杨新燕
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用被引量：1
- 2017年
- 目的 制备甲型流感病毒核蛋白（NP）单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 （DE3）表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.
- 张儒轩沃恩康丁建祖方迪陈帅帅杨新燕郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型核蛋白单克隆抗体
- 基于流感病毒血凝素茎部结构域的通用疫苗研究进展被引量：2
- 2018年
- 流感病毒因其变异快、传播速度快、感染性和致病性强等特点严重威胁着人类健康,通用流感疫苗的制备迫在眉睫,流感病毒血凝素茎部结构域因其保守性和诱导广泛保护性免疫的潜能,成为通用疫苗的研究重点,本文就流感病毒血凝素茎部通用疫苗的最新研究进展进行综述。
- 杨新燕沃恩康张儒轩方迪刘亚辉郭潮潭
- 关键词：甲型流感病毒血凝素
- H3N2亚型流感病毒分离株遗传进化分析及其生物特性被引量：3
- 2017年
- 目的 明确人流感分离株A/Guangdong/SKLRD01/2017（简写为SKLRD01）株的序列特征、分子进化及生物学特性.方法 从全球倡议分享流感数据库（GISAD）和美国国立生物信息中心（NCBI）数据库中获取研究所需的流感毒株基因组全序列,通过BioEdit7.0.9软件对比SKLRD01各节段基因与其他相关毒株序列比.用Mega 5.0软件Neighbor-Joining法绘制毒株血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）基因进化树,并全面分析毒株的基因组序列特征、进化、传染性、致病性、药物敏感性和抗原性等.结果 SKLRD01属于典型的H3N2季节性流感病毒,其HA基因属于H3亚型的3C.2a进化分支,此分支毒株已在我国华南地区广泛流行.其NA基因与在全球范围内流行的人H3N2毒株遗传关系接近,此类NA基因在流行株中占主导地位.SKLRD01具备人际间传播的能力,呈现部分高致病性病毒特征,对奥司他韦敏感,对金刚烷胺类耐药.与疫苗株相比,SKLRD01在抗原区仅出现涉及A、C两个表位区的3个氨基酸突变,提示现有疫苗依然有效.结论 SKLRD01属于H3N2亚型季节性流感病毒,未出现较大变异.抗原性有较小漂移,注射现有疫苗依然是最好的预防手段.同时需加强对这类病毒变异的监测,用来及时更新疫苗株,防止流感大流行的暴发.
- 沃恩康杨新燕徐琦方迪刘亚辉郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型H3N2亚型遗传进化分子特性
- 甲型流感病毒M2蛋白胞外域单克隆抗体的制备及其生物特性被引量：3
- 2018年
- 目的 制备甲型流感病毒高度保守的M2蛋白胞外域(M2e)的单克隆抗体,应用于广谱检测甲型流感病毒。方法 将编码鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的FljB基因与编码甲型流感病毒M2e的基因进行融合表达,然后纯化蛋白,利用杂交瘤技术制备M2e鼠单克隆抗体。结果 成功表达并纯化了融合蛋白Flagellin-3M2e。制备的2株抗M2e的单克隆抗体3G3和3G4,抗体效价均为105,均能与流感病毒株PR8、Memphis、Aichi结合。3G3可以对MDCK细胞中甲型流感病毒的M2蛋白进行实时定位。结论 成功制备了M2e单克隆抗体,初步具备了临床检测甲型流感的应用基础。
- 刘亚辉沃恩康杨新燕徐琦杨灿邓冠聪郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型单克隆抗体鞭毛蛋白
- H5N6人禽流感病毒分离株序列分析及其生物学特日期究被引量：1
- 2017年
- 目的分析研究H5N6人禽流感病毒基因组序列特征，明确该病毒的分子进化及生物学特性。方法从GenBank和GISAI中获取人H5N6分离株全序列，通过软件BioEdit7．0．9对各节段基因与其他相关毒株序列进行比对。用软件Mega5．0，Neighbor—Joining法绘制血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）基因进化树，并全面分析病毒株的基因组序列特征、病毒进化及来源、传染性、致病性和药物敏感等。结果H5N6病毒的基因组完全属于禽源特征，根据病毒进化及来源可分为两大类。HA基因都属于H5亚型的2．3．4．4进化支，NA基因都来源于H6N6亚型毒株，属于欧亚谱系。其余6段内部基因分别来自于H9N2亚型或H5亚型2.3.2．1进化支毒株。该病毒尚不能在人与人之间有效传播，呈现高致病性病毒特征，对奥斯他韦敏感，但部分毒株对金刚烷胺类药物耐药。结论H5N6人禽流感分离株并不属于同一毒株，是由H5N1、H5N2、H6N6、H9N2等亚型毒株通过不同组合而重配产生，需加强对这类病毒及其宿主的监控。
- 沃恩康王怡婷杨新燕张儒轩方迪刘亚辉郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型基因组分子特性
- 再生障碍性贫血继发流感病毒感染的危险性研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨流感病毒感染对再生障碍性（再障）贫血模型小鼠造血功能的影响，以期为临床再障合并流感的研究提供参考。方法采用环磷酰胺及甲苯法构建小鼠再障模型，观察再障模型小鼠与正常小鼠血红蛋白和血细胞三系的变化。判断造模效果。用微量病毒接种法判断流感病毒对正常小鼠及再障小鼠血细胞及生存的影响。结果成功建立了小鼠再障模型，再障小鼠的血红蛋白、红细胞、白细胞、血小板计数显著下降，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。与未接种病毒的小鼠相比，正常小鼠微量多次接种流感病毒后除发生一过性体重轻度下降外，血细胞三系均无明显变化；而再障小鼠模型接种病毒后的病死率较正常小鼠接种病毒后显著增高。结论流感病毒感染对正常小鼠的造血功能无明显影响，但可能会导致再障动物病情加重。甚至增加病死率。
- 郭潮潭尤金彪曹毅胡致平陈帅帅沃恩康王怡婷杨新燕张儒轩
- 关键词：贫血流感病毒
- 流感病毒M1单克隆抗体的制备及其生物学特征被引量：2
- 2015年
- 目的制备针对流感病毒基质蛋白M1的单克隆抗体（mAb），为研究流感病毒检测试剂盒提供实验材料。方法以纯化的M1蛋白为免疫原，免疫Balb／c小鼠，将其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合，筛选出分泌抗M1 mAb的杂交瘤细胞，注射小鼠腹腔获得M1mAb，并用辣根过氧化物酶（HRP）标记M1mAb。通过Western印迹法、EUSA、细胞感染免疫染色实验检测所获M1mAb的作用和特性。结果获得能稳定分泌抗流感病毒基质蛋白M1的杂交瘤细胞系，纯化腹水得到M1mAb和HRP—M1mAb。Western印迹法结果显示，M1mAb和HRP—M1mAb能与M1抗原及H1N1、H3N2亚型流感病毒的M1蛋白反应，是针对M1蛋白的mAb；利用ELISA方法研究M1mAb和HRP．M1mAb对M1抗原及流感病毒的检测作用，结果显示它们能检测H1N1和H3N2亚型的甲型流感病毒，而HRP．M1mAb的检测能力比M1mAb强；细胞免疫染色实验显示，M1mAb能结合H1N1和H3N2亚型病毒感染的细胞。结论针对M1蛋白的M1mAb和HRP—M1mAb已制备成功。它们能检测H1N1和H3N2亚型甲型流感病毒，有望应用于流感病毒诊断以及鉴别诊断试剂盒的研发。
- 陈帅帅丁建祖尤金彪沃恩康王怡婷曹毅郭霞杨新燕张儒轩郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型抗体单克隆
- 纳米化蒙脱石衍生物对甲型流感病毒的吸附研究
- 2015年
- 目的研究纳米化蒙脱石衍生物对甲型流感病毒的吸附作用，了解其能否阻止病毒侵入细胞。方法将梯度稀释的纳米化蒙脱石衍生物PTK—RY00101001分别与PR8、Memphis、Aichi3种病毒结合后感染MDCK细胞，利用细胞感染免疫染色方法测定PTK-RY00101001对病毒感染细胞的作用，并通过测定MTr观察PTK-RY00101001对正常细胞的损伤影响。此外，将不同浓度PTK-RY00101001固定的纱布与流感病毒作用．对纱布和剩余病毒液分别进行免疫实验和细胞感染免疫实验，判定PTK—RY00101001对病毒的吸附作用。结果PTK-RY0010100l在25μg／mL以下，对正常细胞几乎无损伤。细胞感染免疫染色试验显示，PTK-RY00101001对流感病毒感染细胞的能力有较强减弱作用。不同浓度PTK-RY00101001固定的纱布与病毒作用后，纱布染色结果显示无明显差异，通过剩余病毒液感染细胞免疫实验，1000和200μg／mL浓度的PTK-RY00101001与纱布固定后，PTK-RY00101001对病毒有一定的吸附作用。结论纳米化蒙脱石衍生物在不损伤正常细胞的浓度下，具有通过吸附甲型流感病毒，从而阻断病毒感染细胞的能力，因此推断其能通过吸附作用而阻止流感病毒入侵细胞。
- 陈帅帅沃恩康张儒轩王怡婷杨新燕郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型
