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MDS铁过载小鼠模型的建立及铁过载对小鼠生存的影响: 金鑫隋松男邢艺徐萍曹小立王露桥孟娟霞卢文艺崔蕊赵明峰

粒细胞集落刺激因子受体突变和髓系肿瘤发生被引量：6: 2016年; 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)主要作用于中性粒细胞系造血细胞的增殖、分化和活化,其功能发挥有赖于与效应细胞表面同型二聚体受体——粒细胞集落刺激因子3受体(CSF3R)的结合。近年研究发现,CSF3R突变对疾病的发生可发挥重要作用,部分血液系统疾病,尤其是髓系肿瘤,如慢性中性粒细胞白血病等存在各种CSF3R突变,导致G-CSF转导通路发生异常,而抑制其下游通路的激酶可作为治疗上述疾病的潜在靶点。本文总结了各种CSF3R突变、作用机制及其对髓系肿瘤发生的贡献,旨在进一步探讨髓系疾病的发生机制,为其分子诊断和临床治疗提供新的方法,并为研发新型分子靶向药物提供思路。; 邢艺赵明峰; 关键词：粒细胞集落刺激因子受体突变髓系肿瘤

MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定被引量：1: 2018年; 目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响。方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Coγ射线照射的C57BL/6小鼠。8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型。移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白。移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率。结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291fs蛋白表达。相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积。结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础。; 金鑫隋松男徐萍邢艺曹小立王露桥孟娟霞卢文艺崔蕊赵明峰; 关键词：MDS 骨髓移植

凝集素样黏附素3基因表达水平与小鼠体内白念珠菌生物膜形成的相关性研究: 2017年; 目的探讨凝集素样黏附素3（als3）基因表达水平与小鼠体内白念珠菌生物膜形成的相关性。方法实时定量PCR法检测2016年2月至2016年8月天津市第一中心医院临床送检的白念珠菌55株，依als3基因表达水平分为高、低als3基因表达组。C57小鼠30只，根据随机数字表法分为高表达组15只、低表达组10只和空白对照组5只，采用腹腔埋置静脉导管和腹腔注射白念珠菌法建立白念珠菌生物膜动物模型；饲养2周后取出导管，倒置显微镜观察白念珠菌成膜情况；透射电子显微镜观察超微结构；导管冲洗干净后观察其生长情况；实时定量PCR法分别于导管取出后12、24和48 h时检测als3基因表达情况。计量资料行t检验，率的计较行卡方检验。结果体外实验高表达组菌株有11株（11/15）形成生物膜，低表达组仅有1株（1/10）形成生物膜，两组比较差异有统计学意义（χ2＝9.64，P〈0.05）。小鼠体内实验，als3基因高表达组2只小鼠死亡，8株（8/13）形成生物膜，低表达组仅2株（2/10）形成生物膜，两组比较差异有统计学意义（χ2＝4.02, P〈0.05）。透射电子显微镜下高表达组白念珠菌细胞膜增厚、线粒体增多。als3基因高表达组导管取出培养，9株（9/13）有菌落生长，低表达组5株（5/10）有菌落生长，两组比较差异无统计学意义（χ2＝0.99, P〉0.05）。als3基因高表达组的白念珠菌als3基因表达在生物膜形成过程中逐渐下降，而低表达组的表达变化不明显，两组各时间的als3基因表达比较差异均有统计学意义（t值分别为8.7、10.3和9.2，均P〈0.01）。结论als3基因高表达的白念珠菌更易于体内形成生物膜。; 邓可可邓琦张坚磊陈锦艳江嫣雨邢艺; 关键词：生物膜基因表达

MDS铁过载小鼠模型的建立及铁过载对小鼠生存的影响: 金鑫隋松男邢艺徐萍曹小立王露桥孟娟霞卢文艺崔蕊赵明峰

铁过载对小鼠外周血T淋巴细胞数量及功能的影响: 2016年; 铁是血红蛋白与红细胞的重要组成部分，在机体氧运输、DNA合成和细胞代谢中发挥重要作用。但是，多种因素可导致机体铁沉积量过多，造成机体铁过载，对心脏、骨髓、垂体等多脏器造成不同程度的损伤。前期我们的研究已经证实铁过载可通过升高活性氧物质（ROS）损伤骨髓造血功能，影响造血干细胞及间充质细胞的数量和功能。; 陈洁赵明峰曹小立孟娟霞邢艺贺小圆金鑫徐萍江嫣雨; 关键词：铁过载鼠外周血骨髓造血功能淋巴活性氧物质间充质细胞

铁过载巨噬细胞体外模型的建立及氧化应激对铁过载巨噬细胞的损伤作用被引量：8: 2016年; 目的通过铁与巨噬细胞共培养，建立体外铁过载巨噬细胞模型，检验铁过载对细胞氧化应激水平的影响以及氧化应激升高对巨噬细胞的影响。方法在巨噬细胞培养的过程中分别添加不同浓度（5、10、20、40、80μmol／L）枸橼酸铁铵（FAC）建立铁过载巨噬细胞模型（铁过载组），以不添加FAC作为对照组，检验这一过程中细胞数量及状态、细胞活性、细胞吞噬功能的变化，细胞生成活性氧、活性氮水平以及与之相关的氧化应激信号通路的变化。再用地拉罗司（DFX）去铁及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）清除过多的氧化应激后，检测上述指标的变化。结果（1）在培养液中加入不同浓度FAC培养，发现巨噬细胞内可变铁池（LIP）水平升高，且具有浓度依赖性，在含80μmol／LFAC的培养液中LIP水平达到最高。（2）随着FAC浓度的提高，巨噬细胞的活性逐渐降低，依次为对照组的51．58％、40．98％、16．23％、3．46％、0．05％（均P〈0．05）。选取活性降低至16．23％的FAC浓度（20μmol／L）作为后续实验铁过载组。（3）和对照组相比，铁过载组巨噬细胞的数量减少至对照组的32．80％（P〈0．05），细胞状态由贴壁变为部分悬浮；铁过载组巨噬细胞的吞噬功能降低至对照组的20．40％（P〈0．05）。（4）进一步的机制研究发现铁过载组的活性氧水平及活性氮水平分别是对照组的7．71及1．45倍（均P〈0．05）；经过荧光定量PCR检测发现，与对照组相比，参与活性氧生成的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）基因、参与活性氮生成的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因的mRNA表达水平升高，参与活性氧清除的谷胱甘肽过氧化物酶1（GPX1）基因mRNA表达水平降低；氧化应激信号通路相关的磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）基因mRNA表达水平升高；负反馈调节氧化应激的; 曹小立赵明峰李德冠邢艺张宇辰陈洁贺小圆崔蕊孟娟霞肖霞穆娟江嫣雨武日茂; 关键词：巨噬细胞铁超负荷细胞存活氧化性应激信号传导

克柔念珠菌临床分离株对伊曲康唑耐药的分子表达情况被引量：1: 2015年; 目的初步探讨克柔念珠菌临床分离株耐伊曲康唑的分子表达情况。方法对16株克柔念珠菌唑类靶酶基因ERG11进行PCR扩增和测序，比较伊曲康唑敏感组（3株）、剂量依赖性敏感组（8株）和耐药组（5株）的基因突变情况。同时，利用实时荧光定量PCR检测3组靶酶基因ERG11、外排泵基因ABC1和ABC2的mRNA表达差异。将数据转换后服从正态分布且方差齐，两组间比较采用双侧t检验。结果16株克柔念珠菌ERG11基因共存在7个突变位点，其中6个同义突变，1个错义突变（C44T），3组均可出现该错义突变。克柔念珠菌临床分离株伊曲康唑耐药组ERG11mRNA表达量较剂量依赖性敏感组和敏感组高（P值分别为0．015、0．002）；耐药组ABC2mRNA表达量也较剂量依赖性敏感组和敏感组高（P值分别为0．016、〈0．01），且剂量依赖性敏感组mRNA表达量高于敏感组（P=0．007）；而耐药组ABC1mRNA表达量较低。1株同时耐伊曲康唑和伏立康唑的克柔念珠菌（cK10），其职G11、ABC1和ABC2mRNA表达水平在所有耐药株中均为最高。结论ERG11基因序列存在多态性，未发现与伊曲康唑耐药有关的突变位点。ERG11和ABC2基因表达上调可能是克柔念珠菌临床分离株耐伊曲康唑的主要分子机制。; 贺小圆赵明峰陈锦艳武日茂张坚磊崔蕊江嫣雨陈洁曹小立邢艺邓琦; 关键词：克柔念珠菌伊曲康唑多药聚合酶链反应反转录聚合酶链反应

HIF-1α在照射损伤铁过载疾病红系造血中的表达及意义被引量：2: 2017年; 目的:研究铁过载状态下缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在照射损伤小鼠体内的表达及其对红系造血的影响和机制。方法:20只小鼠随机分成Ctrl(对照)、IR(单纯照射损伤)、IO(照射损伤+铁过载)和RAPA(雷帕霉素给药)共4组,验证铁过载模型;培养红系集落:CFU-E(红系集落形成单位)和BFU-E(爆式红系集落形成单位);流式细胞术检测骨髓原始红细胞:早期Ter119^+CD71^+和晚期Ter119^+CD71^-的比例;RT-PCR检测骨髓细胞HIF-1α及相关信号分子表达。结果:IR和IO组的HIF-1α的表达均较Ctrl组明显升高,且IO组明显高于IR组(P<0.05)。IR和IO组的晚期红细胞比例、BFU-E和CFU-E数目均较Ctrl组明显降低,且在IO组明显低于IR组(P<0.05)。IR和IO组HIF-1α相关信号分子表达明显高于Ctrl组(P<0.05)。应用mTOR抑制剂RAPA时HIF-1α及相关信号分子的表达明显降低,BFU-E明显升高(P<0.05)。结论:照射使HIF-1α表达升高,红系造血集落和晚期原始红细胞比例下降,铁过载更加重了损伤。雷帕霉素可缓解部分损伤,提示铁过载可通过HIF-1α介导损伤红系造血。; 邢艺赵明峰曹小立金鑫陈洁徐萍隋松男江嫣雨贺小圆; 关键词：HIF-1Α 雷帕霉素铁过载红系造血

铁过载对小鼠脾脏CD8^+ T淋巴细胞凋亡及分泌功能的影响被引量：4: 2016年; 目的:探讨铁过载对小鼠脾脏CD8^+T细胞凋亡及分泌功能的影响。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、去铁组、抗氧化组,每组10只。腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,观察小鼠铁负荷情况及脾脏CD8^+T淋巴细胞内可变铁池(LIP)水平,活性氧(ROS)水平;用流式细胞术检测脾脏CD8^+T细胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B和perforin细胞因子的分泌情况,Annexin/PI标记流式细胞术检测CD8^+T细胞凋亡。免疫磁珠分选小鼠脾细胞获得CD8^+T细胞,RT-PCR检测CD8^+T细胞的IFN-γ、TNF-α、G ranzyme-B、perforin、BCL-2和BAX表达。结果:脾组织铁染色及流式细胞术检测均显示脾发生铁过载。与对照组相比外周血中CD8^+T细胞中ROS明显上升(108.45±9.22 vs 187.48±5.36,P<0.01)。与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8^+T细胞比例明显降低(7.41±1.23)%vs(14.05±0.79)%,(P<0.01)。流式细胞术检测显示,与对照组相比,铁过载组小鼠脾CD8^+T细胞IFN-γ显著降低(11.62±1.99)%vs(3.77±0.84)%,(P<0.05),GranzymeB表达显著降低(11.36±1.48)%vs(5.29±1.74)%,(P<0.05);小鼠脾CD8^+T细胞中IFN-γ(×10-4)表达(10.94±0.13 vs 2.19±0.78,P<0.05)明显下降,Granzyme-B(×10-3)表达(7.70±0.75 vs 4.88±0.08,P<0.05)明显下降。与对照组相比,小鼠脾CD8^+T细胞凋亡率明显增高(11.33±0.48)%vs(2.27±0.33)%,(P<0.05);小鼠脾CD8^+T细胞中BCL-2表达(×10-3)明显下降(48.29±5.81 vs 1.17±0.21,P<0.05),BAX表达(×10-2)明显上升(13.90±2.67 vs 446.93±76.64,P<0.05)。上述铁过载对小鼠脾CD8^+T细胞的作用经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。结论:铁过载可通过上调脾CD8^+T细胞内ROS进而上调BAX并下调BCL-2,增加CD8^+T细胞凋亡率,抑制CD8^+T细胞IFN-γ、Granzyme-B和蛋白的表达。经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转此作用。; 陈洁赵明峰曹小立孟娟霞邢艺贺小圆金鑫徐萍江嫣雨; 关键词：铁过载 CD8^+T淋巴细胞

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邢艺

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