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猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立被引量：9: 2016年; 【目的】建立一种定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法。【方法】用RTPCR方法扩增PRRSV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRRSV-N基因重组质粒作为模板来进行检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量PCR扩增。【结果】PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR的扩增效率为98.2%,标准曲线的决定系数为0.9995,可准确检测的最低核酸模板浓度为60copies/μL,重复性试验的变异系数小于3%,对3种常见的猪源RNA病毒的检测结果全为阴性。临床检测显示,PRRS病猪的血清中PRRSV载量极显著(P<0.01)高于PRRSV亚临床感染猪。【结论】建立了一种可用于PRRSV定量检测与PRRS早期快速诊断的特异性强、灵敏度高、重复性好的PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。; 单晶晶陈天慧于红欣王立娇周双海; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 SYBR I 荧光定量PCR

猪圆环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为了建立一种定量检测猪圆环病毒1型(PCV1)的实时荧光定量PCR方法,根据PCV1基因序列设计了1对特异性引物,并构建含有PCV1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测PCV1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数为0.999,显示出优良的线性关系;最低可准确检测320copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%;该方法对PCV2、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于PCV1的检测与定量分析。; 于红欣王立娇孟凡伟王俊周双海; 关键词：猪圆环病毒1型 SYBR REAL-TIME PCR

猪圆环病毒1型与2型双重PCR检测方法的建立及应用被引量：7: 2019年; 【目的】建立一种可同时检测猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的双重PCR检测方法并进行临床应用。【方法】对PCV1和PCV2的单项PCR方法分别进行条件优化后对两种病毒的双重PCR进行条件优化并进行特异性与敏感性试验,然后用单项PCR方法和双重PCR对临床样品进行比较检测。【结果】双重PCR检测方法对PCV1和PCV2的检测灵敏度分别为1.7×10~3、4×10~3 copies/μL,该方法对当前常见猪源DNA病毒的检测结果都是阴性。该方法对2013—2017年15个猪场的145份断奶仔猪样品的检测结果显示,PCV1和PCV2的个体阳性率分别为11.7%和77.2%,与单项PCR方法检测结果无显著(P>0.05)差异,且两种方法检出的PCV1或PCV2的阳性猪场完全一致;临床样品中PCV2的猪场阳性率与个体阳性率都极显著(P<0.01)高于PCV1。【结论】建立了一种有较高敏感性与特异性的PCV1和PCV2的双重PCR检测方法,当前猪场中PCV2感染较PCV1感染明显占优势。; 王立娇胡胜云张雪张雪于红欣周双海; 关键词：猪圆环病毒1型猪圆环病毒2型双重PCR

猪细环病毒1型感染与猪繁殖与呼吸综合征的相关性分析被引量：2: 2016年; 【目的】分析猪细环病毒1型(TTSuV1)感染与猪繁殖与呼吸综合征(PPRS)的发生是否存在相关性。【方法】采集40头临床疑似PRRS病猪血清和40头同群健康猪血清,确认PRRS病猪与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)亚临床感染猪,用荧光定量PCR方法检测TTSuV1和PRRSV载量,进行差异比较和相关性分析。【结果】常规PCR结合荧光定量PCR检测确认有31头PRRS病猪和27头PPRSV亚临床感染猪,前者PRRSV载量极显著(P<0.01)高于后者;虽然PRRS病猪的TTSuV1载量高于PRRSV亚临床感染猪,但其差异不显著。PRRSV感染猪的血清中的TTSuV1载量与PRRSV载量之间无显著(P>0.05)相关性。【结论】TTSuV1感染与PRRS发生之间可能没有相关性。; 陈天慧单晶晶王立娇王俊于红欣周双海; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR 病毒载量

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王立娇