刘亚坤
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
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- scAAV9-IGF-1转导至G93A-SOD1小鼠神经元及其作用机制
- 2023年
- 目的探索自我互补腺相关病毒载体介导的人胰岛素样生长因子-1(scAAV9-IGF-1)转导至G93A-SOD1转基因小鼠神经元及其对线粒体的作用。方法采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的转基因G93A-SOD1及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠为动物模型,在60 d龄时,同窝阳性G93A-SOD1转基因雌性小鼠采用随机的方法分配到治疗组肌肉注射scAAV9-IGF-1,载体对照组肌肉注射AAV9-GFP,及同年龄WT-SOD1作为阴性对照。在肌肉注射后约40~50 d时,通过免疫组化染色观察IGF-1在腰髓神经元中的表达,利用免疫荧光染色观测腰髓组织绿色荧光蛋白(GFP)的表达特点;用透射电镜观察腰髓前角运动神经元中线粒体的形态学变化;提取小鼠脊髓细胞进行流式细胞学分析线粒体膜电位变化;腓肠肌进行免疫组化染色观察线粒体变化。结果免疫荧光染色观测腰髓组织GFP的表达主要在神经元,免疫组化染色观察IGF-1表达于腰髓神经元中。透射电镜观察GFP组线粒体存在嵴消失、空泡化、胞浆水肿、核染色质疏松,而IGF-1组线粒体形态与WT组相似,为长椭圆形,未见嵴消失、空泡化等现象。流式细胞学分析IGF-1组降低了线粒体膜电位的除极。在GFP对照组中腓肠肌的苏木精-伊红染色中观察到严重萎缩的肌纤维,而在IGF-1处理的小鼠中肌肉萎缩减少。Gomori染色显示IGF-1处理后,肌肉细胞的线粒体染色增多,同WT组相当。结论scAAV9-IGF-1可以保护G93A-SOD1转基因小鼠模型中的线粒体,其通过减少线粒体膜电位除极,改善线粒体形态,减少腓肠肌肌肉萎缩,从而产生保护线粒体的作用。
- 温迪吉盈肖刘亚坤李秋生段伟松陈相于秀军
- 关键词：肌萎缩侧索硬化腺相关病毒人胰岛素样生长因子-1线粒体膜电位
- NF-κB介导的神经炎症在脑膜癌病中的研究被引量：4
- 2020年
- 目的观察敲减肺腺癌细胞或条件性敲除小胶质细胞中的IκB激酶β(IKKβ)后,对脑膜癌病(LM)的影响。方法利用以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础的慢病毒感染的方法,敲减肺腺癌细胞中的IKKβ,通过嘌呤霉素筛选及流式细胞仪分选技术,分别建立敲减IKKβ组及对照组的稳转细胞株,通过qPCR方法比较敲减IKKβ后对肿瘤细胞的影响,以及观察条件性敲除小胶质细胞中的IKKβ后,对荷瘤小鼠生存期的影响。结果将肺腺癌细胞中的IKKβ敲减后,与对照组相比,NF-κB介导的部分炎症因子的表达水平明显降低,包括IL-6、IL-1β、TNF-α;与对照组小鼠相比,条件性敲除小胶质细胞中的IKKβ后,荷瘤小鼠的生存期明显延长。结论敲减肺腺癌细胞中的IKKβ后,可以明显减轻NF-κB介导的炎症反应,敲除小胶质细胞中的IKKβ后,可以明显延长荷瘤小鼠的寿命。
- 李媛媛李忠尧毕悦刘亚坤
- 关键词：肺腺癌神经炎症脑膜转移
- TBK1在高级别脑胶质瘤髓样细胞中的表达特征
- 2023年
- 目的探讨TANK结合激酶1(TBK1)在高级别脑胶质瘤髓样细胞中的表达特征.方法选取2019年4月至2021年2月就诊于河北医科大学第二医院的27例WHO分级标准为高级别胶质瘤患者作为研究对象,采用磁珠分选的方法检测胶质瘤瘤旁和肿瘤组织中整合素αM(CD11b)阳性髓样细胞中TBK1的表达,免疫荧光染色观察肿瘤微环境巨噬细胞中磷酸化TBK1(p-TBK1)的表达,并通过流式细胞分析患者术前1 d、术后10~14 d外周血经典单核细胞中p-TBK1的表达变化.结果高级别胶质瘤肿瘤组织CD11b阳性细胞中TBK1总蛋白表达水平较瘤旁组织明显增多(P=0.006);高级别胶质瘤肿瘤组织中p-TBK1蛋白水平较瘤旁明显升高,且p-TBK1的表达与CD68阳性巨噬细胞有共定位;高级别胶质瘤患者术后外周血经典单核细胞中p-TBK1表达较术前明显降低(P=0.001).结论TBK1在高级别胶质瘤微环境髓样细胞中高表达,提示髓样细胞TBK1在胶质瘤的发展中可能起着关键调控作用.
- 李媛媛纪乐张劭然李忠尧李春岩刘亚坤
- 关键词：高级别胶质瘤
- 少突胶质细胞条件性敲除FGF9基因小鼠模型的建立、鉴定及初步表型被引量：2
- 2021年
- 目的建立少突胶质细胞特异性敲除成纤维生长因子9(FGF9)小鼠模型,进一步研究FGF9在神经发育中的作用。方法将Olig1-Cre转基因小鼠与FGF9转基因小鼠(FGF9^(flox/flox))杂交,选取雌性FGF9^(flox/wt)/Olig1-Cre^(+)与雄性FGF9^(flox/flox)合笼交配,F3代获得少突胶质细胞特异性敲除FGF9基因小鼠(FGF9^(flox/flox)/Olig1-Cre^(+))。为了证实条件性基因敲除的特异性及有效性,提取鼠尾组织基因组DNA,通过PCR技术鉴定其基因型,利用蛋白电泳以及激光共聚焦验证FGF9蛋白的表达,并对其表型进行观察。结果从基因水平和蛋白水平证实了成功构建了FGF9^(flox/flox)/Olig1-Cre^(+)小鼠。初步表型分析显示,敲除组小鼠可活可育,生存期与对照组相同,但发育缓慢体重显著减轻。结论成功获得少突胶质细胞中特异性敲除FGF9基因小鼠,FGF9基因条件性敲除后引起小鼠发育缓慢。
- 李端刘亚坤段冰霞杜娟郭默然
- 关键词：少突胶质细胞表型分析
- Irf5对肌萎缩侧索硬化细胞模型的毒性作用
- 2023年
- 目的观察干扰素调节因子5(interferon-regulatory factor 5,Irf5)对肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS),TDP-25细胞模型的影响。方法利用慢病毒感染的方法,建立过表达Irf5的TDP-25稳转细胞株,在基因及蛋白水平鉴定其表达效率,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,通过实时荧光定量PCR方法比较过表达Irf5后对TDP-25细胞的影响,包括细胞凋亡、细胞周期以及炎症因子的产生。结果过表达Irf5后,与细胞凋亡有关的指标Caspase-3、Caspase-8和Bak1都较对照组有所增加。细胞周期调控蛋白,P21的表达增加。炎症因子包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-12p40(IL-12p40)的表达都有所增加,与对照组相比,差异有统计学意义。结论Irf5促进TDP-25细胞的凋亡、细胞周期阻滞,以及产生促炎细胞因子,加速了细胞的死亡。
- 刘亚坤纪乐于利双李忠尧李春岩李媛媛
- 关键词：肌萎缩侧索硬化细胞凋亡炎症因子
- 脑膜癌病小鼠模型实验方法的改进被引量：2
- 2018年
- 目的对脑膜癌病(leptomeningeal carcinomatosis,LC)动物模型的实验方法进行改进,建立操作简单、重复性较好的脑膜癌病小鼠模型。方法雌性C57BL/6小鼠35只,20只随机分为对照组和实验组,每组10只,分别经小脑延髓池(cisterna magna,CM)穿刺注射无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)或Lewis肺癌细胞(lewis lung carcinoma cell,LLC)悬液7.5μL(1.5×105个细胞),观察评估注射后两组小鼠体质量随时间变化及神经系统症状表现;15只随机分为正常对照组(n=3)、PBS组(n=6)和模型组(n=6),当小鼠症状表现明显时,HE染色观察软脑(脊)膜病理改变。结果 小脑延髓池注射PBS或LLC细胞悬液后第11天开始,对照组小鼠体质量逐渐增加,而实验组小鼠体质量进行性下降直至死亡,差异有统计学意义[第11、13、17、21、25、29、33、37天,两组小鼠体质量分别为(18.84±1.66)g,(17.01±1.79)g;(17.21±1.49)g,(15.56±1.37)g;(17.73±1.51)g,(14.34±1.16)g;(18.37±1.38)g,(13.33±1.26)g;(18.84±1.66)g,(13.10±0.78)g;(18.83±1.84)g,(12.14±0.87)g;(19.73±1.90)g,(11.39±0.93)g;(20.25±1.92)g,(10.33±0.71)g,t依次为-2.378,-2.583,-5.636,-8.283,-8.462,-9.798,-8.258,-6.981,均P<0.05]。实验组小鼠均在40 d内死亡,中位生存时间为32.5d,对照组小鼠均至观察终点40 d仍存活,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠小脑延髓池注射LLC细胞后症状出现在第10~16天,平均为(13±2)d;对照组小鼠均活动正常。HE染色显示模型组小鼠脑与脊髓软膜组织可见肿瘤细胞浸润,以脑基底部及脊髓颈段多见。结论 小脑延髓池注射Lewis肺癌细胞可成功建立肺癌来源脑膜癌病小鼠模型。
- 李媛媛刘亚坤李忠尧韩玮欣何俊瑛卜晖
- 关键词：脑膜癌病小脑延髓池LEWIS肺癌
- 水通道蛋白4和中枢神经系统疾病被引量：2
- 2016年
- 水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是近年来发现的一小型跨膜蛋白家族,它们广泛表达于众多类型细胞的质膜上,参与膜内外液体转运途径。目前在哺乳动物细胞膜上共发现13种AQPs（AQP0-AQP12）,在啮齿类动物及人类有7个分布于脑内,分别为AQP1、AQP3、AQP4、AQP5、AQP8、AQP9和AQP11,其中AQP4（（aquaporin-4））是中枢神经系统（central nervous system，cNs）分布最广泛的AQP。
- 张洁张坤西刘亚坤
- 关键词：水通道蛋白AQUAPORINS星形胶质细胞中枢神经系统水肿形成
- scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用
- 2024年
- 目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。
- 温迪吉盈肖李秋生陈相刘亚坤
- 关键词：肌萎缩侧索硬化人胰岛素样生长因子-1
