刘婉霞
- 作品数：5 被引量：10H指数：3
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人工TALEN核酸酶与基因打靶载体的构建
- 研究背景与目的:鼻咽癌（NPC）是我国南方常见的恶性肿瘤之一，是一种遗传和环境因素共同作用的多基因遗传性肿瘤。通过大量对鼻咽癌的研究，发现细胞的恶性转化和转移复发受多基因调控，因此多基因联合治疗对于控制鼻咽癌的转移复发有...
- 刘婉霞
- 关键词：鼻咽癌基因打靶核酸酶基因调控转录激活因子
- 人工转录激活子样效应因子核酸酶与多位点基因打靶载体的构建与鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的构建并验证针对人类基因组核糖体DNA（rDNA）序列的转录激活子样效应因子核酸酶（TALEN）表达载体与人类通用多位点基因打靶载体。方法运用在线软件TALENs Targeter在rDNA序列上设计TALEN切割位点，并构建针对该位点的TALEN表达载体，利用细胞转染技术，筛选出一对有较高活性的TALEN，并计算其切割效率。将TALEN切割位点两侧的同源重组引导序列DSl、DS2以及GFP表达元件克隆到pUC-19质粒中，最终将TALEN与多位点基因打靶载体共转染293T细胞，经PCR与测序鉴定，对目的基因整合情况进行验证。结果经酶切、测序鉴定，成功获得一对切割活性高达78．5％的TALEN（TALEN-L1R2），成功构建人类细胞通用的多位点基因打靶载体pUC-DS1-EGFP-DS2；两种技术结合后将目的基因GFP成功整合于293T细胞基因组中。结论TALEN与多位点打靶技术结合，可有效将目的基因整合于基因组中。
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- 关键词：基因打靶核糖体DNA
- DAL-1通过HSPA5-PI3K-AKT通路对非小细胞肺癌上皮间质转化的影响
- 目的： 肺癌是当今世界上发病率最高的恶性肿瘤之一，转移是造成患者死亡的重要原因。目前认为，上皮来源的恶性肿瘤在转移早期经历了上皮间质转化，使细胞间粘附能力降低及细胞侵袭及迁移能力增强。课题组前期研究发现，DAL-1可抑...
- 刘婉霞
- 关键词：非小细胞肺癌病理机制上皮间质转化
- TALEN质粒转染HEK-293T细胞的条件优化被引量：3
- 2015年
- 本研究探讨了TALEN质粒转染HEK-293T细胞的最佳转染条件。以TALEN质粒右臂中的绿色荧光蛋白为报告基因,分别研究转染试剂、质粒DNA的量、转染试剂与质粒DNA的比例对转染效果的影响,转染24 h后荧光显微镜下统计具有代表性视野的绿色荧光细胞,计算绿色荧光细胞/总细胞数的比例得出转染率,并利用CCK-8试剂盒检测细胞存活率。实验结果表明,TALEN质粒转染293T细胞,采用Fugene HD转染试剂比Lipofectamine 2000转染试剂细胞存活率高;以6孔板为例,转染质粒DNA量为4μg时转染效率最高(49.0±8.0)%;Fugene HD与质粒DNA比例(μg/μL)为3:1时转染效率最高。本研究建立TALEN表达质粒转染HEK-293T细胞的最佳转染条件,可作为相关研究或应用提供参考。
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- 关键词：转染TALEN
- TALEN技术研究进展被引量：3
- 2015年
- 类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)是近年来新兴的分子生物学工具。该技术可高效地介导DNA编辑修饰,如基因敲除、基因敲入、碱基替换、点突变等。近年来,随着人们对TALEN系统研究的不断深入和改造,TALEN已成功地应用于人类细胞、鼠、斑马鱼等物种中,成为一项具有广阔应用前景的基因编辑技术。对TALEN的来源、构建及应用情况进行阐述,并对其未来发展进行展望。
- 严爱芬刘婉霞刘芳唐冬生
