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食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定被引量：2: 2015年; 目的掌握食蟹猴精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立食蟹猴精原干细胞分离、纯化、培养及初步鉴定的方法。方法经手术获取2岁14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用三步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞。将细胞培养于经丝裂酶素C处理的STO细胞层上,使用添加神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、GDNF家族受体α(GFRa1)三种重要生长因子的无血清培养液体外培养,20d后采用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定。结果通过差异贴壁法分离纯化富集的SSCs,接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上,第2天开始分裂增殖。用含有生长因子的培养基培养2 d细胞形成小集落,5 d后细胞集落明显。培养20 d后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达。结论本研究成功建立食蟹猴精原干细胞的分离纯化及鉴定体系。基于STO饲养细胞的添加GDNF、b FGF和GFRa1三种生长因子的无血清培养体系可用于食蟹猴精原干细胞培养,CDH1可作为食蟹猴精原干细胞鉴定的标志物。; 陈鑫苹许邦发罗奋华张培周红桃蔡俊宏吴应积符生苗; 关键词：食蟹猴精原干细胞分离纯化免疫荧光染色

抗磷脂酶A2受体抗体检测在老年人特发性膜性肾病肾组织及血液中的表达被引量：9: 2016年; 目的探讨血液中抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)在老年人特发性膜性肾病(IMN)诊断中的意义。方法分别应用免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法检测老年人IMN患者肾活检组织anti-PLA2R和血液中anti-PLA2R的表达情况,分析其相关性。结果肾活检组织中anti-PLA2R敏感性为75.0%,特异性为95.0%;血液中的anti-PLA2R敏感性为77.5%,特异性为95.0%;血液与肾活检组织中anti-PLA2R结果的相关性分析,阳性符合率96.9%,阴性符合率96.6%,总符合率98.3%;Kappa一致性检验,Kappa=0.996,P<0.001。结论间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R水平与免疫组织化学方法检测肾活检组织中anti-PLA2R的表达呈正相关,可成为体外诊断老年人IMN的特异性指标。; 符克英蔡俊宏符生苗韩叶光王茹张培; 关键词：特发性膜性肾病免疫组织化学方法

老年类风湿关节炎患者血清CXCL-9及CXCL-10表达及临床意义被引量：3: 2019年; 目的探讨血清CXC趋化因子配体(CXCL)-9及CXCL-10在老年类风湿关节炎(RA)患者中的表达及其临床意义。方法选取海南省人民医院收治108例老年RA患者,按照DAS28评分分为低活动组(n=41)和高活动组(n=67),Sharp评分分为非骨侵蚀组(n=48)和骨侵蚀组(n=60)。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清CXCL-9、CXCL-10、类风湿因子(RF)及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体诊断RA的价值。结果RA组血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体水平均明显高于对照组(P<0.01)。高活动组血清CXCL-9〔198.75±56.48)pg/mlvs(124.50±31.83)pg/ml〕、CXCL-10〔54.63±13.85)pg/mlvs(27.46±7.41)pg/ml〕、RF〔(15.36±4.68)IU/mlvs(10.40±2.26)IU/ml〕及抗CCP抗体〔(96.35±18.24)RU/mlvs(83.72±11.60)RU/ml〕水平均明显高于低活动组(P<0.01)。骨侵蚀组血清CXCL-9〔(206.52±60.37)pg/mlvs(118.28±27.63)pg/ml〕、CXCL-10〔(60.74±16.13)pg/mlvs(21.60±6.24)pg/ml〕、RF〔(17.24±5.27)vs(8.52±1.93)IU/ml〕及抗CCP抗体〔(98.73±19.62)RU/mlvs(81.40±10.85)RU/ml〕水平均明显高于非骨侵蚀组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗体诊断RA的临界值分别为104.36pg/ml、25.40pg/ml、9.53IU/ml、54.80RU/ml,四项联合诊断RA的曲线下面积(AUC)(0.920,95%CI:0.862~0.975)最大,其敏感度和特异度为93.0%和86.4%。相关分析显示,RA患者血清CXCL-9、CXCL-10与RF、抗CCP抗体及DAS28评分均呈正相关(P<0.01)。结论血清CXCL-9及CXCL-10高表达与老年人RA活动度和骨侵蚀程度相关,与RF及抗CCP抗体四项联合检测有助于提高老年RA诊断的价值。; 韩叶光符生苗符克英王茹张培; 关键词：类风湿关节炎

IIF与ELISA在抗磷脂酶A2受体抗体检测中相关性被引量：3: 2015年; 目的分析间接免疫荧光法(IIF)与酶联免疫吸附法(ELISA)对抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)检测的相关性。方法应用IIF与ELISA检测特发性膜性肾病患者血液中的anti-PLA2R,并分析两种检测方法的相关性和临床应用的可行性。结果 IIF法检测血液中的anti-PLA2R敏感性为76.7%,特异性为98.3%;ELISA法检测血液中的an-ti-PLA2R,敏感性为73.3%,特异性为95.0%,两种方法敏感性和特异性比较差异无统计学意义(P>0.05);两种方法相关性分析结果发现,其阳性符合率为93.6%,阴性符合率为95.9%,总符合率为95.0%,Kappa一致性检验的Kappa为0.895。结论 IIF法与ELISA法检测血液中anti-PLA2R的结果相关性高,均可成为体外诊断特发性膜性肾病的特异性指标,两者有互补性,能为不同条件的实验室提供选择。; 符克英蔡俊宏符生苗韩叶光王茹张培; 关键词：特发性膜性肾病间接免疫荧光法酶联免疫吸附法

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞miR-125b及miR-145的表达及临床意义被引量：4: 2018年; 目的探讨miR-125b及miR-145在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其临床意义。方法选取海南省人民医院收治的136例SLE患者,采用SLE病情活动指数(SLEDAI)评分将其分为低活动组(n=75)和高活动组(n=61),另选取60例健康体检者作为对照组。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测各组PBMC中miR-125b及miR-145水平,分析其对SLE患者的诊断价值。Pearson相关分析SLE患者miR-125b及miR-145水平与抗双链DNA(dsDNA)抗体、C3、C4、IgG、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及SLEDAI评分的相关性。结果 SLE组、高活动组和低活动组抗dsDNA抗体、ESR、IgG及CRP水平均明显高于对照组(P<0.05),而C3及C4水平均明显低于对照组(P<0.05)。SLE组、高活动组和低活动组PBMC中miR-125b(0.84±0.23、0.42±0.09和1.53±0.28 vs 6.12±1.83)及miR-145(0.68±0.17、0.35±0.06和1.12±0.20 vs 2.15±0.64)表达水平均明显低于对照组(P<0.01),且高活动组PBMC中miR-125b(0.42±0.09 vs 1.53±0.28)及miR-145(0.35±0.06 vs1.12±0.20)表达水平明显低于低活动组(P<0.01)。SLE患者治疗后miR-125b(2.60±0.71 vs 0.84±0.23)及miR-145(1.96±0.58 vs 0.68±0.17)表达水平明显高于治疗前(P<0.01),SLE患者治疗后抗dsDNA抗体(96.24±17.20 vs 272.36±64.35)水平明显低于治疗前(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-125b、miR-145及抗dsDNA抗体三项联合诊断SLE的AUC(95%CI)为0.928(0.871～0.986),其敏感度(90.4%)和特异度(85.0%)较好。相关分析显示,SLE患者miR-125b、miR-145与抗dsDNA抗体、IgG、SLEDAI评分均呈负相关(P<0.05),miR-125b与miR-145呈明显正相关(r=0.805,P<0.05)。结论 miR-125b及miR-145水平在SLE患者PBMC中明显降低,且与SLE病情活动相关,联合抗dsDNA抗体检测对SLE诊断具有一定价值。; 韩叶光符生苗符克英王茹张培; 关键词：系统性红斑狼疮

Rho激酶信号转导通路对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响: 2016年; 目的探讨Rho激酶对醛固酮(ALD)诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含15%FBS的RPMI-1640培养液中,依普利酮(10μmol/L)和Rho激酶抑制剂Y27632(1μmol/L)预处理细胞30 min后,100 nmol/L ALD作用HK-2细胞24或48 h,ELISA法测定培养上清液中Rho激酶蛋白的含量,实时定量PCR检测细胞α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,Western blot测定细胞α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。结果 ALD显著上调HK-2细胞Rho激酶蛋白的表达及α-SMA mRNA和蛋白的表达,减低E-cadherin mRNA和蛋白的表达。Rho激酶抑制剂Y27632及依普利酮可拮抗上述效应。结论ALD可激活HK-2细胞Rho激酶的活化,并通过Rho激酶诱导HK-2细胞间质转分化而加速肾小管间质纤维化的进展。; 符克英魏佳莉蔡俊宏黄海燕韩叶光王茹张培; 关键词：醛固酮 RHO激酶人近端肾小管上皮细胞小管间质纤维化

Nell-1对BMP-9所诱导间充质干细胞分化的调节研究: 张继业符生苗邓立群肖晓岚徐卫华刘元浮张培; 骨形成蛋白(BMPs)是一类重要的成骨因子，已经证实其中BMP 9的成骨能力最强，但由于其还能使间充质干细胞(MSCs)成脂肪分化，如何对BMP 9诱导的MSCs分化进行定向调控，成为了BMP 9用于临床实践的研究重点。...; 关键词：; 关键词：骨形成蛋白组织病理学动物实验

抗磷脂酶A2受体抗体检测在特发性膜性肾病诊断中的意义被引量：8: 2015年; 目的探讨血液中抗磷脂酶A2受体抗体(anti-PLA2R)在特发性膜性肾病诊断中的意义。方法应用间接免疫荧光方法检测特发性膜性肾病患者血液中的anti-PLA2R,以继发性膜性肾病患者及健康献血员作为对照,分析其与肾活检组织中病理诊断的相关性。结果间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R敏感性为76.7%、特异性为96.7%。继发性膜性肾病组仅检出1例阳性,正常组未检出阳性。血液anti-PLA2R与病理诊断的相关性分析发现其阳性符合率为97.9%,阴性符合率为80.8%,总符合率为87.5%,Kappa一致性检验,Kappa=0.752,P<0.01。结论间接免疫荧光方法检测血液中的anti-PLA2R可成为体外诊断特发性膜性肾病的特异性指标。; 符克英蔡俊宏符生苗韩叶光王茹张培; 关键词：特发性膜性肾病间接免疫荧光

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张培

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