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卢庄: 作品数：22 被引量：47H指数：5; 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科技计划项目更多>>; 相关领域：生物学理学医药卫生更多>>

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糖蛋白的质谱分析策略: 2004年; Glycoprotein is a kind of proteins widely distributed in the bodies of animals and plants. The identification of its characteristic is very difficult due to the complexity of its structure. In this paper, a serious of methods for glycoprotein analysis was established by mass spectrum. The molecular weight, quantity of N-glycans and sialic acids were determined by matrix-assisted laser desorption time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOFMS) directly. The glycosylation sites of glycoprotein were confirmed by its PMF,which produced by the combination digestion of PNGase F and Endoproteinase. The sequence of glycopeptide was detected by liquid chromatography-mass spectrometry (LCMS). The recombined biotechnologic productions including rhEPO,proUK and Spike protein of SARS coronavirus were well characterized by using these methods.; 蔡耘代景泉张养军卢庄王京兰应万涛钱小红; 关键词：糖蛋白质谱分析分子量糖链结构

麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽过程中的肽键裂解被引量：4: 2009年; 蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切。凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用。麦胚凝集素(W GA)由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一。在本研究中,发现将W GA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败。本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端。这一结果提示:在糖蛋白质组研究中,如果应用W GA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适。; 卢庄王京兰贾伟杨兵蔡耘邓玉林张玉奎钱小红; 关键词：糖肽肽键蛋白质组学

离线与在线二维液相色谱-离子阱串联质谱联用技术应用于人血清蛋白质组分析的对比研究: 血浆蛋白质是构成人体内环境的重要物质基础,也是沟通人体各器官、组织及细胞间微环境的物质基础。由于其具有独特的性质(蛋白质组成、功能及结构形式极端复杂)、重要的生理生化功能及在疾病的诊断、治疗及监控等方面研究中的重要意义而...; 李晓海巩燕卢庄应万涛张养军蔡耘钱小红; 文献传递

天冬氨酸作为非特异性吸附抑制剂在二氧化钛选择性富集磷酸肽中的应用被引量：6: 2010年; 二氧化钛富集法作为目前使用最为广泛的金属氧化物富集磷酸肽的方法,在富集过程中常常对富含天冬氨酸和谷氨酸的酸性非磷酸化肽段存在一定的非特异性吸附作用。这些肽段与磷酸化肽段一同被富集,降低了磷酸肽富集的选择性。传统方法中使用的非特异性吸附抑制剂常会对质谱的电喷雾离子源造成污染,因而限制了其在液相色谱-质谱联用(LC-MS)系统中的应用。本研究将天冬氨酸作为一种新型的非特异性吸附抑制剂加入到二氧化钛富集体系中,并分别对3种和9种标准蛋白质酶切肽段混合物进行富集实验,同时与添加另一种非特异性吸附抑制剂——谷氨酸以及不添加任何非特异性吸附抑制剂的富集体系进行了富集效果的比较。结果表明,天冬氨酸可以有效地提高二氧化钛对磷酸肽富集的选择性。将添加天冬氨酸的二氧化钛富集体系应用于鼠肝全蛋白质磷酸肽的富集中,同样取得了很好的效果,表明天冬氨酸在复杂的生物样本的磷酸肽富集中也同样具有良好的应用前景。此外,由于天冬氨酸在反相色谱中极易被洗脱去除,从而避免了传统抑制剂对LC-MS系统离子源的污染问题。; 迟明毕炜卢庄宋丽娜贾伟张养军钱小红蔡耘; 关键词：二氧化钛天冬氨酸鼠肝

基因重组糖蛋白-rhEPO的质谱分析及麦胚凝集素亲和色谱行为的考察: 本论文以较高浓度的重组人促红细胞生成素(rhEPO)原液为研究对象，建立了生物质谱研究rhEPO一级结构的系列方法，包括分子量、唾液酸含量以及N一糖含量等糖基化性质的测定方法，并用于四种国产rhEPO样品的分析：在此基础...; 卢庄; 关键词：糖蛋白基因重组生物质谱麦胚凝集素; 文献传递

基于强阳离子交换色谱分离的磷酸化肽段富集策略被引量：5: 2008年; 为了在短时间内获得相对含量高的磷酸化肽段,以标准磷酸化蛋白质为模型对强阳离子交换色谱(SCX)分离磷酸化肽段体系的缓冲溶液和梯度设置进行了研究,并用酵母酶切肽段混合物考察了该路线在较复杂的样品中的应用。实验结果表明优化后的体系能够在30min内分离出磷酸肽段,而且非磷酸化肽段的干扰很少,这样便相对提高了磷酸化肽段在质谱仪中的响应强度,重要的是该体系可以对复杂样品进行很好的分离。这说明SCX用于规模化磷酸化肽段富集的策略是可行的。本研究为磷酸化蛋白质组学规模化分析提供了实用技术。; 隋少卉王京兰卢庄蔡耘张养军蔚文峰钱小红; 关键词：磷酸化位点蛋白质组学

改进的^18O同位素标记法标记蛋白质多肽被引量：3: 2010年; 针对18O同位素标记反应两个重要影响因素——肽段分散度和胰酶灭活方法,进行了标记条件的改进和灭活方法的优化。在H218O中加入RapigestTM SF助溶剂并微波辅助加热,使α-酪蛋白胰酶酶切肽段的标记效率得到明显改进(18O/16O峰面积比值>99%)。标记后,对胰酶进行还原烷基化化学修饰彻底灭活,使标记后的肽段稳定性显著提高,放置6d不发生回交反应。对标准蛋白质甲状腺球蛋白酶切肽段混合物标记后的质谱实验结果表明:优化的标记方法能快速稳定地标记蛋白质酶切多肽。; 赵焱卢庄贾伟应万涛钱小红; 关键词：多肽蛋白质组

基于膜超滤的糖肽富集新方法被引量：1: 2009年; 建立了一种用于糖肽富集的新型超滤方法,采用截留相对分子质量为3 000 u的超滤膜,截取相对分子质量大于3 000 u的组分,同时完成糖肽的富集、样本的脱盐及浓缩,简化了操作过程并减少了样本损失。用4种标准蛋白酶切肽段混合物测试方法的有效性,结果表明,采用超滤方法富集后的样品可以多鉴定1个糖肽,且所有鉴定的糖肽丰度远高于未富集的样品。将该方法用于人血浆样本,血浆全酶切肽段的1个SCX组分用超滤法富集后,其鉴定的糖肽数量超过未富集组分的6倍,且糖肽富集的选择性大于85%。该方法为糖蛋白质组学的研究及糖相关生物标志物的开发提供了有力的技术支持。; 卢庄贾伟宋丽娜蔡耘邓玉林张玉奎钱小红; 关键词：超滤

糖蛋白组学研究技术进展及其应用被引量：3: 2008年; 蛋白质的糖基化修饰与蛋白质功能密切相关,糖蛋白组学的相关研究已成为蛋白质组学研究的一个重要分支。本文在综述目前常用的糖蛋白组学技术方法的基础上,重点介绍了近两年出现的新技术策略及其应用。; 卢庄王京兰蔡耘钱小红; 关键词：质谱

基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱研究重组人促红细胞生成素一级结构被引量：10: 2006年; 建立了生物质谱研究rhEPO一级结构的系列方法,包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法,并用于4种国产rhEPO样品的分析;在此基础上优化酶切条件,使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98%,成功鉴定了4个样品中的全部N-糖基化位点以及对分子中两对二硫键进行了结构确证,测定4个样品分子量分别为27754.1±27.4Da、27941.4±23.2Da、27682.5±22.0Da和27914.7±22.5Da;唾液酸含量分别为5.0%、4.8%、5.6%和5.4%;糖含量分别为34.3%、34.7%、34.1%和34·6%。此外还对4种产品在O-连接糖型及N-连接糖型上的区别做了初步探讨。; 卢庄王杉代景泉王京兰张养军应万涛徐友宣钱小红吴侔天蔡耘; 关键词：重组人促红细胞生成素肽质量指纹谱二硫键

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