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海藻糖对人脑型肌酸激酶热变性的保护作用被引量：1: 2016年; 肌酸激酶(creatine kinase,CK)是研究蛋白质折叠和稳定性的一个理想的模型蛋白。热失活研究结果显示海藻糖能有效防止人脑型肌酸激酶(human brain-type creatine kinase,hBBCK)的热失活和热变性。1.0mol/L海藻糖使hBBCK热失活的半失活温度(Tm)升高4.6℃,活化能由原来的29.7kJ/mol升高到41.1kJ/mol。内源荧光光谱研究结果显示在海藻糖浓度分别为0、0.6、0.8和1.2mol/L时,hBBCK热变性的表观转变温度(T1/2)相应的从43.0℃上升到46.5、47.7和49.9℃。内源荧光和ANS外源荧光光谱研究结果表明海藻糖的疏水作用可能对hBBCK的热稳定性起了重要作用。hBBCK复性动力学试验结果表明海藻糖能有效抑制hBBCK复性过程中聚集体的形成。; 宋青山杨江流贾芳; 关键词：海藻糖热变性

pEASY-E1-Int1表达载体的点突变改造与整合酶的表达分析: 2019年; 整合子—基因盒系统(Integron-gene cassette system)能使耐药基因在细菌种内和种间快速传播。在整合子—基因盒系统中起关键作用的是整合酶,本研究的目的在于克隆与NCBI公布的整合酶DNA序列完全一致的序列,并进一步表达纯化整合酶。采用PCR技术点突变改造pEASY-E1-Int1表达载体上的目的基因整合酶基因,共含5个突变位点,测序比对后,再连接与pEASY-E1 expression表达载体上,转化到BL21(DE3)感受态细胞中,不同浓度IPTG诱导优化表达,经聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting检测分析,结果得到表达产物分子量为33 kD与Ⅰ类整合子整合酶分子量一致的整合酶。本研究为下一步比较野生型和耐药性大肠杆菌整合酶活性提供基础指导。; 贾芳杨江流宋青山梁艳霞王海龙; 关键词：点突变整合酶

临床耐药性表皮葡萄球菌整合子分子检测分析被引量：1: 2015年; 目的了解医院临床耐药性表皮葡萄球菌整合子流行现状,以提高治疗效果。方法对2014年1月-2015年1月的18株临床耐药性表皮葡萄球菌进行回顾性分析,采用PCR方法利用特异性引物进行整合子筛查和分类,用PCR法扩增整合子的可变区,联合测序技术分析整合子携带的耐药基因,分析本地区基因盒的种类。结果 18株临床耐药性表皮葡萄球菌均检出整合子基因,检出率为100%;对整合子阳性菌株整合子进行测序分析,发现18株均为Ⅰ类整合子,对基因盒阳性菌株测序分析显示,基因盒排列为dfr A1+orf C。结论医院感染耐药性表皮葡萄球菌中的整合子主要为Ⅰ类整合子,耐药性表皮葡萄球菌整合子主要携带的是二氢叶酸还原酶耐药基因。; 贾芳梁艳霞杨江流; 关键词：表皮葡萄球菌整合子基因盒

一种耐药性大肠杆菌整合酶活性测定方法: 本发明涉及生物酶活性测定技术领域，特别涉及一种耐药性大肠杆菌整合酶活性测定方法，包括：提取大肠杆菌质粒DNA；以质粒DNA为模板，PCR扩增出编码整合酶的整合子基因intI，并连接到表达载体pEASY‑E1上，再转化到大...; 贾芳杨江流

耐药性大肠杆菌整合子整合酶的克隆与表达: 2016年; 为获得纯化的大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶,采用PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pEASY-T1载体上测序,测序结果与NCBI上公布的耐药性大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶基因完全一致后,再将目的基因克隆到表达载体pEASY-E1 Expression上,将表达质粒载体转化于rosetta感受态细胞中诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western-blot)检测分析。结果表明:表达产物分子量为33 ku,与耐药性大肠杆菌Ⅰ类整合子整合酶分子量一致,为进一步测定酶的活性提供物质基础。; 贾芳杨江流宋青山; 关键词：大肠杆菌整合子整合酶 PCR

苦豆子碱对耐多药大肠杆菌AcrAB-ToLC蛋白表达量影响被引量：2: 2014年; 本文通过微量肉汤稀释法筛选出了2株耐环丙沙星(CIP)、头孢噻肟(CTX)、阿米卡星(AN)、氨苄西林(AM)药物的多重耐药性大肠杆菌,测定了苦豆子碱对大肠埃希菌多重耐药菌株的MIC值为12.5mg/mL,MH肉汤稀释棋盘式法测定环丙沙星联合苦豆子碱、CCCP MIC值,通过计算部分抑菌浓度指数判断环丙沙星联合苦豆子碱呈协同作用,优化试验确定最适宜的逆转条件对耐药性大肠埃希菌进行逆转,对编码外排泵系统中AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白基因进行克隆、测序,同时应用实时定量PCR检测苦豆子碱对多重耐药菌株作用前后AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白的mRNA表达量影响。数据分析发现作用前后编码大肠杆菌外排泵系统AcrA、AcrB、AcrR、ToLC蛋白基因碱基序列未发生变化,但苦豆子碱作用后外排泵系统中AcrA、AcrB蛋白mRNA表达量下降,负调控蛋白AcrR mRNA表达量上升。苦豆子碱从整体上可以抑制耐多药大肠埃希氏菌AcrAB-ToLC的蛋白mRNA表达量,使大肠杆菌多药外排泵AcrAB-ToLC的蛋白mRNA表达量下降,从而恢复大肠杆菌对抗生素的相对敏感性。实验结果为深入研究苦豆子碱逆转耐药性大肠杆菌其它机制提供了依据和参考.; 贾芳杨江流; 关键词：多重耐药实时定量PCR

一种耐药性大肠杆菌整合酶活性测定方法: 本发明涉及生物酶活性测定技术领域，特别涉及一种耐药性大肠杆菌整合酶活性测定方法，包括：提取大肠杆菌质粒DNA；以质粒DNA为模板，PCR扩增出编码整合酶的整合子基因intI，并连接到表达载体pEASY‑E1上，再转化到大...; 贾芳杨江流; 文献传递

耐药性大肠杆菌整合酶整合载体pUC19-attI-400-attC的构建方法: 本发明公开了一种耐药性大肠杆菌整合酶整合载体pUC19-attI-400-attC的构建方法，构建了含有attI和attC重组位点且在attI和attC位点之间间隔440bpDNA序列的重组载体，载体精小，只有3270b...; 贾芳杨江流; 文献传递

苦参碱对多重耐药表皮葡萄球菌整合子intⅠ和dfrA的影响被引量：2: 2015年; 为探索苦参碱对多重耐药表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)整合子整合酶(intⅠ)和二氢叶酸还原酶(dfrA)的影响,试验通过纸片扩散法筛选多重耐药菌株、以肉汤稀释法测定苦参碱对SE的最低抑菌浓度(MIC)和最佳逆转条件;通过普通PCR法测定苦参碱对SE整合子intⅠ和dfrA基因碱基序列的影响;通过荧光定量PCR法测定苦参碱对SE整合子intⅠ和dfrA mRNA表达量的影响,结果显示苦参碱亚浓度作用表皮葡萄球菌后对intⅠ、dfrA基因序列无影响;苦参碱对intⅠmRNA表达量具有抑制作用,而对dfrA mRNA表达量影响不大,结果表明在SE体内苦参碱可从mRNA水平上抑制SE intⅠ的表达量。; 贾芳杨江流邢立群刘文慧; 关键词：苦参碱表皮葡萄球菌整合子整合酶二氢叶酸还原酶

两种生物碱联合氨苄西林对表皮葡萄球菌抗菌作用研究被引量：3: 2014年; 检测盐酸小檗碱和苦参碱联合氨苄西林对表皮葡萄球菌的抗菌作用.利用二倍稀释法、微量棋盘稀释法、时间-杀菌曲线评估法对8株临床分离的表皮葡萄球菌进行药物敏感性测定.结果表明，盐酸小檗碱、苦参碱、氨苄西林单药对表皮葡萄球菌的最小抑菌质量浓度分别为0.8-3.1μg/mL、12.5 mg/mL 和0.5-16.0μg/mL.盐酸小檗碱联合氨苄西林作用于8株分离株后，盐酸小檗碱和氨苄西林的最小抑菌质量浓度分别下降了88%-94%和75%，抑菌浓度指数为0.187-0.498；苦参碱联合氨苄西林作用于8株分离株后，苦参碱和氨苄西林的最小抑菌质量浓度分别下降了80%和75%-94%，抑菌质量浓度指数为0.188-0.450.2种生物碱联合氨苄西林作用于表皮葡萄球菌的时间-杀菌曲线显示，菌落减少量大于等于2 lg N.盐酸小檗碱、苦参碱与氨苄西林联合作用表皮葡萄球菌均具有抗菌协同作用.; 贾芳杨江流刘文慧; 关键词：盐酸小檗碱苦参碱氨苄西林表皮葡萄球菌

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杨江流

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