在已获得α1,3-半乳糖基转移酶(al,3-galactosyltransferase,GGTAl)基因双敲除猪的基础上,建立GGTAl双敲除猪和普通猪的耳成纤维细胞系。利用正常人血清(Normal Human Serum,NHS)、灭活人血清(Heat-Inactivated Human Serum,HIA-HS)和胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)处理经钙黄绿素(CalceinAM)染色细胞。通过流式细胞仪检测细胞荧光强度和凋亡情况。结果显示,经NHS处理的GGTAl双敲除猪细胞死亡率(<10%)比普通猪细胞死亡率(>40%)显著降低,证明细胞表面的α1,3-半乳糖基(α1,3-galactosyl,a1,3Gal)明显减少,在异种器官移植研究中抑制免疫排斥反应起到一定的作用。
基因敲除是一项重要的高新生物技术,在现代农业发展及医学研究领域起着重要作用。基因敲除技术从传统的同源重组、杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)、体细胞打靶发展到新型基因敲除技术—锌指核酸酶技术(zinc finger nuclease,ZFN)及转录激活因子样效应核酸酶(Transcription Activator Like Effectors Nuclease,TALEN)技术等。文章综述了以上几种基因敲除技术在大中型动物上的应用进展。
