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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆: 猪带绦虫/囊尾蚴病(Cysticercosis cellulosae)是呈世界性分布的严重危害公共卫生的人-畜共惠寄生虫病之一,主要流行于发展中国家或地区,在经济发达国家如美国、英国、日本、澳大利亚等国也有报道。目前国内...; 景志忠郭爱疆海岗窦永喜骆学农郑亚东才学鹏; 文献传递

猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆被引量：10: 2005年; 研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。; 景志忠郭爱疆海岗宗瑞谦才学鹏; 关键词：猪带绦虫六钩蚴克隆 CDNA表达文库重组率

表达FMDV vp1基因和山羊γ-干扰素基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特性研究: 口蹄疫(FootandmouthDisease，FMD)和羊痘(Capripox)均被世界动物卫生组织列为极其重要传染病，虽然山羊和绵羊不如牛和猪易感，但是山羊和绵羊感染口蹄疫病毒后会长期带毒，成为隐性带毒者，这给该病的...; 海岗; 关键词：山羊痘病毒干扰素基因; 文献传递

共表达口蹄疫病毒vp1基因和山羊IFN-γ基因的重组山羊痘病毒的构建被引量：2: 2008年; 将山羊IFN-γ基因插入到含有口蹄疫病毒(FMDV)vp1基因的山羊痘病毒(GPV)转移载体PTK-vp1中,获得含有FMDVvp1基因和山羊IFN-γ基因的重组转移载体pTK-vp-IFNγ,以本实验室构建的表达β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的山羊痘重组病毒rAV41-LacZ为亲本毒,与转移载体pTK-vp-IFNγ共同转染犊牛睾丸细胞进行同源重组,通过7轮反向蓝白斑筛选,产生重组山羊痘病毒rAV41-VP-IFNγ,通过PCR和间接免疫荧光实验证实获得了能够稳定表达FMDVvp1和山羊IFN-γ的重组山羊痘病毒。; 海岗韩宗玺邵昱昊王芳陈洪岩刘胜旺; 关键词：重组山羊痘病毒 Β-半乳糖苷酶基因

山羊IL-2基因的克隆、表达及其多克隆抗血清的制备: 2007年; 应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)基因并测序,将编码山羊白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组质粒并进行确证性测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE分析显示,表达的山羊IL-2融合蛋白分子量约为18kD。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。用所获得的重组山羊IL-2纯化产物经3次肌内注射新西兰白兔,制备了兔抗山羊IL-2多克隆血清,并用Western blot进行了证明。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2融合蛋白,并制备了抗山羊IL-2多克隆抗血清,为下一阶段关于山羊IL-2重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。; 海岗刘胜旺陈洪岩; 关键词：抗血清

山羊干扰素-γ的克隆、原核表达及其抗血清的制备被引量：1: 2007年; 应用RT-PCR方法从免疫过山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊干扰素-γ(IFN-γ)基因,经序列测定,其开放阅读框架共有501bp,推测其分子质量(MW)为19.327KD。该基因与GenBank发表的山羊干扰素-γ基因序列(U34232)比较,核苷酸序列同源性为99.4%。经SignalP3.0分析表明,前23个氨基酸为信号肽序列。将信号肽序列去除并克隆到原核表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果表明该基因在大肠杆菌中以包涵体形式融合表达。用ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化并免疫新西兰兔,制备了兔抗山羊IFN-γ多克隆血清。经WesternBlot鉴定,多克隆抗血清可与纯化的山羊IFN-γ蛋白发生特异性反应,说明该重组蛋白具有抗原活性,为我们进一步研究其在疾病诊断和免疫评价方面的应用奠定了基础。; 金标刘胜旺海岗王芳陈洪岩; 关键词：山羊干扰素Γ 原核表达抗血清

猪囊尾蚴AgB基因的克隆表达及其免疫学特性分析被引量：1: 2008年; 目的克隆猪囊尾蚴AgB基因并在大肠杆菌中表达,为研制猪囊尾蚴病诊断试剂和基因工程疫苗奠定基础。方法从猪囊尾蚴虫体中提取总RNA,利用反转录聚合酶链式反应及重叠延伸PCR法扩增AgB完整序列,并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌中诱导表达。通过SDS-PAGE、Western-blotting检测AgB的表达和免疫反应活性。通过对包涵体的洗涤、纯化及变复性研究,纯化目的蛋白。采用ELISA法检测纯化蛋白检出猪囊尾蚴阳性血清率和免疫小鼠血清中抗猪囊尾蚴抗体的水平。结果测序证实扩增出AgB基因序列并正确插入到原核表达载体。表达质粒在大肠杆菌BL21中高效表达。纯化的目的蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性。结论成功扩增了全长AgB基因并得到了高效表达,纯化了具有免疫性的重组蛋白,为进一步开展AgB的诊断试剂和重组疫苗研究奠定了基础。; 郭爱疆才学鹏海岗窦永喜贾万忠骆学农张少华景志忠; 关键词：原核表达纯化

小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库的构建: 目的构建小鼠抗猪囊尾蚴的全套单链抗体噬菌体表面展示文库,从中筛选与猪囊尾蚴粗抗原高亲合力的单链抗体,为猪囊虫病的诊断、预防奠定基础.方法从猪囊尾蚴粗抗原免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,用抗体可...; 海岗; 关键词：猪囊尾蚴; 文献传递

清远市公共场所集中空调通风系统污染现状及原因分析: 目的了解清远市区集中空调通风系统送风微生物污染状况。方法于2007年采集清远市区14家宾馆、酒店的集中式空调系统125个送风口,分别进行细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌进行检测。结果所调查的14家单位有9家微生物超标...; 李桂霞海岗沈政冯贤惠王平原明剑辉林凤娣陈丽萍黎晓红黎智怡; 关键词：微生物污染空调系统送风口

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海岗