林凯
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：南京农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家科技支撑计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭AdipoR1基因3′UTR区的扩增及真核表达载体的构建
- 1引言脂联素在其受体AdiopoR1/2介导下发挥特定的生物学功能,参与胰岛素抗性调控、平衡糖脂代谢,在免疫疾病治疗炎症、预防动脉粥样硬化和心血管疾病等方面发挥不可替代的作用。AdipoR1主要介导球形脂联素,分布在机体...
- 岳慧洁虞德兵侯英萍林凯张超朱佳伟杨显强杜文兴
- 关键词：转染
- 文献传递
- Solexa测序筛选FSH介导的鸡卵泡颗粒细胞增殖过程中差异表达的miRNAs
- 侯英萍虞德兵于敏莉林凯李佳宜解晓东杜文兴
- siRNA干扰Wnt11对鸭成肌细胞增殖的影响被引量：2
- 2017年
- 为了探究Wnt11(无翅型MMTV整合位点家族成员11)对鸭骨骼肌成肌细胞增殖的影响以及可能与Wnt11相关的信号通路,采用体外分离培养鸭骨骼肌成肌细胞,脂质体介导siRNA(小干扰RNA)转染干扰基因的表达,qRT-PCR(实时荧光定量PCR)检测基因表达变化,Ed U(5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)染色分析细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化及信号通路抑制剂处理。结果显示:干扰Wnt11的表达后,增殖相关基因CCND1(细胞周期蛋白D1)、CDK6(周期蛋白依赖性激酶6)和PCNA(增殖细胞核抗原)的表达量极显著降低(P<0.01),Ed U阳性细胞数极显著降低(P<0.01),处于S期的细胞数显著降低(P<0.05);当用Akt(蛋白激酶B)抑制剂处理鸭成肌细胞后,Wnt11表达量显著降低(P<0.05),而干扰Wnt11表达后,PI3K(磷脂酰肌醇-3-羟激酶)和Akt的表达量显著升高(P<0.05)。提示:Wnt11在鸭成肌细胞增殖过程中有重要调控作用,Wnt11发挥调控作用需要PI3K/Akt信号通路参与,且二者间存在反馈作用。
- 解晓东虞德兵于敏莉林凯何宗亮杜文兴
- 关键词：SIRNA增殖
- 鸭AdipoR1基因3'UTR区的扩增及真核表达载体的构建
- 本文通过对鸭的试验研究，运用套式PCR成功克隆了鸭AdipoRl基因3'UTR区片段，并连接至真核表达载体p1RES2-EGFP上，经In-ner preimer PCR和酶切鉴定，并测序发现突变位点。用Lipofect...
- 岳慧洁虞德兵侯英萍林凯张超朱佳伟杨显强杜文兴
- 关键词：UTR转染
- 鸭PRL基因5'调控区单核苷酸多态性与产蛋性能之间的相关性分析
- 本研究利用PCR-SSCP和测序的方法检测中国四个地方鸭种(连城白鸭、三穗鸭、吉安红毛鸭、莆田黑鸭)的PRL基因5’调控区处的多态性,分析等位基因频率和基因型频率,并和所报道各品种年产蛋量间做了相关性分析,为分子标记辅助...
- 林凯张超侯英萍朱佳伟岳慧洁杨显强杜文兴
- 关键词：PRL基因多态性产蛋性能
- 文献传递
- TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制被引量：12
- 2015年
- 【目的】卵泡抑素(Follistatin)能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积,可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组Follistatin处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞,阐明TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化14 d的鸭胚为试验材料,采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞,待细胞长到70%—80%时,将培养基换成含有浓度分别为0、1、10、100 ng·m L-1的Follistatin培养基,继续培养36 h后,采用CCK-8检测骨骼肌卫星细胞增殖情况;使用抗pax7抗体染色,DAPI染核,鉴定骨骼肌卫星细胞;采用real-time q PCR方法检测Follistatin对骨骼肌卫星细胞增殖过程中的标记基因PCNA、生肌因子基因Myo D和TGF-β信号通路中TGF-β、Smad2和Smad3的表达的影响。【结果】在倒置显微镜下观察,传代培养12 h鸭骨骼肌细胞一部分未贴壁呈圆形,一部分贴壁呈梭形。24 h后细胞全部贴壁,细胞略有变长。2 d后细胞继续增多,且呈长梭形。3 d后细胞数目增加,个别细胞融合。4 d后细胞数目进一步增加,细胞变粗,个别细胞融合。5 d后有少量细胞开始分化,细胞进一步融合。Pax7免疫荧光染色分析显示,95%以上的细胞中Pax7呈阳性表达;CCK-8检测细胞增殖分析表明,不同浓度的Follistatin处理鸭骨骼肌卫星细胞后,各处理组细胞增殖均显著高于对照组(P<0.01),且10 ng·m L-1 Follistatin处理鸭骨骼肌卫星细胞增殖效果最明显,为最佳处理浓度;与对照组相比,10 ng·m L-1 Follistatin处理组的Myo D基因表达量显著下降(P<0.05),PCNA基因表达量显著升高(P<0.05),Myf5基因表达量显著升高,TGF-β和Smad2基因表达显著升高(P<0.05),且Smad3基因表达量极限著升高(P<0.01);Western blotting检测蛋白表达水平结果表明,与对照组相比,TGF-β、Smad2和Smad3磷酸化水平也显著升高。【结论】10 ng·m L-1 Follistatin能显著促进鸭骨骼肌卫星细胞增殖,这
- 林凯虞德兵解晓东于敏莉李东锋杜文兴
- 关键词：骨骼肌卫星细胞增殖
- 鸭PRL基因5'调控区单核苷酸多态性与产蛋性能之间的相关性分析
- 本研究利用PCR-SSCP和测序的方法检测中国四个地方鸭种(连城白鸭、三穗鸭、吉安红毛鸭、莆田黑鸭)的PRL基因5'调控区处的多态性,分析等位基因频率和基因型频率,并和所报道各品种年产蛋量间做了相关性分析,为分子标记辅助...
- 林凯张超侯英萍朱佳伟岳慧洁杨显强杜文兴
- 关键词：遗传育种产蛋性能
- 文献传递
