陈晟
- 作品数：71 被引量：212H指数：8
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程环境科学与工程更多>>
- T26P和A30P位点突变对Thermobifida fusca葡萄糖异构酶热稳定性及活性的影响被引量：2
- 2013年
- 通过定点突变技术构建了嗜热菌Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(TFGI)的3个突变体:TFGI/T26P,TFGI/A30P和TFGI/T26P/A30P。结果表明突变体TFGI/A30P的热稳定性得到提高,70℃下半衰期从14.9h提高到22.3h,且最适温度不变,最适温度下的比酶活保持不变。而突变体TFGI/T26P和TFGI/T26P/A30P在70℃下半衰期都降到8.1h,最适温度和最适温度下的比酶活也都显著降低。TFGI及其单突变体的三维结构模型叠加分析结果表明:突变体A30P没有产生其它分子间作用力,TFGI的"Phe27环"的基本结构没有改变,因脯氨酸残基降低了蛋白解折叠的熵值,所以其热稳定性提高而比活力不变。
- 邓辉陈晟陈坚吴敬
- 关键词：定点突变热稳定性嗜热菌葡萄糖异构酶
- 发酵乳杆菌来源4,6-α-葡萄糖基转移酶的酶学表征及产物性质鉴定被引量：3
- 2021年
- 4,6-α-葡萄糖基转移酶(4,6-α-GTs)能以直链淀粉为底物合成含α(1-6)键的α-葡聚糖,在酶法合成膳食纤维中具有很大的应用潜力。根据4,6-α-GTs氨基酸序列中的保守区段设计引物,从发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum基因组中PCR扩增得到一条假定GTFB-like 4,6-α-GTs基因(命名为gtf16),构建重组质粒pET15b-gtf16并在宿主大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)成功表达,纯化后对其进行酶学表征。结果表明,该酶最适pH为5.0,最适温度为40℃。通过薄层色谱、NMR光谱、水解酶水解等检测手段对Gtf16酶转化产物进行系统的表征,发现其产物具有以下特征:与已报道的来源于罗伊氏乳杆菌Lactobacillusreuteri121菌株的4,6-α-葡萄糖基转移酶-GtfB与直链淀粉作用后的产物异麦芽寡糖结构类似;产物键型中α(1-6)键占比可达75%,产物平均分子量为23 793 Da;产物被消化酶水解后得到的抗消化成分含量可达88.22%。
- 盛露菲杨卫康吴敬陈晟
- 关键词：克隆表达酶学性质异麦芽寡糖
- 定点突变提高普鲁兰酶的热稳定性及催化效率
- 段绪果陈晟吴丹吴敬
- 关键词：普鲁兰酶定点突变热稳定性
- 嗜酸芽孢杆菌普鲁兰酶在大肠杆菌中的表达及发酵优化被引量：3
- 2018年
- 为了在3L发酵罐水平上提高重组菌E.coli BL 21(DE3)/pET20b(+)-BapulA的普鲁兰酶的表达量和胞外分泌,将嗜酸芽孢杆菌普鲁兰酶(Bacillus acidopullulyticus)在大肠杆菌中进行重组表达,并在3L发酵罐水平上对重组菌进行发酵优化,考察了发酵条件对重组酶表达的影响。重组菌发酵的最佳条件为:发酵前期菌体生长温度和pH分别为30℃和7.0,当菌体浓度OD_(600)达到50时,发酵温度降低至25℃,此时调节pH为6.2,同时开始流加乳糖[0.4g/(L·h)]进行诱导;在发酵过程中,当菌体浓度OD_(600)依次达到15,45,75时,分别加入浓度为1.5g/L的甘氨酸,当菌体OD600为105时,再加入浓度为3g/L的甘氨酸。发酵结束后普鲁兰酶的胞外酶活达659.0U/mL,最高总酶活达1 910.1U/mL,与摇瓶的初始总酶活(41.1U/mL)和胞外酶活(6.5U/mL)相比,分别提高了45.4倍和100倍。
- 杨向会陈晟吴敬
- 关键词：普鲁兰酶发酵优化PH甘氨酸
- 重组角质酶的制备及合成乙酸乙酯条件优化
- 2018年
- 为了实现镰孢菌角质酶的高效表达,对重组菌株P. pastoris KM71/pPIC9K-ScCuA在3 L发酵罐进行了发酵工艺优化,获得的最优发酵条件为:诱导温度28℃,初始诱导菌浓OD600为100,诱导阶段甲醇体积分数为1%条件下进行诱导产酶。在该条件下发酵138 h时上清酶活可达到最大值419 U/mL,是优化前的2倍。对重组角质酶在有机溶剂中合成乙酸乙酯的酯化条件进行了优化,结果表明,当底物乙酸浓度为0.1 mol/L,乙醇浓度为0.15 mol/L,温度50℃,在异辛烷中反应16 h,乙酸乙酯可以达到最大转化率94.12%。
- 郭小杰宿玲恰吴敬陈晟
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵酯合成乙酸乙酯
- 重组大肠杆菌产角质酶-CBM摇瓶发酵优化及分泌表达研究被引量：4
- 2011年
- 在TB培养基的基础上,通过单因素分析和正交设计对重组大肠杆菌产角质酶-CBM发酵进行优化,得到最适培养基的组分为:甘油5 g/L,蛋白胨16 g/L,MgSO4.7H2O 2.5 mmol/L,K2HPO413.7 g/L,KH2PO41.53 g/L,菌体生长至对数前中期时添加终浓度为1 g/L乳糖和0.75 g/L甘氨酸,30℃发酵48 h,角质酶-CBM产量可达63 U/ml,较TB培养(20 U/ml)提高了近3倍。考察了热激作用、渗透调节物质及温度两控制对角质酶-CBM分泌表达的影响,在添加Lactose和Glycine后,发现在添加终浓度为75 mmol/L的L-脯氨酸,37℃热激1 h或47℃热激0.5 h,变温至25℃发酵,角质酶-CBM产量可达90 U/ml,较TB恒温培养提高了近四倍。
- 郭森吴丹陈晟吴敬陈坚
- 关键词：正交设计渗透调节物质
- 一种嗜热细菌来源角质酶的分离纯化及酶学性质被引量：4
- 2009年
- 通过跟踪发酵液中pNPB水解酶活性,对角质诱导的Thermobifida fusca发酵液进行分离纯化.采用活性炭脱色、硫铵沉淀、Phenyl HP疏水色谱、DEAE Sepharose阴离子交换色谱等方法,分离纯化得到电泳纯pNPB水解酶.该酶水解角质可得到角质单体,是一种角质酶.SDS-PAGE电泳结果显示,角质酶表观分子量约为29×103.该酶的最适温度为60℃,在40℃和60℃下均具有良好的热稳定性.最适pH为8.0,pH稳定范围为6.0～9.0.该角质酶的生化性质适合在纺织工业中应用.
- 陈晟陈坚吴敬
- 关键词：嗜热细菌分离纯化酶学性质热稳定性
- 聚酰胺酶的克隆表达及其在锦纶改性中的应用
- 在纺织工业中PA俗称尼龙或锦纶,是纺织三大合成纤维之一,由于耐磨性高、弹性好、拉伸恢复能力强、摩擦系数低的优点,使其在纺织工业中具有重要应用.然而作为高分子聚合物,PA的手感和润湿性较差,需要对其进行改性,以达到优良的吸...
- 郭迎春陈晟吴丹吴敬
- 关键词：纺织工业锦纶改性处理克隆表达
- 文献传递
- Bacillus circulans来源β-半乳糖苷酶在Bacillus subtilis中的表达、性质及发酵优化被引量：1
- 2022年
- 低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)是一种具有天然属性的功能性低聚糖,因其优良的益生功能以及在高温和低pH下较高的稳定性而被广泛应用于婴幼儿奶粉等食品中,其主要由β-半乳糖苷酶以乳糖为底物进行生产。为了将具有更高转化率的β-半乳糖苷酶应用于食品领域,该研究首次将Bacillus circulans来源的β-半乳糖苷酶β-Gal-Ⅱ在Bacillus subtilis中进行了异源表达,并对其酶学性质、GOS的制备进行了测定,同时为了降低其工业化应用成本,对重组菌在摇瓶及3-L罐的发酵条件进行了优化。结果表明,重组β-Gal-Ⅱ制备GOS的最适作用条件为50℃、pH 5.0,该条件下GOS转化率在8 h可达最高值60.32%;在摇瓶的发酵条件优化中,以安琪酵母粉和玉米浆干粉各7.5 g/L为复合氮源时,总酶活力最高,可达6.82 U/mL,是TB发酵的1.5倍,单一氮源发酵的2~2.5倍;在3-L罐上进行了33、37℃两个温度的发酵优化,37℃发酵产量优于33℃,最终总酶活力可达138.3 U/mL,是摇瓶发酵的20.3倍。该研究为GOS的工业化生产提供技术基础。
- 许俊勇毕然夏伟夏伟
- 关键词：低聚半乳糖Β-半乳糖苷酶枯草芽孢杆菌发酵优化氮源
- Sulfolobus solfataricus P2 β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的表达及固定化被引量：2
- 2018年
- 研究室获得1株来源于Sulfolobus solfataricus P2的β-半乳糖苷酶突变体F441Y,该突变体具有转苷性高,热稳定性好的特点。研究中,成功将β-半乳糖苷酶突变体F441Y在枯草芽孢杆菌中进行重组表达,3 L发酵罐发酵80 h后胞内酶活达到76.5 U/m L。鉴于β-半乳糖苷酶为胞内表达,为提高酶的使用效率并降低酶的成本,以2%的海藻酸钠、1%的明胶混合作为固定化包埋载体,2%氯化钙为固化液,0.5%的戊二醛为交联剂对重组菌进行细胞的固定化,全细胞酶活回收率达到62%,将该固定化细胞进行乳糖的酶转化,优化酶转化条件后,低聚半乳糖的最高转化率高达55.1%。
- 刘动斌刘莉娜吴敬陈晟
- 关键词：Β-半乳糖苷酶枯草芽孢杆菌发酵固定化
