜和电子胃镜异物取出术。取出后均行对症治疗。结果：胃、下消化道异物7例1～2d自行排出；食管异物6例，4例取出治愈，1例取出后出现食管狭窄，1例死亡；食管、胃多发性异物1例，取出后治愈。结论：扣式电池食管异物腐蚀性强，危害大，易危及患儿生命及形成食管狭窄，及时诊断、合理手术是治愈的关键。扣式电池胃、下消化道异物由于消化液的中和，嵌顿概率低，密切观察，多可自行排出。; 黄涛王智楠徐恩明徐忠强李隽饶凯成王淑芬; 关键词：扣式电池儿童消化道异物

湖北省非综合征型耳聋患儿GJB2、SLC26A4和线粒体12S rRNA突变分析被引量：4: 2014年; 目的分析非综合征型耳聋患儿的GJB2、SLC26A4基因和线粒体12SrRNA突变频率,扩充中国人群常见耳聋基因突变流行病学数据,为发展适合的聋病基因筛查提供数据基础。方法收集220名散发非综合征型耳聋病例的外周血样本和临床资料;应用聚合酶链反应(PCR)和直接测序,对患者和150例正常对照进行GJB2、SLC26A4基因和线粒体12SrRNA突变检测。结果 1)220例患者中146(66.36%)例患者携带至少1个GJB2基因突变,35(15.91%)例患者携带至少1个SLC26A4基因突变,3(1.36%)例为线粒体A1555G突变。正常对照中3(2%)例携带GJB2致病突变。2)GJB2基因c.235delC(19.32%)突变是最常见的致病突变,其次是SLC26A4基因IVS7-2A>G(9.09%)突变。3)检出的36种突变中,包括2种GJB2和1种SLC26A4新突变。结论本研究扩充了GJB2基因、SLC26A4基因和线粒体DNA A1555G突变在中国人群中的基因突变数据,并发现了3种新的突变,为分子诊断和扩展聋病基因筛查提供数据参考。; 戴翔李隽胡雁婻童静曹江霞刘丽平; 关键词：非综合征型耳聋 GJB2 SLC26A4 线粒体12S

大鼠血管纹边缘细胞的原代培养及IsK的表达被引量：10: 2004年; 目的　为进一步研究内淋巴生成的可能机制以及影响因素,提供可供研究的大量实验材料—边缘细胞(marginal　cell,　MC),建立大鼠来源的MC 的原代培养体系。方法　　利用大鼠耳蜗的侧壁组织作为组织块种植培养。从第2天开始每日倒置显微镜观察,选特征性的表现照相。经选择性消化、差异性贴壁等方法抑制FLC 生长,纯化MC。经过MC 的形态、生长特征的观察;细胞角蛋白18、波形蛋白的免疫细胞化学;扫描及透射电镜;RT-PCR 检测IsK 蛋白mRNA 的表达等方法鉴定MC。　结果　新鲜组织块淡黄、透明,可见丰富的毛细血管网;但血管纹结构致密,倒置显微镜下不易分辨不同细胞的轮廓。MC 从组织块迁移出来多在培养第2 天,呈多角形外观、核大而圆、颜色较暗淡,细胞之间连接紧密,形成上皮单层时呈“铺路石样”外观。FLC 呈梭形,呈“鱼群样”包绕MC 生长,增殖速度快于MC。由纯化的MC 构成的上皮单层表面可见由成百上千个MC 包绕液体而成的dome,这提示MC 净向的跨上皮转运功能。原代MC 表达细胞角蛋白和波形蛋白,微绒毛丰富、细胞间连接提示其上皮起源。IsK 蛋白mRNA 的表达证实了培养上皮细胞的MC 起源。结论　离体培养的耳蜗边缘细胞具有与其在体相同的形态及生理特征。MC 原代培养体系的建立,可为进一步探讨边缘细胞的生?; 孔维佳陈敏李隽; 关键词：原代培养基因表达边缘细胞波形蛋白 SV MC

大鼠耳蜗血管纹缘细胞氧化性损伤体外模型的建立: 2008年; 目的建立大鼠耳蜗血管纹缘细胞氧化性损伤的体外模型。方法在体外培养的大鼠耳蜗血管纹缘细胞中加入过氧化氢（H2O2），观察细胞形态结构变化；采用CCK-8（cell counting kit-8）法检测200、300、400、600、800μmol／LH202作用0．5、1、2．4、16、24h对血管纹缘细胞活性的影响；检测不同浓度H2O2作用2h后血管纹缘细胞脂质过氧化产物丙二醛含量的变化；利用碘化丙锭染色流式细胞仪测定细胞的凋亡率；通过免疫印迹法（Western blot）检测凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）活化片段cleaved—caspase-3的表达。结果H2O2作用后血管纹缘细胞出现核固缩、边缘化，胞质浓缩，被膜包裹、隆起，产生凋亡；随着H2O2：浓度的增加、作用时间的延长，缘细胞活性降低；200μmoVL的H2O2作用2h，即可诱导缘细胞凋亡率升高，差异具有统计学意义（P〈0．05）；cleaved．caspase-3在正常缘细胞呈微弱表达，H2O2作用后cleaved—caspase-3表达增强，并随H2O2浓度的增高而增强，但当H20：达到600μmol／L时，表达开始减弱，800μmol／L时仅见微弱表达。结论利用H2O2可成功建立耳蜗血管纹缘细胞氧化性损伤的体外模型，caspase-3的激活参与了缘细胞的氧化损伤过程。; 李隽孔维佳赵雪艳胡钰娟; 关键词：血管纹细胞过氧化氢氧化性应激

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李隽

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