梁俊毅
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广州市第一人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 喉癌Hep-2细胞来源的exosomes的发现和鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的：观察喉癌Hep-2细胞可否分泌exosomes,并从形态学角度鉴定。方法：大量培养喉癌Hep-2细胞,热休克处理,收集培养上清。先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质。采用Exosome Isolation Kit（商品化试剂盒）收集培养上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对exosomes做鉴定。结果：成功从喉癌Hep-2细胞培养上清中分离提取出exosomes,电镜观察见exosomes呈圆形或椭圆形双层膜的囊泡状结构,直径约20～100nm,密度较高,分散均匀。结论：首次发现喉癌细胞自身能分泌exosomes,为喉癌免疫治疗做出新的探求。
- 吉晓滨梁俊毅刘启才谢景华
- 关键词：喉癌细胞EXOSOMEKITEXOSOMES透射电子显微镜
- 喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取方法的比较被引量：2
- 2015年
- 目的:对分离提取喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 2种方法进行对比,展现不同方法的优缺点,为选择分离提取包括喉癌Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源exosomes的方法提供参考。方法:大量培养喉癌Hep-2细胞,42℃热休克处理。收集90ml培养上清液,先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,再利用蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法,将上清液浓缩提纯;收集培养上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对2种方法所得的exosomes浓缩液分别鉴定,作出评价。结果:2种方法均能成功地从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes。单个高倍视野下,蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法提取exosomes分散性较好,但密度较低,背景见杂质较多;Exosome Isolation Kit所提取exosomes排列紧密,密度较高,背景杂质较少。结论:2种方法各具特点,均是较理想的exosomes分离提取方法。利用Exosome Isolation Kit分离提取exosomes具有样本量少、提取时间短、步骤简单、产物量大等优点,为喉癌Hep-2来源exosomes的分离提取提供了较好的选择。
- 梁俊毅吉晓滨刘启才谢景华
- 关键词：EXOSOMESEXOSOMEISOLATIONKIT
- 喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取和鉴定
- 2015年
- 目的观察喉癌Hep-2细胞能否分泌exosomes,并从形态学角度鉴定。方法大量培养喉癌Hep-2细胞,热休克处理,收集培养上清液。通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,利用超滤离心技术联合蔗糖密度梯度离心法,将上清液浓缩提纯,透射电镜对exosomes做鉴定。结果成功从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes,电镜下观察exosomes呈圆形或椭圆形双层膜的囊泡状结构,直径约20~100 nm,密度较高,分散均匀。结论较先发现喉癌细胞自身能分泌exosomes,为喉癌免疫治疗做新的探求。
- 吉晓滨梁俊毅刘启才谢景华
