白圆圆 作品数:4 被引量:3 H指数:1 供职机构: 军事医学科学院生物工程研究所 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
MERS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达和纯化 被引量:1 2015年 目的构建带有MERS-Co V N(MERS冠状病毒核衣壳蛋白)基因片段的p ET-22b+原核表达载体,并表达和纯化核衣壳蛋白(NP)。方法通过PCR技术扩增NP蛋白基因片段,插入到原核表达载体p ET-22b+上。使用核酸电泳、测序以及小量诱导表达确认所构建克隆的正确性,然后将重组质粒转化进大肠杆菌BL21a(DE3)中,并在大肠杆菌BL21a(DE3)中大规模诱导表达NP蛋白,使用AKTA纯化系统经强阳离子交换层析纯化出NP蛋白。结果测序和小量诱导结果表明,扩增的NP蛋白片段序列正确,所构建的p ET-22b+-NP克隆可在大肠杆菌BL21a(DE3)的包涵体和细胞质中表达;通过阳离子交换层析和浓缩后,蛋白的纯度和浓度都得到明显提高。结论纯化出高纯度、高浓度的NP蛋白,为NP蛋白功能性研究提供重要基础。 付洋波 胡勇 黄成成 白圆圆 邱立红 曹诚 高婷关键词:冠状病毒属 原核表达纯化 钠碘同向转运体上游增强子序列的特异性结合蛋白文库的构建及初步筛选 被引量:2 2016年 目的:构建酵母单杂交文库,筛选出与钠碘同向转运体上游增强子(NUE)特异性结合的蛋白质分子,进一步研究其与NUE相互作用的分子机制。方法:应用酵母单杂交系统,以NUE为酵母单杂交的"诱饵",对甲状腺癌K1细胞的c DNA文库进行初步筛选,采用DNA测序技术及生物信息学技术对筛选的克隆进行进一步功能分析。结果:对文库中的阳性克隆测序,获得53条可读序列,Blast X比对分析及基因功能注释发现其中11条具有DNA结合功能,包括Rho GTP酶激活蛋白35(ARHGAP35)、锌指蛋白394(ZNF394)、上游刺激因子2(USF2)、SOX9等。结论:应用酵母单杂交技术初步筛选出与甲状腺癌K1细胞NUE相互作用的候选蛋白,并对这些蛋白质进行了初步的功能分析。 邱立红 靳彦文 方毅 付洋波 白圆圆 颜芳 朱贵明 曹诚关键词:酵母单杂交 CDNA文库 ROS影响有丝分裂时期细胞内线粒体的形态及分布 2015年 目的利用稳定表达线粒体荧光信号的细胞系,检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)对有丝分裂时期细胞的线粒体形态及分布的影响。方法构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体,经测序鉴定和Western印迹检测正确后,通过病毒包装及感染的方法构建稳定表达线粒体荧光信号的He La s3细胞系He La s3-COX4tp-EGFP;进一步用免疫荧光法观察线粒体在ROS影响下形态及分布的变化。结果成功构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体及稳定细胞系,通过激光共聚焦显微镜观察,发现H2O2处理能显著影响有丝分裂时期细胞线粒体的形态及分布。结论初步证明ROS可影响线粒体有丝分裂时期的形态及分布,为后续研究线粒体功能与细胞有丝分裂的调控奠定基础。 白圆圆 凌有国 胡勇 付洋波 邱立红 颜芳 胥全彬 曹诚关键词:活性氧簇 有丝分裂 线粒体 ROS激活纺锤体组装检查点的作用机制研究 氧自由基具有非常强的氧化作用。活性氧簇(Reactive Oxygen Species,ROS)是这一类物质的统称,主要包括过氧化氢、超氧阴离子和羟基自由基等。通常情况下,人们会把ROS与疾病和衰老联系,因为它能够氧化细... 白圆圆关键词:细胞增殖 活性氧簇 有丝分裂 文献传递