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熊梅梅
作品数:
3
被引量:7
H指数:1
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南昌大学
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肖红波
北京大学深圳医院
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作者
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熊梅梅
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高糖环境下人肾小管上皮细胞天然免疫信号TLR4与血管紧张素Ⅱ的对话关系及其病理生理改变
目的:通过研究高糖环境下人肾小管上皮细胞的TLR4信号表达,论证TLR4与血管紧张素II的对话关系以及由此引起的肾小管上皮细胞纤维化和炎症因子的变化,探讨糖尿病肾病的天然免疫发病机制。 方法:常规培养细胞后将细胞分5组...
熊梅梅
关键词:
肾小管上皮细胞
TLR4表达
免疫发病
文献传递
高糖和血管紧张素Ⅱ对人肾小管上皮细胞Toll样受体4信号表达及炎性和纤维化因子的影响
被引量:7
2016年
目的通过研究高糖和血管紧张素Ⅱ(AngII)环境下人肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达及其相关的炎性和纤维化因子的变化及TLR4siRNA的干扰作用,从天然免疫角度探讨糖尿病。肾病(DN)发病机制和靶向干预措施。方法设计并合成3对针对人TLR4基因的特异性siRNA片段,以带有红色荧光的BLOCK-ITAlexaFluor作为阴性对照,荧光显微镜下观察细胞转染效率,实时定量PCR检测TLR4mRNA的表达变化。确定TLR4siRNA基因沉默效果较佳后再进一步实验。实验分2部分进行,第1部分细胞分3组:正常糖对照组(NG,5.5mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(M,5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)和高糖组(HG,25mmol/L葡萄糖),初步验证高糖、高渗的影响。第2部分7组:NG组、HG组、AngⅡ(10-7mmol/L)组、AnglI+空载体对照组、HG+空载体对照组、AnglI+TLR4siRNA转染组及HG+TLR4siRNA转染组。采用实时定量PCR法检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、热休克蛋白47(HSP47)mRNA的表达;Western印迹法检测TLR4、MyD88、HSP47、核因子KB(NF.KB)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的蛋白表达;ELISA法检测细胞上清液单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)的水平。结果与NG组比较,甘露醇组TLR4、MyD88蛋白表达差异均无统计学意义(P〉0.05);HG、AngⅡ组TLR4、MyDS8、HSP47mRNA及TLR4、MyD88、NF.KB、HSP47、ColⅣ蛋白表达均显著上调(p〈0.01),细胞上清液MCP-1、IL-6水平亦升高(P〈0.01);TLR4siRNA转染后,与HG组或AngU组相比上述指标均显著下调(P〈0.01);空载体转染后,与HG组或AngⅡ组相比上述指标差异无统计学意义(P〉0.05)。结论高糖或血管紧张素Ⅱ均刺激人肾小管上皮细胞TLR4信号并引起天然免疫应答,导致炎性和纤维化因子上调。特异性基因沉默可通过阻断由高糖或AngⅡ诱导的TLR4信�
熊梅梅
吕柳青
肖红波
程玉花
吕金雷
王瑜
陈钦开
关键词:
TOLL样受体4
肾小管上皮细胞
天然免疫应答
高糖环境下人肾小管上皮细胞天然免疫信号TLR4与血管紧 张素II的对话关系及其病理生理改变
熊梅梅
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