耿文勤
- 作品数：3 被引量：15H指数：3
- 供职机构：上海第二医科大学附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市高等学校青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗Kinectin抗体与白塞病相关性研究被引量：5
- 2003年
- 目的 研究抗kinectin抗体与白塞病的关系。方法 从人喉癌上皮细胞 (Hep2细胞 )抽提RNA ,利用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增碱基序列相当于kinectin的氨基酸 5 0 3～ 994(kin m)和氨基酸 92 0～ 1346 (kin 3)两个片段 ,并克隆到pET4 2 a(+)载体中。诱导表达的融合蛋白经纯化后建立酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法 ,并对白塞病患者血清进行分析。结果 构建的表达kinectin载体能在大肠杆菌中表达具有抗原性的肽段 ,用纯化的融合蛋白建立检测抗kinectin抗体的ELISA方法 ,对 4 6例白塞病患者、118例其他自身免疫病患者及 5 1名正常人检测显示kinectin抗体阳性率分别为白塞病 6 3% (2 9/ 4 6 ) ,系统性红斑狼疮 2 2 % (8/ 37)、类风湿关节炎 16 % (5 / 31)、干燥综合征 4 1% (11/ 2 7)、混合性结缔组织病 2 9% (4 / 14 )。与 118例其他自身免疫病相比 ,白塞病中抗kinectin抗体的检出率明显升高 (P <0 0 1)。结论 Kinectin是白塞病的相关抗原 ,在其他自身免疫病中也可检测到该抗原抗体 ,其意义有待进一步研究。
- 冯修高陈顺乐陆瑜沈南叶萍叶霜俞翀曌钱捷耿文勤
- 关键词：白塞病贝赫切特综合征酶联免疫吸附试验原核表达
- kinectin抗体免疫荧光检测方法的建立与应用被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位 ,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA)。方法 从人喉癌上皮细胞 (HepG2 )抽提RNA ,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列 ,并连接到真核表达载体pEGFP C2中 ;将构建的 pEGFP kinectin载体导入HepG2细胞中 ,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白 (GFP)的荧光及其细胞定位。然后 ,用此转染细胞制成的底片 ,建立检测kinectin抗体的IFA。同时用IFA对 5 1名正常人及 4 6例白塞病 (BD)患者血清进行初步检测。结果经EcoRI单酶切和测序证实 ,成功地构建了表达kinectin的真核表达载体 ;pEGFP kinectin载体转染的细胞经 3次克隆筛选后 ,10 0 %的细胞胞浆内发出特征性荧光。用kinectin抗体阳性血清染色 ,也得到类似特征的荧光。IFA检测显示 ,BD患者kinectin抗体的阳性率为 32 7% ( 15 /4 6 ) ,正常人均为阴性。结论 构建kinectin表达的载体可在HepG2细胞中进行表达 ,并成功地用 pEGFP kinectin转染的HepG2细胞建立了检测kinectin抗体的IFA。
- 冯修高陈顺乐陆瑜沈南叶萍叶霜俞翀曌钱捷耿文勤
- 白塞氏病相关抗原的重组表达及抗原性初步分析被引量：7
- 2003年
- 目的 :探讨Kinectin的抗原性 ,为下一步研究Kinectin在白塞氏病中的意义奠定基础。方法 :从人Hep2细胞抽提RNA ,利用RT PCR扩增能覆盖Kinectin全长的 3个片段 ,其位置分别相当于氨基酸 2 2～ 5 10 (kin 5 ) ,5 0 3～ 994 (kin M)和 92 0～1346 (kin 3)。将扩增的PCR片段克隆到pET4 2 a(+)载体中 ,诱导表达的融合蛋白用白塞氏病病人血清进行Westernblot分析。结果 :构建的 3个表达Kinectin部分片段载体 (pET kin 5、pET kin M和pET Kin 3)具有正确的阅读框架 ,DNA测序符合率为99 % ,能在大肠杆菌中表达相应的肽段。 8份阳性血清中 ,用Westernblot分析发现 ,6份血清与kin M反应 ,5份血清与kin 3反应 ,只有一份血清与kin 5有反应。结论 :成功地构建表达覆盖Kinectin全长的 3个载体 ,并初步发现Kinectin的抗原性可能主要位于其中间段和羧基端。
- 冯修高陈顺乐陆瑜叶萍沈南叶霜耿文勤俞翀曌钱捷
- 关键词：白塞氏病抗原抗原性免疫印迹
