陈庆华
- 作品数：16 被引量：22H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人B7逆转录病毒基因转移体系的建立及在肾癌细胞中的表达
- 1998年
- 将人Ｂ７基因亚克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ中，构建了人Ｂ７逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮＢ７，经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导转染包装细胞，并通过Ｇ４１８筛选获得较高病毒滴度的细胞株ＰＡ３１７／ｐＬＸＳＮＢ７（３×１０５～１×１０６ｃｆｕ／ｍｌ）。用此逆转录病毒基因转移体系将Ｂ７基因转移到肾癌ＧＲＣ１细胞中，经ＲＴＰＣＲ、间接免疫荧光及ＬＳＡＢ细胞免疫组化等检测方法检测到转基因细胞中Ｂ７ｍＲＮＡ及Ｂ７分子的表达。介导人Ｂ７基因的逆转录病毒基因转移体系的建立，为人肾癌转基因瘤苗的应用研究提供了实验基础。
- 邢念增张智清张智清郭应禄郭应禄俞莉章朱丽华刘漓波
- 关键词：逆转录病毒载体肾肿瘤瘤苗
- 白细胞介素-11与造血调控
- 1996年
- 白细胞介素-11(IL-11)是源于骨髓基质细胞的造血生长因子家族中又一新的成员,具有多种生物学活性,在造血调控中起着重要调节作用。本文就IL-11的发现与命名、基因结构、生物学活性和IL-11受体作一综述。
- 李小宇陈庆华
- 关键词：白细胞介素造血调控
- 阳离子脂质体联合转铁蛋白对人肿瘤细胞的靶向基因转染被引量：6
- 2005年
- 目的研究阳离子脂质体联合转铁蛋白(transferrin ,Tf)介导报告基因虫荧光素酶基因对人肿瘤细胞的靶向转染。方法比较阳离子脂质体Lipofectin、Lipofectin联合含双铁的人转铁蛋白[HTf(Fe) 2 ]介导质粒pDR2 luc转染人肝癌细胞株HepG2 、SMMC772 1、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7的转染效率,转染效率通过以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性估计。结果除COS7外,其余3株细胞以Lipofectin联合HTf(Fe) 2 介导pDR2 luc的转染效率均比单用Lipofectin的转染效率高(P <0 0 1) ,其中HepG2 与SMMC772 1中的转染效率增高8倍多,GRC中的转染效率增高4倍多。结论Lipofectin联合HTf(Fe) 2 介导质粒pDR2 luc转染细胞时对人肿瘤细胸株有一定的靶向作用。
- 程香普马军段芳龄张智清陈庆华金中奎郭敏陈香宇
- 关键词：脂质体转铁蛋白基因转染细胞株基因治疗
- 转hGM-CSF基因肿瘤细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究被引量：1
- 1997年
- 利用逆转录病毒中介基因转移体系将ｈＧＭ—ＣＳＦ基因导入大鼠Ｗａｌｋｅｒ瘤细胞ＷＴ２５６中，经ＰＣＲ和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测证实，ｈＧＭ—ＣＳＦ基因已成功导入ＷＴ２５６细胞，生物学活性检测表明，转基因瘤细胞分泌一定水平ｈＧＭ—ＣＳＦ。转基因细胞经Ｘ线灭活，接种荷瘤的Ｗａｌｋｅｒ瘤模型。
- 宋永胜陈庆华侯云德杨威
- 关键词：基因肿瘤免疫疗法
- 逆转录病毒载体介导人 GM-CSF 基因在 HL-60 白血病细胞的高效转移和表达
- 1997年
- 目的探讨将外源基因导入白血病细胞的条件及可行性，为造血系统恶性肿瘤的基因治疗奠定基础。方法采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包装技术将Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ｈＧＭ－ＣＳＦ导入包装细胞ＰＡ３１７，获得重组逆转录病毒，将重组病毒悬液感染人髓系白血病ＨＬ－６０细胞，经Ｇ４１８筛选出ＨＬ－６０转基因细胞群，应１用ＭＴＴ法测定ＧＭ－ＣＳＦ活性。结果ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测结果证实，ＧＭ－ＣＳＦ基因成功地转移并整合到ＨＬ－６０细胞基因组中，而未转基因和转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞经ＰＣＲ检测未能扩增出特异性片段。经ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ－１检测，转基因细胞分泌的ＧＭ－ＣＳＦ生物学活性为６０～２００ｎｇ／ｍｌ（细胞１×１０６，培养２４小时），而未转基因及转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞培养上清无ＧＭ－ＣＳＦ活性。结论逆转录病毒载体介导的ｈＧＭ－ＣＳＦ基因能在体外培养的人ＨＬ－６０白血病细胞中获得高效的转移和表达。
- 李小宇陈庆华李崇渔邹萍陈燕陈燕张智清侯云德
- 关键词：白血病CSF基因转移
- 逆转录病毒表达载体N2A／hGM－CSF的构建及其在COS－7细胞的初步表达被引量：1
- 1995年
- 用特异性核酸内切酶ＢａｍＨＩ剪切质粒ｐＣＤ／ｈＧＭ－ＣＳＦ，制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段，低融点胶回收后，连接至Ｎ２Ａ载体ＢｇｌⅡ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒Ｎ２Ａ／ｈＧＭ－ＣＳＦ。利用ＤＥＡＥ－葡聚糖介导该重组质粒转化ＣＯＳ－７细胞，收集４８ｈ培养上清液，免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然ＧＭ－ＣＳＦ的活性，而用质粒Ｎ２Ａ转化ＣＯＳ－７细胞，培养上清中未检测出ＧＭ－ＣＳＦ活性。
- 陈庆华路秀华张智清毕秋娜李玉英侯云德
- 关键词：HGM-CSF集落刺激因子逆转录病毒COS-7细胞
- 粒-巨噬细胞集落刺激因子对 Vp16 诱导白血病细胞凋亡的调控作用被引量：7
- 1997年
- 目的：探讨粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对Ｖｐ１６诱导白血病细胞凋亡的调控作用，指导白血病临床治疗中正确使用ＧＭ－ＣＳＦ。方法：在构建高效表达ＧＭ－ＣＳＦ的逆转录载体Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ＧＭ－ＣＳＦ表达系统的基础上，对转ＧＭ－ＣＳＦ基因和未转ＧＭ－ＣＳＦ基因的白血病ＨＬ－６０细胞进行研究。结果：未转ＧＭ－ＣＳＦ基因及转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞经Ｖｐ１６处理后均出现凋亡的特征性表现：ＤＮＡ电泳呈梯状；流式细胞仪ＤＮＡ直方图上呈现特征性的亚二倍体（亚Ｇ１）峰；透射电镜观察细胞形态可见凋亡的特征性改变。结论：Ｖｐ１６具有诱导白血病细胞发生凋亡的作用，而ＧＭ－ＣＳＦ能够抑制Ｖｐ１６诱导的细胞凋亡。以上结果表明，白血病临床治疗中为预防和改善化疗所致骨髓抑制而应用ＧＭ－ＣＳＦ时，应谨慎地选择时机，在化疗前和化疗期间不宜使用，以避免白血病细胞对抗癌药物诱导的凋亡产生抵抗而导致耐药。
- 李小宇李崇渔邹萍陈庆华陈燕陈庆华陈燕侯云德
- 关键词：粒-巨噬细胞集落刺激因子细胞凋亡白血病
- 转人GM-CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性
- 1997年
- 经逆转录病毒载体将人GM-CSF基因导入人膀胱癌细胞株BIU-87细胞中,建立了转基因细胞株BIU/GM。经流式细胞仪行细胞DNA周期分析表明GM-CSF基因的导人及表达对BIU-87细胞的增长无影响。免疫荧光测定发现转GM-CSF基因及表达不能促进BIU-87细胞表面HLA-ABC、DR、DQ抗原的表达。转基因瘤细胞株经6000rad X射线照射灭活后,丧失增殖能力,逐步死亡,但能维持一定水平的GM-CSF分泌活性达两周以上。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。
- 宋永胜郭应禄陈庆华侯云德
- 关键词：膀胱癌细胞株生物学特性GM-CSF
- 阳离子脂质体Lipofectin介导的β-半乳糖苷酶基因在_及GRC细胞株中的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究阳离子脂质体Lipofectin介导的 β 半乳糖苷酶基因在不同肿瘤细胞株中的表达。 方法 :质粒pDCβ在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2 、人肾癌细胞株GRC ,然后用X gal细胞化学染色法检测 β 半乳糖苷酶活性。 结果 :β 半乳糖苷酶活性在HepG2 、GRC中均有表达。结论
- 程香普段芳龄张智清陈庆华李振峰赵治国崔静卢高峰
- 关键词：阳离子脂质体基因转染Β-半乳糖苷酶基因细胞株
- 转人白细胞介素2基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性
- 1996年
- 探讨转基因膀胱癌瘤苗的可行性。采用逆转录病毒载体Ｚｉｐ／ｈＩＬ－２将ｈＩＬ－２基因导入人膀胱癌细胞系ＥＪ细胞中，在体外建立了具有分泌ｈＩＬ－２活性的细胞株ＥＪ／ＩＬ－２。经ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测证实ｈＩＬ－２基因已整合到ＥＪ／ＩＬ－２基因组中。流式细胞仪行细胞ＤＮＡ周期分析表明ｈＩＬ－２基因的导入及表达对ＥＪ细胞的增殖无影响。免疫荧光检测发现ｈＩＬ－２基因的导入及表达不能促进ＥＪ细胞表面ＨＬＡ抗原的表达。放射线灭活后ＥＪ／ＩＬ－２细胞丧失增殖能力，但仍能维持一定水平的ｈＩＬ－２分泌活性达２周左右。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。
- 宋永胜陈庆华侯云德郭应禄
- 关键词：白细胞介素2病毒膀胱肿瘤疫苗
