陈健
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼻咽癌肿瘤干细胞中mTOR信号通路的激活及雷帕霉素对其的抑制作用被引量：4
- 2015年
- 目的:研究鼻咽癌肿瘤干细胞中mTOR信号通路蛋白的表达,初步探讨雷帕霉素抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖的机制。方法:用无血清培养法收集鼻咽癌肿瘤球细胞,用CCK8检测成球细胞及CNE2细胞的增殖活性,Western blot检测干细胞标记物蛋白CD44、OCT4、SOX2和mTOR及其信号通路下游相关蛋白P70S6、4EBP1的表达;CCK8法测不同浓度雷帕霉素(0、0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0nmol/L)对鼻咽癌肿瘤球细胞及CNE2细胞抑制率的差异,Western blot检测雷帕霉素作用肿瘤球细胞后mTOR及其信号通路下游相关蛋白P70S6、4EBP1的表达。结果:成球细胞在含血清培养液中增殖较CNE2细胞明显,与CNE2细胞相比,成球细胞OCT4、SOX2呈过度表达(均P<0.05),而在CD44的表达上,2组间差异无统计学意义(P>0.05);在mTOR、P70S6、4EBP1的表达上,2组细胞无明显差异(P>0.05),而在各自激活态的磷酸化水平(P-mTOR、P-P70S6、P-4EBP1)的表达上,成球细胞较CNE2明显呈过表达状况(均P<0.05);不同浓度雷帕霉素作用鼻咽癌成球细胞及CNE2细胞,对比两者半数抑制率浓度,成球细胞为27.59nmol/L,CNE2细胞为78.12nmol/L,雷帕霉素对成球细胞具有更强的抑制作用;不同浓度雷帕霉素作用成球细胞后,P-mTOR、P-P70S6、P-4EBP1的表达随浓度的升高而呈逐渐下降趋势,而mTOR、P70S6、4EBP1的表达差异无统计学意义。结论:鼻咽癌肿瘤干细胞mTOR信号通路蛋白呈过度表达,雷帕霉素可通过干预mTOR信号通路来抑制其增殖活性。
- 张宇林刃舆张子恒陈健杨春光周磊张悦
- 关键词：鼻咽癌肿瘤干细胞MTOR信号通路雷帕霉素
- 大鼠催乳素腺瘤MMQ细胞株肿瘤干细胞样细胞的培养和鉴定
- 2015年
- 目的 探索大鼠垂体催乳素腺瘤MMQ细胞株中肿瘤干细胞样细胞的体外培养条件,并观察其增殖、分化及种植成瘤的特点.方法 采用含表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养液悬浮培养MMQ细胞,获得肿瘤干细胞样细胞球（简称细胞球）,行克隆培养,观察其增殖能力;应用流式细胞技术测定CD133阳性细胞比例,Western blot试验测定细胞球CD133、巢蛋白（nestin）的表达,免疫荧光技术检测细胞球CD133、nestin、归巢细胞黏附分子（HCAM/CD44）、八聚体结合转录因子4（OCT4）、干细胞抗原1（SCA1）的表达,以及细胞球分化细胞的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经微管蛋白（[3-tublinⅢ）和S100蛋白的表达.取雌性裸鼠27只,随机分为细胞球种植组、MMQ细胞种植组和正常对照组,每组9只.皮下种植6周后,测量肿瘤体积及血清催乳素（PRL）水平,肿瘤组织切片行HE染色和免疫组化检测.结果 在无血清培养液悬浮培养条件下,仅少数细胞能存活并形成细胞球,吹散后细胞能克隆增殖成球,细胞球中CD133阳性细胞比例为（1.10±0.17）％.细胞球上CD133、nestin、HCAM/CD44、OCT4和SCA1呈阳性表达;细胞球分化后,细胞阳性表达GFAP、β-tublinⅢ和S100蛋白.细胞球种植组成瘤体积为（1262.2±279.1）mm3,MMQ细胞种植组为（495.9±158.9） mm3,P ＜0.05;细胞球种植组荷瘤裸鼠血清PRL[中位数（P25,P75）]为36.08（34.23,41.42） ng/ml,MMQ细胞种植组为21.51 （20.39,22.98） ng/ml,均高于正常对照组的0.26（0.15,1.03） ng/ml,P＜0.05.肿瘤组织HE染色显示,与大鼠垂体腺瘤相似的特征;免疫组化染色显示,PRL和神经突触素（Syn）表达阳性.结论 大鼠垂体催乳素腺瘤MMQ细胞株中存在少量具有肿瘤干细胞样细胞特性的细胞,并能在体外培养成功.
- 陈健蔡霖宋晓晓陈贤斌黄卡特卢江龙吴哲褒苏志鹏
- 关键词：催乳素瘤体外研究
