杨娟
- 作品数：12 被引量：21H指数：2
- 供职机构：四川农业大学食品学院更多>>
- 发文基金：四川省教育厅自然科学科研项目四川省科技支撑计划四川省科技计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学更多>>
- 鲢鱼肝脏中高分子CPIs提取方法的建立及其鉴定
- 2018年
- 研究了不同浓度的丝氨酸蛋白酶抑制剂(PMSF)、热处理条件及pH值对鲢鱼肝脏中高分子半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitors,CPIs)提取过程中的作用,根据其对CPIs在TSK液相上高分子质量部分的蛋白峰值和比活力(荧光合成肽底物法)的影响,确定了最佳粗提条件为:以含5 mmol/L的苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF),100mmol/L的Tris,3 mmol/L的EDTA(pH 7.5)作为提取缓冲液,而后在pH 8.7碱处理条件下经90℃加热5 min后,再回调到pH 7.0。用该法制备的鲢鱼肝脏CPIs粗提物经制备型Sephacryl S-200分子筛层析,分离得到的高分子活性部分,进一步经过反相酶谱法鉴定得到一种高相对分子质量的活性CPI,推测其可能是与某些蛋白结合形成了复合物,或是高分子CPIs的二聚体形式。
- 蒋然然钟海霞但静陈治光李冉蒋光阳杨娟李美良李树红
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂高分子
- 鲢鱼重组Cystatin及其酶解产物对草鱼冷藏肉片优势腐败菌的抑制作用被引量：2
- 2018年
- 首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液(Papain)对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)和中间气单胞菌(Aeromonas media)的抑菌活性。结果表明,酶解6 h后的产物,即9.5 ku以下的片段对3种菌的抑菌效果均最好。再利用凝胶过滤高效液相色谱(TSK-GEL G2000SWXLHPLC)和双向电泳对6 h酶解产物进行分离纯化分析。发现仅峰T-2对3种菌均具有明显的抑制活性,峰T-2在TSK-GEL G2000SWXLHPLC上呈现单一峰,电泳得到单一蛋白点,其分子质量为8.6 ku,p I值为6.5。最后通过RPLC-MS/MS串联质谱鉴定该蛋白点,得到3个肽片段(31QSNDAFVR38、46VQQQVAAGMKY56和81NPSIEQVIQ89)且含有Cystatin特征序列QVAAG。结果提示,Cystatin蛋白(完整序列分子质量12~14 ku)内部,存在能够发挥抑菌作用的肽片段。
- 杨娟钟海霞李树红白稚子林灵李美良刘明宇林昊
- 关键词：酶解双向电泳分析质谱鉴定
- 饲料中适宜含量铁对建鲤鱼糜冻藏品质变化及组织蛋白酶B/L的影响
- 2017年
- 对经过不同铁含量的饲料(缺乏组53.9 mg/kg,适宜组146.1 mg/kg)饲喂90 d后的建鲤,取鱼肉加工为鱼糜,于-20℃条件下进行冻藏实验,取样点为0、1、2、4、6周,测定鱼糜冻藏品质指标的变化,包括Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基、二硫键、表面疏水性、TBA值;鱼糜冻藏期间组织蛋白酶B、组织蛋白酶L活性采用荧光合成肽底物法进行测定。结果表明,适宜含量铁能极显著提高鱼糜肌动球蛋白初始Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基含量(p<0.01),降低二硫键含量(0.01
- 李冉钟海霞李树红杨娟胡强柯勤勤白稚子林灵李美良
- 关键词：铁建鲤鱼糜
- CNBr-Papain-Sepharose 4B亲和填料的制备及其性质研究
- 2021年
- 为探求从鱼类废弃组织及漂洗水中回收Cystatin的高效方法,首先自制了溴化氢-木瓜蛋白酶-琼脂糖凝胶(CNBr-Papain-Speharose 4B)亲和填料,确定了适宜的配基Papain偶联密度,之后测定了该亲和填料的热稳定性、酸碱稳定性、贮藏性能及使用的重复性,最后以该制备的填料对鱼糜漂洗水中的CPIs活性进行了初步回收。以对重组鲢鱼Cystatin吸附率为评价指标,确定适宜Papain偶联密度,即CNBr-Speharose 4B和Papain溶液最佳料液比为1∶7(g∶mL)。CNBr-Papain-Speharose 4B的适宜使用温度为4~40℃,且在pH 3.0~12.0之间稳定。CNBr-Papain-Speharose 4B在4℃下,6个月的贮藏期内,表现较好的稳定性。将填料装柱后进行验证实验,证明该填料的使用重复性能稳定,且最终成功高效地回收了鲢鱼鱼糜漂洗水中的CPIs。
- 刘明宇李树红杨娟林昊杨珂谭小千
- 关键词：填料性能
- 鲟鱼鱼肠抗氧化肽的提取及抗氧化性被引量：2
- 2020年
- 探讨酶法制备具有抗氧化活性的鲟鱼鱼肠抗氧化肽的方法,并进行体外抗氧化活性的测定。结果表明,比较4种蛋白酶酶解产物的抗氧化能力,确定胃蛋白酶为制备鲟鱼鱼肠抗氧化肽的最佳水解用酶;通过单因素试验和正交实验分析得出最适酶解工艺是:胃蛋白酶加酶量3 200 U/g,酶解时间1.5 h,料液比1∶20,温度35℃。其体外抗氧化能力随肽质量浓度增大而增大,在浓度为1.5 mg/mL时,鲟鱼鱼肠抗氧化肽清除DPPH·能力达到Vc的83.64%,对·OH清除率为78.06%,还原力大小约为Vc溶液的1/3。胃蛋白酶酶解鲟鱼鱼肠制备的抗氧化肽具有较好的抗氧化活性,其作为一种潜在的商业抗氧化剂具有良好的应用前景。
- 饶承冬柯勤勤郑杨杨邓静叶浪杨娟李树红王彩霞张志清陈安均刘兴艳申光辉吴贺君罗擎英黎杉姗苏赵李美良
- 关键词：胃蛋白酶抗氧化肽正交实验抗氧化性
- 饲料中添加适宜水平铁对建鲤肉质、鱼糜稳定性及组织蛋白酶B/L的影响被引量：1
- 2019年
- 探讨饲料中添加适量铁对建鲤肉质、鱼糜品质及其肌肉中组织蛋白酶B/L的影响。以添加适宜水平铁的饲料饲喂90 d的建鲤(适宜组,铁实测质量分数146.1 mg/kg)为研究对象,同时以未添加铁组(缺乏组,铁实测质量分数53.9 mg/kg)作为对照。采样后测定鱼肉品质指标及肌肉中组织蛋白酶B/L活性,并采用免疫组化法进行蛋白表达定量;而后将2组鱼肉加工为鱼糜,并测定其稳定性指标。结果表明,与缺乏组相比,适宜组肌原纤维耐折力、断裂指数分别稍有上升及下降,但差异不显著(P>0.05);剪切力极显著增加31.80%(P<0.01),可溶胶原蛋白含量、不溶胶原蛋白含量和总胶原蛋白含量均分别极显著增加305.45%、180.98%、219.35%(P<0.01)。适宜组鱼肉p H及失水率略呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。适宜组组织蛋白酶B/L活性分别极显著(P<0.01)及显著(0.01
- 李冉钟海霞李树红杨娟胡强柯勤勤白稚子林灵李美良
- 关键词：铁建鲤鱼肉品质
- 小麦Bowman-Birk型蛋白酶抑制因子的克隆表达及其抑制鱼糜凝胶软化的效果研究
- 2016年
- 为探究重组小麦(Triticum turgidum)Bowman-Birk蛋白酶抑制剂(BBI)抑制活性特征及其对鲢鱼肌原纤维蛋白自溶反应的抑制效果,采用TA克隆技术克隆小麦BBI成熟肽基因片段,并对原核表达的小麦BBI蛋白进行镍亲和层析纯化,利用SDS-PAGE、TSK-GEL G2000SWxl高效液相色谱检测诱导及纯化效果。在测定重组小麦BBI对胰蛋白酶的抑制活性的基础上,进一步通过SDS-PAGE分析了重组BBI对鲢鱼肌原纤维蛋白自溶反应的抑制作用。结果表明,经双酶切鉴定证实成功获得了BBI成熟肽基因片段,该基因与野生二粒小麦BBI相关基因(GenBank登录号EU346892.1)序列相似性为99.63%。目的蛋白在SDSPAGE及TSK-GEL G2000SWxl高效液相色谱分析中,分别表现为单一带和单一峰,产物得到有效纯化,分子量约10.5kD。该重组小麦BBI对胰蛋白酶有明显的抑制活性。添加量5μg·mg-1重组BBI可显著抑制鲢鱼肌原纤维蛋白(尤其是肌球蛋白重链)在pH 7.5,50℃下的自溶。
- 李树红陈恩蒋光阳陈治光李冉杨娟钟海霞
- 关键词：克隆表达纯化抑制活性
- 鲟鱼鱼肠抗氧化肽的提取及抗氧化性研究
- [目的]采用4种蛋白酶制备具有抗氧化活性的鲟鱼鱼肠抗氧化肽,[方法]以羟基自由基清除率为评价指标,用单因素及正交试验考察加酶量、酶解时间、料液比、温度等因素对酶解反应的影响,确定最佳水解用酶及最佳水解条件.[结果]比较4...
- 柯勤勤邓静叶浪饶承冬胡强杨娟白稚子林灵李树红王彩霞李美良
- 关键词：胃蛋白酶抗氧化肽正交实验抗氧化性
- 卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼肉片中优势腐败菌的抑菌效果被引量：1
- 2018年
- 首先采用传统的分离方法从4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点中分离出3株优势菌株,并对其进行鉴定。随后将这3株优势菌分别回接到4℃有氧冷藏草鱼肉片上,判断其致腐能力。最后,采用滤纸片法测定卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)花叶、花蕾提取物对3株优势腐败菌的抑菌活性。结果表明,4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点优势腐败菌为腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)和中间气单胞菌(Aeromonas media),其中腐败希瓦氏菌的致腐能力最强。抑菌实验表明,当加量为20μL时,卷丹百合花叶水提物对腐败希瓦氏菌的抑菌圈直径为32 mm,花蕾60%乙醇提取物对草莓假单胞菌和中间气单胞菌的抑菌圈直径分别达到10 mm和26 mm。因此,可以判断卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片中货架期终点优势腐败菌具有抑菌效果。
- 李树红钟海霞李松杨娟蒋光阳林灵白稚子吴睿李美良
- 关键词：草鱼腐败菌
- 重组Cystatin对冷藏鲢鱼的抑菌效果被引量：1
- 2019年
- 分离鉴定4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点腐败相关优势假单胞菌,并研究鲢鱼重组Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。首先利用CFC培养基从4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点,分离筛选出腐败相关假单胞菌,并采用生理生化和16 SrDNA法对其进行鉴定,其次将腐败菌株进行回接试验,通过测定各腐败菌回接组的挥发性盐基氮(TVB-N)值、菌落数、感官评分判断其致腐能力。最后,采用滤纸片扩散法和营养肉汤法鉴定重组鲢鱼Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。结果表明,荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)和草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)为主要致腐菌,所占比例分别为63.3%、26.7%,且荧光假单胞菌致腐能力强于草莓假单胞菌。重组Cystatin对两种菌均有明显的抑菌效果,且呈剂量依赖关系。
- 钟海霞李冉李树红杨娟胡强柯勤勤林灵白稚子李美良
- 关键词：鲢鱼CYSTATIN抑菌作用
