李尹凤
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：重庆市北碚区中医院更多>>
- 发文基金：四川省教育厅科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种荧光定量PCR方法检测血液标本中梅毒螺旋体的应用研究被引量：6
- 2014年
- 目的建立基于TpN17基因检测血液中梅毒螺旋体的荧光定量PCR方法。方法根据梅毒螺旋体TpN17基因保守区域设计引物,构建质粒标准品pTpN17,优化定量PCR反应体系检测该体系的灵敏度和特异性;同时,采用该方法对梅毒确证阳性的血液样本进行检测。结果研究表明,基于TpN17基因的SYBR GREEN荧光定量PCR方法可以有效检测血液中10^6-10^1 copies/μL的梅毒螺旋体并通过熔解曲线判定结果的特异性。结论以TpN17基因为扩增目的基因的SYBR GREEN荧光定量PCR方法具有灵敏快速便宜的特点,适用于在血液检测梅毒螺旋体,能广泛应用于献血及血液样本检测等领域,提高我国的血液安全。
- 李佳凌万江中李尹凤
- 关键词：梅毒螺旋体荧光定量PCR
- pET 22b-TP17表达载体的构建与鉴定
- 2014年
- 目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础。方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-T Simple载体。以pMD18-T Simple-TP17为模板,PCR扩增TP17基因片段。PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EcoRⅠ和XhoⅠ对TP17回收所得片段及目的载体pET 22b进行双酶切并连接。连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定。最后将质粒转化至BL21菌株中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符。结论:本研究成功构建了重组质粒pET 22b-TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础。
- 李佳凌李尹凤汤军蔡延森
- 关键词：梅毒螺旋体原核表达载体
