朱旭东
- 作品数：5 被引量：34H指数：4
- 供职机构：北京生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 以新霉素抗性基因突变体为筛选标志的真核表达载体的构建被引量：4
- 2002年
- 新霉素抗性基因 (neo)是真核表达载体的常用筛选标志 ,neo基因编码新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ) ,能催化G418、卡那霉素等多种氨基糖苷抗生素分子磷酸化而使之失去抗菌活性。通过对真核表达载体的筛选标志基因neo进行定点突变 ,以降低NPTⅡ的活性 ,然后用含neo突变体的真核表达载体pmDNA构建荧光素酶表达质粒 ,稳定转染CHO K1细胞 ,发现表达荧光素酶的阳性细胞比例达到 95 % 。
- 高川朱旭东周晓巍于芳卢柏松黄培堂
- 关键词：新霉素真核表达载体
- Sos恢复系统——一种新型的酵母双杂交系统被引量：3
- 2004年
- Sos恢复系统是一种新型的不依赖转录激活机制的酵母双杂交系统 ,原理是通过蛋白质的相互作用将Sos富集在细胞膜上激活Ras信号通路 ,使得酵母温度敏感缺陷株可以在限制温度下生长。与传统的酵母双杂交系统相比 ,Sos恢复系统的主要优点在于被研究的蛋白质的相互作用发生在胞质而不是核中 ;而且 ,它更适合研究转录因子以及在胞质中行使生理功能的蛋白质。Sos恢复系统克服了传统的酵母双杂交系统的一些限制 ,大大拓展了酵母双杂交技术的应用范围。
- 赵兴卉朱旭东黄培堂
- 关键词：酵母双杂交
- 一种特异识别SV40启动子的人工转录因子的构建被引量：6
- 2003年
- 转录因子是真核表达调控中非常重要的一类反式作用因子 ,通常由DNA结合域与效应域两部分组成 ,而锌指结构是DNA结合域的常见组成单元。人工转录因子就是基于转录因子的这种结构特点 ,人为地选择针对特定序列的DNA结合域与具有特定作用的效应域组合而成。利用噬菌体展示技术 ,筛选到与SV4 0启动子上 9bp序列特异结合的锌指结构 ,再连接KOX1的KRAB域构建了一种人工转录因子。转染实验表明它对SV4 0下游的报告基因的表达有很显著的抑制作用。
- 赵兴卉朱旭东刘娟饶相君黄培堂
- 关键词：人工转录因子锌指
- 人工转录因子研究进展被引量：13
- 2005年
- 转录因子是真核表达调控中非常重要的一类反式作用因子,通常由DNA结合结构域与效应结构域两部分组成,研究发现这两个结构域可以各自独立发生作用。基于转录因子的这种结构特点,可以人为地选择针对特定序列的DNA结合结构域与具有特定作用的效应结构域构建人工转录因子。目前人工转录因子的DNA结合结构域多为C2 H2 型锌指结构,每一个锌指单元由大约30个氨基酸组成,识别DNA双螺旋大沟中相连的3bp序列,并可通过氢键作用与相应的碱基结合;多个锌指可以串联成簇,从而识别并结合较长的DNA序列区域。常见的人工转录因子的效应结构域有激活结构域以及抑制结构域,不同的效应结构域赋予人工转录因子不同的功能。目前人工转录因子已经在基础研究、药物设计以及基因治疗等领域得到了广泛的应用。
- 赵兴卉朱旭东黄培堂
- 用RNaseⅢ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物被引量：8
- 2004年
- SARS冠状病毒是引起重症急性呼吸综合症的主要原因 ,目前尚没有特效药物或疫苗对抗这种新病毒。RNA干涉是指双链RNA可以特异地降解细胞内同源基因的mRNA。在哺乳动物细胞中 ,<30bp的小双链RNA能引起RNA干涉 ,又可以避免干扰素反应。通过体外转录得到SARS病毒 3种基因RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白及核衣壳蛋白部分片段的长双链RNA ,然后用RNaseⅢ有限切割成长度 <30bp的小干涉RNA。同时把上述 3种基因片段分别连接到质粒pGL3 Control中 ,得到的 3个质粒pGL R、pGL S和pGL N可以分别在细胞内转录出荧光素酶 RNA依赖的RNA聚合酶、 刺突蛋白、 核衣壳蛋白的杂合mRNA。上述质粒分别和相应的小干涉RNA共转染HEK2 93F细胞 ,测定荧光素酶活性 ,结果小干涉RNA使相应质粒表达荧光素酶的活性显著下降 ;用逆转录定量PCR反应测量mRNA丰度 。
- 朱旭东党颖冯怡李涛黄培堂
- 关键词：SARS冠状病毒刺突蛋白核衣壳蛋白
