王玲
- 作品数：42 被引量：205H指数：9
- 供职机构：大连医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用CFSE标记检测CD8^+淋巴细胞增殖被引量：4
- 2004年
- [目的 ]介绍一种新的检测淋巴细胞增殖的方法。 [方法 ]用本室构建的重组蛋白疫苗hsp6 5-CAP3对C5 7小鼠进行 3次免疫后 ,分离小鼠的脾细胞 ,以照射灭活的CAP3转基因细胞为刺激细胞 ,在体外刺激淋巴细胞的增殖反应。淋巴细胞在与刺激细胞共培养之前用绿色荧光染料羧乙基锗倍半氧化物 (CFSE)进行标记。在共培养 72h后 ,用PE标记的抗鼠CD8分子的单抗标记淋巴细胞。收集细胞进行FACS检测 ,出现在二维点图左上象限的细胞代表CFSE含量减少的CD8+淋巴细胞 (CD8+CFSElow)即增殖的CD8+淋巴细胞 ,利用流式细胞仪记数左上象限CD8+CFSElow细胞的比例。 [结果 ]经体外刺激的脾淋巴细胞中 ,实验组CD8+CFSElow的平均百分比值为 (16 .4 7± 2 .10 ) % ,对照组CD8+CFSElow 的平均百分比值为 (7.6 9± 1.6 5 ) % (P <0 .0 5 )。 [结论 ]通过FACS结果判定CD8+淋巴细胞发生了特异性的增殖。CFSE标记是一种有效的检测淋巴细胞增殖的方法。
- 王玲王宏刘越坚吴泰华王丽颖于永利
- 关键词：CFSEFACS
- 参芪扶正注射液联合GC方案治疗晚期非小细胞肺癌35例被引量：4
- 2009年
- 目的观察参芪扶正注射液联合吉西他滨与顺铂（GC方案）治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的近期疗效、不良反应、行为状态评分及细胞免疫功能变化。方法观察组35例患者予参芪扶正注射液250ml／次，1次／d，静脉滴注，于化疗前2d开始至每周期化疗用药结束当天为1个疗程，同时予GC方案化疗；对照组35例只给予GC方案化疗。均化疗4个周期后评价疗效。采用流式细胞术检测细胞免疫功能指标。结果观察组有效率31．43％（11／35），中位疾病进展时间4．8个月；对照组有效率28．57％（10／35），中位疾病进展时间4．6个月，两组疗效差异无统计学意义（P〉0．05）；观察组Ⅲ-Ⅳ度粒细胞减少发生率低于对照组（P〈0．05）；行为状态评分较对照组改善明显（P〈0．05）；观察组治疗后CD4／CD8比值及NK阳性细胞百分率均较治疗前提高（P〈0．05）。结论参芪扶正注射液联合GC方案治疗晚期NSCLC粒细胞减少发生率低，可改善患者生活质量，提高患者细胞免疫功能。
- 周涛刘素勤高平张洁王玲
- HIV-1Tat基因的融合构建及在大肠杆菌中的高效表达被引量：7
- 2005年
- 目的: 在E.coliBL21(DE3)中高效表达Tat蛋白。方法: 用PCR方法构建HIV- 1Tat基因全序列, 同时将Tat基因进行定点突变(AAG28替换为CAG, AAG50替换为CAG),以消除天然Tat蛋白的转录活性。将突变的Tat基因与伴侣10(chap10)基因连接后, 共同亚克隆入表达载体pET28a中,并在E.coli中表达, 表达产物用Westernblot进行鉴定。结果: 分别通过 3轮PCR, 成功地构建了Tat基因全序列。构建的重组质粒pET28a- chap10 Tat在E.coliBL21(DE3)中得到高效表达。Westernblot分析表明, 在相对分子质量 (Mr)为24 000处有 1条特异性的带。结论: chap10基因与HIV- 1Tat全基因的融合构建, 使Tat蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为其在爱滋病发病中作用研究奠定了基础。
- 林剑萍王华王玲卫红飞胡晓平王丽颖于永利
- 关键词：HIV-1TAT
- ULBP3基因转染提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性
- 2004年
- 目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos -2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT -PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因 ,构建pcDNA3真核表达质粒 ,以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞 ,用percoll密度梯度离心法分离人外周血NK细胞作为效应细胞 ,以Saos -2细胞和转染ULBP3基因的Saos-2细胞作为靶细胞 ,进行体外杀伤实验 ,比较两组的特异性杀伤率。结果 在效靶比为 3 0∶1时人外周血NK细胞对转染ULBP3基因的Saos-2细胞的特异性杀伤率明显高于对照组。结论 ULBP3基因转染能提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性。
- 王宏王玲李建军徐莘香王丽颖于永利
- 关键词：基因转染外周血NK细胞成骨肉瘤SAOS-2
- 肺鳞状细胞癌癌症发展模式识别分类模型及特征基因识别被引量：3
- 2016年
- 本文利用先进的生物信息学方法，首次从全基因组水平综合基因表达、甲基化水平和拷贝数变异三类数据，寻找与肺鳞状细胞癌（LUSC）发生和发展密切相关的特征基因，为进一步解释其内在机理、开发新的靶向药物和治疗手段提供更加深入的理论依据．为克服全基因组数据超高维高噪声小样本特性对机器学习算法性能的影响，防止信息饱和现象的干扰，本文创新性地组合应用4种特征基因筛选方法，分别从特异性、相关性、生物学功能和对肿瘤分类模型的贡献等多个方面，通过迭代降维技术递归筛选真正的特征基因．研究中，我们以TCGA（The Cancer Genome Atlas projecO数据库中的LUSCI～Ⅲ期病人样本为例，对其基因表达数据（GE）、基因甲基化数据（ME）以及拷贝数变异数据（CNV）进行分析．结果筛选出67个GE特征基因，对3类样本分类的平均准确率达到86．29％，70个ME特征基因，相应的分类准确率为90．92％，31个CNV特征基因，相应的分类准确率为69．16％．KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genesand Genomes）和IPA（Ingenuity Pathway Analysis）对上述3类特征基因集在代谢通路水平和基因调控网络水平上的分析，证明了其在调控水平上的密切关系．同时也表明，识别的特征基因与LUSC肿瘤进展之间有着重要的直接关系，这对了解肿瘤机理以及新靶向治疗的发展非常重要．
- 张飞王世祥王玲宋凯
- 关键词：肺鳞状细胞癌基因甲基化拷贝数变异肿瘤进展模式识别
- 肺腺癌吸烟相关甲基化模式识别分类模型及特征基因的识别研究被引量：2
- 2016年
- 吸烟是导致肺癌的一个重要诱导因素,从全基因组基因甲基化水平出发,利用生物信息学方法,通过建立对当前吸烟/不吸烟样本的模式识别分类模型,识别甲基化特征基因,为揭示不吸烟肺癌患者的患病机理奠定基础。为避免甲基化微阵列数据超高维小样本、高噪声、高相关性以及信息饱和现象淹没真正的特征基因,首次采用迭代多重筛选方法,分别从显著性差异、与基因表达水平的关系、生物功能、分类重要性等多个角度对全基因组甲基化数据进行多步筛选,从而识别吸烟相关特征基因。以TCGA数据库中127个肺腺癌样本为训练集,64个EDRN肺腺癌样本为独立测试集,最终确定了48个关键基因。相应模式识别模型对训练集精度达到87.5%(敏感性、特异性分别为87.2%和87.8%),独立测试集分类精度达到76.4%(敏感性、特异性分别为80.2%和73.6%)。交叉研究表明,其中17个基因对癌症发展的重要性已经在其他研究中有所证实,进一步的研究则证明其甲基化的重要性。同时,KEGG和IPA对特征基因在基因调控网络和代谢通路水平的分析表明,特征基因与癌症的发展以及生物功能、细胞发育等都有着密切的联系。
- 王世祥张飞王玲宋凯
- 关键词：肺腺癌吸烟史模式识别
- 转导人端粒酶逆转录酶基因致人骨髓间充质干细胞永生化并向软骨细胞诱导分化的研究被引量：2
- 2008年
- 目的建立永生化人骨髓间充质干细胞系并向软骨细胞诱导分化，以供软骨组织工程基础研究及临床应用。方法原代培养人骨髓间充质干细胞（hMSC），用含有人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的逆转录病毒转染hMSC，G418筛选得到阳性克隆，体外连续培养，检测端粒酶的表达及活性。TGF-B1和地塞米松对转化后的hMSC-hTERT细胞诱导，使其向软骨细胞分化，并用原位杂交和免疫组化检测Ⅱ型胶原。结果外源性hTERT在转染细胞中稳定表达并传至第50代，永生化的hMSC细胞经TGF-B1和地塞米松诱导在体外分化为软骨细胞。结论外源性hTERT基因可以有效地在体外使hMSC永生化，永生化的hMSC细胞经诱导可在体外分化为软骨细胞，从而作为软骨组织工程研究的细胞来源。
- 齐志明吕刚白彦东王宏王玲
- 关键词：间质干细胞移植软骨细胞人端粒酶逆转录酶永生化
- MSCs对辐射诱导小鼠胸腺瘤中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例变化的影响被引量：5
- 2013年
- 目的观察MSCs对辐射诱导小鼠胸腺瘤中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例变化的影响,探讨MSCs对辐射诱发肿瘤的预防和治疗作用。方法应用Kaplan经典方法制备C57BL/6幼年鼠胸腺瘤模型[1],经小鼠尾静脉输注同系鼠MSCs,6个月后取胸腺组织,将胸腺细胞制成单细胞,标记CD4、CD8、CD45,流式细胞术分析T细胞亚群。结果流式细胞术分析结果显示:照射后CD4-CD8-亚群比例由正常组的(5.11±5.10)%降低到(0.01±0.01)%(P<0.05),MSCs治疗(0.61±0.39)%后有所恢复;MSCs治疗组(91.49±4.47)%中CD4+CD8+亚群比例与正常组(82.44±6.06)%接近,单纯照射组(99.09±0.49)%显著高于正常组(P<0.05);照射后CD4+CD8-亚群由(7.72±3.37)%下降到(0.87±0.49)%,CD4-CD8+亚群由(4.74±2.59)%下降到(0.02±0.01)%,MSCs治疗后CD4+CD8-和CD4-CD8+都有不同程度上调。正常组、单纯照射组、MSCs治疗组中CD45+在CD4+CD8+中的比例分别为(86.09±2.24)%、(0.16±0.03)%、(97.35±3.23)%,差异有统计学意义(P<0.05);单纯照射组CD4-CD8-、CD4-CD8+和CD4+CD8-中CD45+均有不同程度的降低,MSCs治疗组有不同程度升高,且具有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs可使辐射诱导胸腺瘤模型组小鼠胸腺中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例增高或恢复,提示MSCs具有防治辐射诱发胸腺瘤的作用,并对辐射造成的胸腺损伤具有修复作用。
- 王玲张红梅李东红宋新灵国春龙陈玉丙卢日峰
- 关键词：MSCS胸腺瘤CD8CD45
- 沙眼衣原体生殖道感染与机体的特异性保护性免疫应答被引量：31
- 2001年
- 衣原体是一类独特的细菌 ,对人及其他动物具有广泛的致病性。其中沙眼衣原体主要感染人类。沙眼衣原体D K血清型引起的生殖道感染是最常见的细菌性性传播疾病之一。研究表明 。
- 王玲
- 关键词：沙眼衣原体生殖道感染特异性免疫应答
- CTF和CEF方案用于乳腺癌术后Ⅱ期辅助化疗的临床比较分析
- 徐川李丽关小倩张春瑕王玲
