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葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：12: 2016年; 根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)RNA2序列设计4对特异性引物,通过引物筛选、体系优化,建立了以FL-HP1-F/R为引物的GFLV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。该方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998,灵敏性分别是常规RT-PCR和巢式RT-PCR的100倍和10倍。重复性试验表明组内和组间变异系数均小于2.59%,显示该方法具有较好的检测稳定性。内参基因的稳定性测试结果表明葡萄EF1和GAPDH基因具有较好的试验稳定性。利用建立的荧光定量方法测定12个葡萄样品中GFLV含量,并检测58个葡萄样品,结果表明不同葡萄样品中GFLV含量差异较大,最高含量是最低含量的81 245.5倍,与ELISA和巢式RT-PCR相比,实时荧光定量方法能检测出更多的GFLV分离物。; 周俊范旭东董雅凤张尊平胡国君任芳李正男; 关键词：葡萄葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR

酵母pac1基因介导对葡萄B病毒的抗性被引量：1: 2015年; 为明确广谱性抗病毒基因—酵母pac1基因对葡萄B病毒（Grapevine virus B,GVB）的抗性效果,通过农杆菌介导的遗传转化,将pac1基因导入西方烟37B,对转基因植株进行PCR鉴定及Southern blot分析,通过病毒摩擦接种观察症状以及实时荧光定量RT-PCR检测植株体内病毒含量,并对转基因植株抗病性进行初步鉴定。结果表明,目的基因pac1成功导入并整合至西方烟37B基因组,共获得10个转基因株系。不同株系的T1代烟草中阳性植株比例为16.7%~72.7%,表明目的基因可成功遗传到子代。接种病毒后转基因植株普遍延迟发病,但后期症状与非转基因对照相似,其中仅1个转基因株系B6具有不表现典型症状等抗性反应。接种植株病毒含量检测中,所有转基因植株均检测到病毒存在,但表现为抗病的B6株系中病毒含量显著低于非转基因对照,表明该转基因植株虽不能完全抵抗GVB侵染,但对GVB具有耐病性。; 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君周俊; 关键词：抗性

葡萄病毒研究最新进展被引量：13: 2014年; 对近5年关于葡萄病毒分离鉴定、基因组及遗传变异、传毒介体、寄主互作、检测技术、脱毒和抗病毒技术等方面的最新研究进展进行了综述。; 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君周俊; 关键词：葡萄病毒

苹果组培苗热处理结合化学处理的脱毒方法: 本发明公开了一种苹果病毒脱除方法。该方法是将苹果组培苗茎尖接种于含15-25μg/mL病毒醚的培养基中，升温至34-36℃条件下进行恒温热处理。本发明的优点为：植株的存活率高、脱毒效果好、所需时间短，选用的化学药剂不具有...; 胡国君董雅凤张尊平范旭东任芳周俊; 文献传递

葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备被引量：2: 2016年; 根据已报道的葡萄病毒B(Grapevine virus B,GVB)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从葡萄中扩增获得GVB外壳蛋白基因(cp),大小为594 bp。通过序列测定和分析,选取优势分离物GVB-JFL cp基因克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化融合蛋白pET-GVB CP。SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白获得过量表达,分子量约26 kD。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗血清。采用间接ELISA和dot-ELISA对抗血清特异性进行检测,结果表明,抗血清可与感染GVB的西方烟和葡萄样品发生阳性反应,与健康植株及感染同属另一种病毒葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)的样品不反应,阳性样品检测效价达1︰4 000,16个田间样品摩擦接种至烟草后有9个样品ELISA检测为阳性,表明制备的抗血清可用于GVB的特异性检测。; 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君李正男周俊; 关键词：外壳蛋白原核表达抗血清

植物类病毒脱除技术进展被引量：9: 2017年; 类病毒是已知最小的植物病原物,可侵染蔬菜、果树以及花卉等多种农作物,并对农业生产造成严重影响。目前,对感染类病毒的植株进行脱毒处理是一种有效的防控措施,本文针对果树、蔬菜和花卉上几种常见的类病毒,综述了茎尖培养、热处理结合茎尖培养、低温处理、超低温处理、化学处理及不含叶原基的顶端分生组织再生等植物类病毒的脱除技术,分析了不同方法的应用效果及所适合脱除的类病毒种类,同时展望了类病毒病害在未来植物病害防控中的重要地位,并提出综合考虑各种因素、制定合理方案、选用适宜方法的类病毒脱除建议。; 胡国君董雅凤张尊平范旭东任芳周俊; 关键词：脱除方法

酵母pac1基因转化烟草及其对葡萄B病毒的抗性: 目前全世界已报道63种病毒可侵染葡萄(Vitis vinifera L.),我国种植的葡萄品种也普遍感染病毒,造成葡萄产量和品质大大下降,培育抗病品种是防控葡萄病毒病的重要途径。葡萄生长周期长、基因型复杂,传统杂交育种方...; 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君周俊; 关键词：抗性; 文献传递

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周俊