王自文
- 作品数：15 被引量：13H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测
- 王自文董辉赵其平夏伟丽朱顺海门启婓李聪朱雪龙韩红玉黄兵
- 一种防治鸡球虫病的胱硫醚β合成酶基因、疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种防治鸡球虫病的胱硫醚β合成酶基因、疫苗及其制备方法，该基因为Et CBS基因，包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。同时提供一种防治鸡球虫病的疫苗的制备方法：将柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CBS的成...
- 韩红玉黄兵李聪董辉朱顺海赵其平朱雪龙王自文门启斐夏伟丽徐帅兵谢羽翔
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4基因及其应用
- 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫基因，该基因为柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4基因，具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本发明的柔嫩艾美耳球虫基因，是柔嫩艾美耳球虫子孢子阶段高表达的基因，与子孢子入侵宿主细胞相关，对...
- 韩红玉黄兵王自文董辉赵其平朱顺海李聪朱雪龙夏伟丽门启斐唐敏
- 文献传递
- 一种防治鸡球虫病的CHP317基因、疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫基因，该基因为Et CHP317基因，包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。同时提供一种防治鸡球虫病的疫苗的制备方法：将柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP317的成熟肽与大肠杆菌或毕赤...
- 董辉黄兵李聪韩红玉赵其平朱顺海朱雪龙王自文门启斐夏伟丽徐帅兵崔晓霞
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- 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测被引量：1
- 2016年
- 为了筛选出柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶(Et CDPK4)在虫体内发挥作用时的作用受体即相互作用蛋白,构建了能够应用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交c DNA文库的诱饵重组质粒p GBKT7-Et CDPK4,本研究以柔嫩艾美耳球虫子孢子为材料,提取了总RNA,经反转录得到c DNA第一链,利用PCR的方法扩增获得了该基因大小为1660 bp的Et CDPK4的功能区片段,并将其连接于酵母BD诱饵p GBKT7载体上,经双酶切鉴定和序列分析,以及检测了p GBKT7-Et CDPK4在酵母双杂交系统中的自激活、细胞毒性和表达情况。结果显示,成功构建了酵母双杂交诱饵重组质粒p GBKT7-Et CDPK4,在酵母双杂交系统中没有自激活活性和细胞毒性,且在酵母细胞Y2HGold中能够进行表达。表明所构建的诱饵质粒p GBKT7-Et CDPK4可以应用于酵母双杂交系统中,用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交c DNA文库,获得可能与Et CDPK4具有相互作用的蛋白质。
- 王自文董辉赵其平夏伟丽朱顺海门启婓李聪朱雪龙韩红玉黄兵
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶自激活作用细胞毒性
- 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Et STK）基因及其应用
- 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫基因，该基因为Et STK基因，包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。同时提供一种防治鸡球虫病的疫苗的制备方法：将柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et STK的成熟肽与大肠杆菌或毕赤酵母细胞的表...
- 董辉黄兵朱雪龙韩红玉赵其平朱顺海李聪王自文门启斐夏伟丽杨致远
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- 柔嫩艾美耳球虫胱硫醚β合成酶基因克隆及在真核细胞中的表达被引量：3
- 2016年
- 为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2（Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2）的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pCAGGs连接。连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtSIR2基因的表达情况。结果表明：成功扩增了EtSIR2基因,长度为909 bp;Western blot可见大小约为37 kDa的表达蛋白条带;间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了Et SIR2的真核表达质粒pCAGGsEtSIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达。该研究结果为深入研究Et SIR2的生物学特性和球虫DNA疫苗的研制打下了基础。
- 李聪董辉朱顺海朱雪龙王自文赵其平夏伟丽门启斐黄兵韩红玉
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫BHK细胞真核表达
- 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4功能特性的初步研究
- 本文以对鸡危害最为严重的E. tenella为研究对象，对E. tenella新基因EtCDPK4特性、酶活性及在E. tenella发育过程中所执行的功能进行了研究和分析，为探讨E. tenella入侵宿主细胞的机制和...
- 王自文
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因分析蛋白表达功能特性鸡球虫病
- 文献传递
- 四种钙信号蛋白及其在寄生虫学上的初步研究被引量：3
- 2015年
- 不同种类的寄生虫入侵宿主和入侵后在宿主体内生存的机制非常复杂,但是影响这两个过程的主要因素目前已逐渐被揭示。Ca2+是寄生虫体内的一种重要的金属离子,它影响着寄生虫的许多生理生化活动,如运动、信号转导、渗透压的维持等。而Ca2+信号蛋白则是Ca2+能够发挥重要作用的直接承担者,钙离子信号蛋白是直接可以与Ca2+结合的蛋白质,它被Ca2+激活以后又可以与下游和他具有相互作用的蛋白质结合,从而使寄生虫发挥相应的生理生化作用。对能够与Ca2+信号蛋白结合的蛋白进行研究,有助于研制抗寄生虫的新药物和生物制剂,因为它们可能是一种存在于寄生虫体内潜在的新药物受体和靶标,而只有Ca2+信号蛋白被Ca2+活化以后才可以对这一互作蛋白展开深入的研究。本文综述了在寄生虫体内存在的4种Ca2+信号蛋白的重要性质和作用机制,对开展寄生虫Ca2+信号蛋白及其下游的互作蛋白的研究提供了一个比较基础的材料。
- 王自文韩红玉黄兵
- 关键词：信号蛋白钙调素钙网蛋白钙依赖蛋白激酶膜联蛋白
- 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达被引量：3
- 2016年
- 为了构建柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Eimeria tenella serine/threonine protein kinase,Et STK)基因的真核表达重组质粒,并实现在DF-1细胞中的表达,以柔嫩艾美耳球虫子孢子c DNA为模板,PCR扩增Et STK基因,将扩展产物与真核表达质粒pc DNA3.1-flag连接,构建重组真核表达质粒pc DNA3.1-flag-Et STK,测序鉴定正确后,转染DF-1细胞进行表达,利用Western blot和间接免疫荧光(indirect immunofl uorescene assay,IFA)对其表达情况进行鉴定。结果表明重组质粒pc DNA3.1-flag-Et STK构建成功。Western blot显示在54 k Da处出现条带;IFA检测到特异性的绿色荧光,表明构建的重组质粒pc DNA3.1-fl ag-Et STK成功地在DF-1中实现了表达。本研究结果为深入了解柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的功能及球虫核酸疫苗提供了基础。
- 朱雪龙黄兵韩红玉赵其平朱顺海李聪门启斐王自文夏伟丽董辉
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫真核表达
