吴成林
- 作品数：15 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金海军总医院创新培育基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 天然生物活性N-酰基高丝氨酸内酯小分子抗原的化学合成及其抗体生成初探
- 2017年
- 目的人工合成N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylated homoserine lactones,N-aHSLs)完全抗原并制备相应单抗,建立N-aHSLs免疫检测的新方法及海洋弧菌N-aHSLs动态监测。方法以月桂酸和高丝氨酸内酯为主要原料,通过多步系列化学反应人工合成N-十二酰高丝氨酸内酯(N-lauroyl-homoserine lactone,N-C_(12)-HSL)及含羧基活性交联基团的半抗原衍生物12-羧基-N-十二酰高丝氨酸内酯(12-carboxyl-N-decanoyl-L-homoserine lactone,12-CD-LHL),用1H-磁共振、高压/效液相色谱仪和液相色谱-质谱联用方法确证合成产物的结构,并用生物感应法检测合成N-aHSLs的天然生物活性;用N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯法将12-CD-LHL半抗原衍生物连接到载体蛋白;将N-C_(12)-HSL人工完全抗原通过传统单抗制备技术,获得抗N-aHSLs杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法鉴定其特异性和效价。结果质谱、磁共振氢谱分析结果与理论预测相同,成功合成目标产物N-C_(12)-HSL和12-CD-LHL半抗原衍生物;所合成的N-aHSLs能够分别激活生物感应菌株大肠杆菌MG4和紫色色杆菌026并使之显色;紫外吸收光谱扫描结果显示,半抗原已分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白发生偶联,成功制备完全抗原;共获得3株抗N-C_(12)-HSL单抗,均具有良好的免疫反应性。结论 N-aHSLs完全抗原和相应的单抗制备为N-aHSLs动态监测和后续研究奠定了基础。
- 付凯飞王欲晓李军吴成林周丽君
- 关键词：单抗
- 抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建被引量：1
- 2015年
- 目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干涉方法测定亲和力,再经同源重组方法构建完整抗体的真核表达载体,通过PCR及序列测定对构建的载体进行验证。结果:经过4轮筛选,获得15种与FKBP52特异结合的噬菌体抗体,其中7种得到可溶性表达;序列分析表明,7种单链抗体重链可变区分属VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亚群,轻链可变区分属VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亚群;特异性结合活性较好的4株抗体的亲和常数分别为9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;将亲和力较好的一株单链抗体轻、重链可变区基因分别拼接到含有人κ及Ig G1恒定区基因的p CMV-L和p CMV-H真核表达载体中。结论:筛选获得多株人源抗FKBP52单链抗体,并构建了完整抗体的真核表达载体。
- 丁立熊丽娟王欲晓吴成林付凯飞周丽君
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体真核表达载体
- Beclin1影响乳腺癌细胞对紫杉醇敏感性的研究
- 【目的】Beclin1是细胞自噬的关键调控分子之一,近年来被证实与多种肿瘤细胞的化疗抵抗相关。紫杉醇是目前临床用于治疗乳腺癌的最常用的化疗药物之一。但是,Beclin1在紫杉醇介导的对乳腺癌细胞的杀伤中的作用和机制并不清...
- 吴成林刘剑飞刘妍王欲晓付凯飞于晓杰蒲倩陈秀秀周丽君
- 关键词：BECLIN1紫杉醇乳腺癌细胞凋亡
- 文献传递
- 菌群感应AHLs分子对小鼠肠道菌群多样性影响的分析
- 2019年
- 目的探讨菌群感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactones,AHLs)对小鼠肠道微生物菌群构成的影响,为感染状态下肠道微生态的紊乱补充理论依据。方法 3-oxo-C_(10)-HSL分子经腹腔注射小鼠后,于24 h分别在小鼠十二指肠及空回肠部位用拭子涂抹法取样,并通过Illumina Hiseq 2500高通量测序平台对样品16S rDNA测序,并进行微生物菌群分类构成及多样性分析。结果在实验小鼠肠道内共检出22个细菌门,109个细菌属;对照组和3-oxo-C_(10)-HSL处理组小鼠肠道不同部位菌群均以厚壁菌门(>50%)和变形菌门(>20%)为主,但两组在属水平菌群构成有明显差异,对照组优势菌属依次为葡萄球菌、埃希氏-志贺菌、乳球菌、假单胞菌、肠球菌,3-oxo-C_(10)-HSL处理组优势菌属主要为肠球菌、埃希氏-志贺菌、葡萄球菌;多样性和丰度分析提示3-oxo-C_(10)-HSL处理组肠道菌群多样性均有提高,大肠埃希菌属等主要优势菌丰度显著上升,而且空回肠部位的菌落丰度最高。结论 AHLs对小鼠肠道菌群构成影响较小,而对菌群内部某些特定类群结构变化影响较明显。
- 付凯飞李军王欲晓吴成林钦可为周丽君
- 关键词：N-酰基高丝氨酸内酯微生物多样性
- 人源抗创伤弧菌溶血素蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定
- 2016年
- 目的 从天然单链（scFv）大容量噬菌体抗体库中筛选特异性抗创伤弧菌溶血素蛋白（vibrio vulnificus haemolysin,VVH）的scFv并进行初步鉴定.方法 以表达纯化后的VVH为靶抗原,采用酸洗脱的方法从天然大容量噬菌体抗体库中筛选人源抗VVH噬菌体单链抗体,并将噬菌体抗体的上清梯度稀释后感染HB2151菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后获得抗VVH蛋白可溶性单链抗体,ELISA检测其与抗原结合活性,DNA序列测定鉴定抗体序列.结果 经过4轮筛选,共筛选到22株可以与VVH结合的噬菌体阳性克隆,其中8株获得可溶性表达,DNA序列分析表明获得3株可变区基因型不同的单链抗体.结论 利用大容量噬菌体抗体库筛选技术获得抗创伤弧菌溶血素蛋白的可溶性抗体,为创伤弧菌感染的治疗奠定了基础.
- 谢学渊付凯飞王欲晓吴成林周丽君
- 关键词：创伤弧菌
- 创伤弧菌溶血素诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用与机制研究
- 目的:创伤弧菌感染进展迅速、死亡率高,其引起的天然免疫应答反应仍未研究清楚。创伤弧菌溶血素(VvhA)是创伤弧菌重要的毒力因子。为进一步了解VvhA对巨噬细胞的影响,本研究用重组表达的溶血素蛋白(r VvhA)体外作用小...
- 钦可为付凯飞刘剑飞吴成林王欲晓周丽君
- 关键词：巨噬细胞
- 文献传递
- 中国海军特种作战部队医学保障存在的问题及思考被引量：4
- 2018年
- 特种作战是一种极具机动和灵活特点的作战方式,这样的特点使其可以取代大兵团的军事干预行动,成为解决未来包括政治、军事、经济和外交在内一系列争端的重要手段^（[1]）。海军特种作战部队是海军的一个独立兵种,具有全域作战的能力,能够实施快速登陆和担负海岸、海岛防御或支援任务,是国内外高度重视和诸兵种优先发展的军事力量。随着海军任务使命的不断拓展,提升作战能力、完成多样化军事作战任务已成为打赢现代信息化条件下战争的必要条件。
- 史成和吴成林张达矜乔媛媛胡明黄泽平
- 关键词：自救互救
- 紫芪方对失血性休克大鼠肠道通透性的影响被引量：2
- 2016年
- 目的观察紫芪方对失血性休克Wistar大鼠肠道通透性的影响。方法实验采用Wistar大鼠,按照改良Wigger’s法复制失血性休克模型,然后将模型大鼠随机分为正常对照组、失血性休克组、紫芪方组、参附组及蒸馏水组(各组n=6)。除正常对照组和休克组,其他组在给予2倍失血量液体复苏后分别灌胃给予不同干预药物,观察肠道黏膜组织结构变化,并测定血浆内毒素含量、肠道细菌移位情况、血浆D-乳酸含量和血浆二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)含量。结果紫芪方组肠黏膜损伤程度明显轻于失血性休克组。紫芪方组血浆内毒素含量、血浆细菌移位菌落数、肝脏细菌移位菌落数和血浆D-乳酸分别为(177.0±45.0)EU/L、(29±8)CFU、(31±16)CFU、(0.39±0.04)mmol/L,较失血性休克组显著降低(P<0.01)。紫芪方组血浆DAO含量为(0.40±0.06)kU/L,较失血性休克组降低(P<0.05),且紫芪方在降低血浆细菌移位菌落数、肝脏细菌移位菌落数和血浆DAO 3个方面的效应强于阳性对照药物参附(P<0.05)。结论紫芪方对失血性休克大鼠肠道通透性有保护作用,为紫芪方保护肠道屏障功能的有效性提供了重要依据。
- 史成和吴成林张达矜安怀杰李玉军
- 关键词：失血性休克肠道通透性
- 利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体被引量：1
- 2015年
- 目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性sc Fv。
- 蒋效何立东王欲晓丁立吴成林熊丽娟周丽君王育红
- 关键词：人源单链抗体
- 人源性抗人FKBP52 IgG的表达和纯化
- 2016年
- 目的将噬菌体抗体库中筛选到的抗52-k Da FK506结合蛋白(FKBP52)人源单链抗体(sc Fv)转换为完整人IgG并在真核细胞中表达。方法噬菌体抗体库获得的5株抗人FKBP52-sc Fv,PCR扩增其轻重链可变区(V_H/V_κ),利用同源重组技术将5对V_H、V_κ拼接至分别包含有人κ链及IgG1恒定区的真核表达载体p CMV/R-L、p CMV/R-H上,转染HEK293F细胞进行完整抗体表达,ELISA鉴定抗体活性,蛋白A柱分离纯化活性最高的抗体,SDS-PAGE、Western blot法鉴定纯化后抗人FKBP52-IgG。结果 PCR及测序结果证实正确构建得到5对抗人FKBP52真核表达载体,转染HEK293F细胞后经ELISA鉴定均有完整抗体表达,对活性最高的5号克隆进行抗体分离纯化,经SDS-PAGE及Western blot验证获得高纯度的特异性人源抗FKBP52-IgG。结论成功将原核表达的抗人FKBP52-sc Fv转换为真核表达的完整人IgG。
- 丁立熊丽娟王欲晓吴成林付凯飞周丽君
- 关键词：真核表达
